Занятие №9. Тема: Ферменты, строение и свойства. Изучение кинетических свойств, специфичности действия ферментов и модификаторов их активности.
Цель:изучить общее понятие о ферментах, их роли и значении в жизнедеятельности организма; строение ферментов; свойства ферментов. Научиться поставить реакции, подтверждающие специфичность действия ферментов, зависимость скорости ферментативной реакции амилазы слюны от количества фермента, температуры, наличия активаторов и ингибиторов ферментов; сравнить действие амилазы слюны и соляной кислоты на гидролиз крахмала. Проанализировать результаты определений, сформулировать выводы.
Вопросы для обсуждения.
1. Роль ферментов в жизнедеятельности организма.
2. Особенности строения ферментов- протеинов и ферментов протеидов.
3. Понятие и организация активного, субстратного и аллостерического центров молекул ферментов.
4. Специфические и неспецифические свойства ферментов.
5. Коферменты, их виды, апофермент, холофермент.
Выполняемая работа.
Работа №1. Сравнительное действие альфа-амилазы слюны и соляной кислоты на реакцию гидролиза крахмала.
Таблица 1
Сравнительное действие альфа-амилазы и соляной кислоты на реакцию гидролиза крахмала
Принцип метода: ______________________________________________
| № пробирки и ее содержимое | Условия гидролиза | Проба с йодом | Выявляемые продукты | |
| метод | окрашив. | |||
| №1 1мл воды + 5мл 1% раствора крахмала | Вод. баня 38°С 15 минут (или термостат) | 5 капель гидролизата + 1-2 капли раствора йода | ||
| №2 1мл 10% раствора HCl + 5мл 1% раствора крахмала | Водяная баня 100°С 15 минут | 5 капель гидролизата + 1-2 капли раствора йода | ||
| №3 1мл исходной амилазы + 5мл 1% раствора крахмала | Водяная баня 38°С 15 минут (или термостат) | 5 капель гидролизата + 1-2 капли раствора йода | ||
Работа №2. Зависимость скорости ферментативной реакции от количества фермента. Зависимость скорости ферментативной реакции от температуры. Специфичность действия амилазы. Активаторы и ингибиторы амилазы слюны.
Принцип метода: ___________________________________________________
| Материал исследования | Дополнительные условия проведения реакций | Наблюдаемое окрашивание | Выявляемые продукты |
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| амилаза, разведенная 1:5– 1мл | 4мл 1%раствора крахмала, экспозиция 10 минут при комнатной температуре, + 2 капли йода в иодиде калия | ||
| амилаза, разв. 1:10– 1мл | Условия реакции те же | ||
| амилаза, разв. 1:50 – 1мл | Условия реакции те же | ||
| Кипяченая исходная амилаза– 5кап. | 10 капель 1% раствора крахмала, экспозиция 10 минут при комнатной температуре, + 2 капли йода в иодиде калия | ||
| Исходная амилаза– 5 капель | Условия реакции те же 37° - 25 мин. | ||
| Исходная амилаза – 5 капель | 10 капель 1% раствора крахмала, экспозиция 10 минут в ледяной бане, + 2 капли йода в иодиде калия | ||
|
| |||
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| Исходная амилаза – 5 капель | 10 капель 1% раствора крахмала, экспозиция 10 минут при комнатной температуре, + 5 капель реактива Фелинга, нагреть до кипения | ||
| Исходная амилаза – 5 капель | 10 капель 2% раствора сахарозы, экспозиция 10 минут при комнатной температуре, + 5 капель реактива Фелинга, нагреть до кипения | ||
| Исходная амилаза– 5 капель | 20 капель 0,5% раствора крахмала + 10 капель дистиллированной воды, экспозиция 10 минут при комнатной температуре, + 1 капля йода в иодиде калия | ||
| Исходная амилаза – 5 капель | 20 капель 0,5% раствора крахмала + 10 капель 1% раствора хлорида натрия, экспозиция 10 минут при комнатной температуре, + 1 капля йода в иодиде калия | ||
| Исходная амилаза – 5 капель | 20 капель 0,5% раствора крахмала + 10 капель сульфата меди, экспозиция 10 минут при комнатной температуре, + 1 капля йода в иодиде калия | ||
Вывод:_________________________________________________________________________________
Подпись преподавателя __________________
«___»_________20____ г.
Занятие №10. Тема: Механизм действия ферментов. Номенклатура и классификация ферментов. Количественное определение активности альфа-амилазы в сыворотке крови унифицированным методом.
Цель:изучить механизм действия ферментов; номенклатуру и классификацию ферментов; характеристику отдельных классов ферментов. Научится количественно определять активность альфа-амилазы в сыворотке крови амилокластическим методом. Проанализировать результаты определений, сформулировать выводы.
Вопросы для обсуждения.
1. Механизм действия ферментов. Теория Михаэлиса – Ментен.
2. Номенклатура ферментов. Принципы, положенные в основу номенклатуры ферментов.
3. Классификация ферментов, на чем она основана, тривиальные и систематические названия ферментов.
4. Характеристика классов ферментов и основных подклассов оксидоредуктаз, трансфераз, гидролаз, лиаз, изомераз.
5. Применение ферментов в медицине. Ферментодиагностика и ферментотерапия.
Выполняемая работа
Работа № 1 Определение активности a - амилазы в сыворотке крови амилокластическим методом (табл. №1)
Таблица 1
Принцип метода: ___________________________________________________________
| №№ пробирки | Крах-мал | Фосфат-ный буфер 0,1М рН=7,2 | NaCl 30 г/мл | термостат | Сыворотка крови | НCl 1М | Сыво-ротка крови | термостат | НСl 1М | № колбы | Содер-жимое пробирки | Дистил-лирован-ная вода | Р-р йода в К I | Дистил-лирован-ная вода | ФЭК красный светофильтр, 1см, против воды | |
| №1 контроль | 0,5 мл | 0,3 мл | 0,1 мл | - | 0,1 мл | 0,1 мл | 37°С 30 мин. | №1 контроль | 0,2 мл | 40,0 мл | 0,5 мл | до 50 мл | Ек=? | Расчет (Ек - Е оп)0,01*2*1000 Х= Ек *0,1 = ? г/(ч*л) | ||
| №2 опыт | 0,5 мл | 0,3 мл | 0,1 мл | 0,1 мл | - | - | 37°С 30 мин. | 0,1 мл | №2 опыт | 0,2 мл | 40,0 мл | 0,5 мл | до 50 мл | Еоп=? |
В норме: 15-30 г/ч л.
Вывод:______________________________________________________________
Подпись преподавателя __________________
«___»_________20____ г.
Дата добавления: 2018-02-15; просмотров: 949; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!