Первичного выделения энтеробактерий

Стр 1 из 12Следующая ⇒

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Федеральное государственное образовательное учреждение

Высшего профессионального образования

КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ

АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Кафедра микробиологии

Государственное управление ветеринарии

Краснодарского края

Государственное учреждение Краснодарского края

«Кропоткинская зональная ветеринарная лаборатория»

А.А. ШЕВЧЕНКО, В.Н. ШЕВКОПЛЯС,

О. Ю. ЧЕРНЫХ, Л.В. ШЕВЧЕНКО

РЕКОМЕНДАЦИИ

ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ

ЭНТЕРОБАКТЕРИАЛЬНЫХИНФЕКЦИЙ

ЖИВОТНЫХ

КРАСНОДАР, 2008

Авторы:

Шевченко А.А., Шевкопляс В.Н., Черных О.Ю., Шевченко Л.В.

Рекомендации по лабораторной диагностике энтеробактериальных инфекций животных. Краснодар, 2008. 101с.

В рекомендациях освещены возбудители инфекционных болезней животных, вызываемые патогенными энтеробактериями, методы их лабораторной диагностики и питательные среды для выращивания.

Для студентов высших учебных заведений по специальности «ветеринария», аспирантов, научных сотрудников.

РЕЦЕНЗЕНТЫ:

И.А. Болоцкий – доктор ветеринарных наук, зав. лабораторией Краснодарского НИВИ.

Ю.Ф. Мишанин - доктор биологических наук, академик РАЕ,

профессор Кубанского государственного технологического

университета.

Представители семейства Enterobacteriaceae являются грамотрицательными, аэробными или факультативно анаэробными палочками. Подвижные за счет перетрихиальных жгутиков, реже — неподвижные. Большинство видов хорошо растет при 37° С, однако некоторые виды лучше растут при 25-30° С. D-глюкозу и другие углеводы ферментируют с образованием кислоты, а многие виды, кроме того, и газа. Оксидазоотрицательные, каталазоположительные, редуцируют нитраты в нитриты. Распространены повсеместно. Встречаются на растениях, у животных (от червей и насекомых до млекопитающих) и человека. Присутствуют в почве, воде и даже в воздухе. Они существуют как симбионты, сапрофиты или паразиты. По патогенности для человека, животных и растений весьма разнообразны. Отдельные роды (напр., Erwinia и др.) известны как фитопатогены, причиняющие урон злакам и картофелю, другие (напр., Serratia) распространены в воде, являются фитопатогенами, обитают у насекомых, способны вызывать спорадические инфекции холоднокровных, домашних, диких животных и человека. Многие роды имеют медицинское значение, вызывая желудочно-кишечные болезни, являясь причиной оппортунистических инфекций.

В ветеринарии на первое место выступают роды Escherichia , Salmonellaи Yersinia. Кроме того, определенное значение имеют роды Klebsiella , Morganella , Proteus. Эти микроорганизмы вызывают желудочно-кишечные болезни и могут быть возбудителями различных внекишечных инфекций, таких, как бактериемия, менингит, инфекции мочевыводящих путей, дыхательных путей, раневые инфекции и др.

Лабораторная диагностика включает выявление методом световой микроскопии, выделение чистой культуры возбудителя посевом на питательные среды, идентификацию энтеробактерий по морфологическим, тинкториальным, культуральным, серологи-ческим и патогенным свойствам; дифференциацию родов энтеробактерий.

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики используют фекалии, кровь, мочу, молоко. Посмертно в лабораторию направляют трупы мелких животных и птиц целиком, трубчатую кость, долю печени с желчным пузырем, селезенку, почку, брыжеечные лимфоузлы, отрезок тонкого отдела кишечника, перевязанный с двух концов лигатурой (упаковывается отдельно от остального материала), легкие. При абортах с подозрением сальмонеллезной их этиологии (отмечают у конематок и овцематок) для бактериологической диагностики направляют абортированный плод или плодовые оболочки, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей, желудок плода, его паренхиматозные органы.

Сбор фекалий осуществляют в стерильную посуду сразу после дефекации. Можно собирать материал непосредственно из прямой кишки с помощью ректальных ватных или ватномарлевых тампонов, укрепленных на деревянной палочке или проволочной петле. Посев фекалий желательно осуществлять непосредственно после их сбора или в пределах 2-3 часов после сбора. Если это невозможно, материал консервируют хранением при температуре 2-6° С или глицериновой смесью.

Лучшие результаты для получения гемокультуры дает посев крови, взятой в самом начале болезни, однако при отрицательных результатах целесообразен повторный посев крови в течение всего периода лихорадки. В отдельных случаях для посева на гемокультуру можно использовать сгустки крови, направляемой для серологических исследований.

