Патогистологическое исследование
Патогистологическое исследование биопсийного и аутопсийного материала (тканей яичек) производилось в отделении клинической патологии №2, ОГБУЗ «Смоленский областной институт патологии». Материал фиксировали по общепринятым методикам с использованием забуференного нейтрального 10% водного раствора формалина от 5 до 24 часов. Депарафинированные гистологические срезы толщиной 7-8 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по методам ван Гизона и Маллори для выявления компонентов соединительной ткани [26]. Биопсийный материал,соответствующий тканям яичек у лиц с врожденным крипторхизмом, окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по методу ван Гизон.
Микроморфометрическое исследование
После изучения параллельных срезов, окрашенных по дополнительным методикам, в произвольно выбранном участке находили гистотопографически удаленные друг от друга капилляры, что исключало возможность «перекрывания» периваскулярных зон разных капилляров.
Морфометрию и оценку клеточных популяций осуществляли в одном и том же поле зрения (выбранном участке). Каждый последующий участок (поле зрение) центром которых служил капилляр, гистотопографически были удаленны друг от друга и не перекрывались между собой.
В каждом поле зрения измерялась площадь извитых семенных канальцев, площадь сперматогенного эпителия, площадь интерстициальной соединительной ткани. Для полного и унифицированного отображения преобладания одного показателя относительно другого было введено понятие индекса соотношения. Использовали два индекса – канальцево-стромальный (КСИ) и эпителиально-стромальный (ЭСИ).
|
|
|
Расчет канальцево-стромального индекса (КСИ):
Расчет эпителиально-стромального индекса (ЭСИ):
Расчет индексов проводился в каждом исследуемом поле зрения.
Оценка клеточных популяций подразумевала подсчет клеток стромы и паренхимы яичка, подсчитанные в исследуемых полях зрения, центром каждого из полей зрения служил капилляр. Для статистического анализа клеточных популяций при крипторхизме были взяты суммарные количества клеточных популяций стромального и паренхиматозного компонентов тканей яичка:
1) поддерживающие эпителиоциты (клетки Сертоли) (Ск);
2) другие представители сперматогенного эпителия – суммарное количество клеток сперматогенного ряда за исключением Ск (∑Сэ);
3) перитубулярные (миоидные клетки) (Мк);
4) суммарное количество клеточных представителей МСТ – компартментобразующие клетки (фибробласты, Кл) (∑Кк);
5) эндотелиоциты – (Эн).
В зависимости от размеров биоптата (при крипторхизме), анализу подвергались от 3 до 10 полей зрения в микропрепарате.
|
|
|
Микроморфометрическое исследование аутопсийного и биопсийного материала выполнялись на светооптическом микроскопе «Axiostarplus» (CarlZeiss, Германия), совмещённом с видеокамерой «ProgresC10 Plus» (JenopticJena, Германия). Документирование результатов осуществлялось при помощи компьютерной программы «Видео Тест 4.0. Морфология» (Санкт-Петербург), площадь каждого поля зрения при данном увеличении микроскопа х1000 (окуляр х10, объектив х100) составила 38495,18 мкм2.
Дата добавления: 2018-02-18; просмотров: 454; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!