Другой материал отбирают общепринятыми способами. Во всех случаях его берут от животных, не подвергавшихся в последние 10 дней лечению антибактериальными препаратами.

Выделение и первичная идентификация культур энтеробактерий. При наличии паренхиматозных органов или целых трупов (плодов) из исходного материала готовят мазки-отпечатки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Энтеробактерий представляют собой грамотрицательные, прямые палочки длинной 1,0-3,0 мкм и диаметром 0,3-0,6 мкм. Располагаются одиночно, реже попарно. Для некоторых характерно наличие капсулы или микрокапсулы. Спор не образуют.

При наличии иного материала исследования начинают с посева на питательные среды. Рекомендуемые плотные и жидкие питательные среды для выделения энтеробактерий в зависимости от исследуемого материала и предполагаемого возбудителя приведены в таблице 1.

Для посева проб материалов, обычно содержащих разнообразную микрофлору (фекалии, околоплодная жидкость и др.), наиболее целесообразно применять высокоселективные среды (висмут-сульфит агар, агар Плоскирева). Для проб, обычно не содержащих или содержащих незначительное количество микроорганизмов (кровь, паренхиматозные органы и др.), — слабоселективные дифференциальные среды (агары Левина, Эндо). Однако, учитывая возможность выделения из фекалий и другого материала в качестве возбудителей не только патогенных, но и условно-патогенных энтеробактерий, которые могут сильно подавляться на высокоселективных средах, оптимальным является одновременное применение тех и других сред. При исследовании проб, в которых концентрация возбудителя, скорее всего, низка, целесообразно использовать среды накопления. Фекалии перед посевом на плотные среды суспендируют в стерильном физиологическом растворе в соотношении 1:10. При взятии материала ректальным тампоном его погружают в среду обогащения (накопления). Пробирки с посевами помещают в термостат, а по окончании инкубации (12-18 час) делают высевы на плотные селективные среды.

Цитратную кровь засевают в жидкие среды накопления в соотношении 1:10. Для посева сгустков крови после их асептического «обведения» и отсасывания сыворотки сгусток растирают в пробирке стеклянной палочкой и вносят в среду накопления в соотношении 1:10. После посева крови или сгустков крови и инкубации в термостате (12-18 час) ежедневно в течение 3 дней делают высев на плотные среды. При отрицательных результатах высевы повторяют еще на 6-е и 10-е сутки.

Мочу после центрифугирования или без него засевают в среды накопления двойной концентрации в соотношении 1:1.

Посев другого материала осуществляют общепринятыми в бактериологии методами. Посевы инкубируют при температуре 37° С на плотных питательных средах в течение 18-24 часов (48 часов на висмут-сульфит агаре), в средах обогащения максимальный срок инкубации посевов не должен превышать 18 часов (кроме крови). Посевы для выделения иерсиний инкубируют при 25-26° С. Чашки с посевами на эти микроорганизмы просматривают через 18-20 часов и повторно на вторые сутки термостатирования.

Характеристика колоний энтеробактерий на плотных селективно –дифференциальных средах представлена в таблице 2. Более подробная характеристика колоний энтеробактерий определенных родов изложена в соответствующих разделах.

Колонии, полученные на селективно-дифференциальных средах и характерные для энтеробактерий, отсевают на питательные среды для получения чистых культур, которые используют для родовой дифференциации энтеробактерий.

Таблица 1 - Питательные среды, рекомендуемые для

Первичного выделения энтеробактерий

Исследуемый материал

Энтеробактерии, которые могут содержаться в исследуемом материале

Плотные (селективные) среды

Жидкие (среды накопления)

Плоскирева

Висмут-сульфит агар

Левина

Эндо

Мак-Копки

Минка

Магниевая

Селенитовая

Мюллера или Кауфмана

Киллиана

Рапопорт

Глюкозный бульон

Буферная (Юшенко)

К-1

П-1

ЭТ-1

Фекалии, отрезок тонкого кишечника

Salmonella Escherichia Klebsiella Yersinia Proteus Serratia Morganella

+ ++ + ++

++++ ++

++ + + + +

Кровь

Salmonella Escherichia Klebsiella Yersinia

++++

Моча

Salmonella Escherichia Klebsiella Proteus Yersinia

++++

+++ +

+ ++ +

+ + + +

Паренхиматозные органы, трупы, плоды

Salmonella Escherichia Klebsiella Proteus Yersinia

++++

++ + +

+++ +

+ + + +

Легкие

Salmonella Escherichia

+ +

Молоко

Salmonella Escherichia Klebsiella Serratia

++++

Таблица 2 – Характеристика колоний энтеробактерий на

Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 195; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

12 3 4 5 6 7 8 9 10 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!