Темы для реферативных сообщений
1) Железодефицитные состояния: причины, проявления, диагностика, последствия, основы лечения.
2) Врожденные и приобретенные метгемоглобинемии: причины, недостаточность НАДН–метгемоглобинредуктазы, клинические проявления, лечение.
3) Порфирии: классификация, причины, патогенез, клинические проявления, основы лечения.
Самостоятельная работа
Дополнить схему углеводно-энергетического обмена (см. темы 3.1, 4.1, 4.2), представив реакции синтеза 2,3‑дифосфоглицерата, связанные с гликолизом.
Лабораторная работа 1.
Определение концентрации гемоглобина в крови
Актуальность
Концентрация гемоглобина в крови является одним из важнейших показателей организма. На поддержание этого показателя и своевременную доставку кислорода в ткани направлено множество регуляторных механизмов. При недостатке железа в организме концентрация гемоглобина в крови уменьшается в последнюю очередь, когда в организме уже понижено содержание всех иных железосодержащих белков (трансферрина в крови, ферритина в тканях и др.) и гемопротеинов (миоглобина в мышцах, цитохромов в дыхательной цепи и цепях микросомального окисления, и др.). При повышении и оптимизации поступления железа в организм, концентрация гемоглобина в крови восстанавливается в первую очередь, а уже затем восстанавливается общая железосвязывающая способность сыворотки крови и постепенно нарастают запасы железа в тканях.
|
|
|
Принцип
Гемоглобинцианидный метод основан на способности гемоглобина при взаимодействии с гексацианоферратом калия (красная кровяная соль) окисляться в метгемоглобин, образующий с ацетонциангидрином окрашенный гемоглобинцианид, интенсивность его окраски пропорциональна количеству гемоглобина.
Реактивы
1) Трансформирующий реактив (смесь растворов ацетонциангидрина, Na2CO3, гексацианоферрата калия K3[Fe(CN)6]), 2) 150 г/л стандартный раствор гемоглобинцианида.
Материал исследования
Свежая кровь.
Проведение анализа
| Опыт, мл | Стандарт, мл | |
| Кровь Стандартный раствор | 0,02 — | — 0,02 |
| Трансформирующий раствор | 5,0 | 5,0 |
| Инкубируют 10 мин, измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против воды при длине волны 540 нм (зелёный светофильтр) в кювете 10 мм | ||
Расчет
Содержание гемоглобина [г/л] = 
,
где ЕОП и ЕСТ — оптическая плотность опытной и стандартной проб,
ССТ — концентрация гемоглобина в стандартном растворе.
Нормальные величины
| Свежая кровь | женщины | 120‑140 г/л |
| мужчины | 130‑160 г/л |
Клинико-диагностическое значение
Снижение концентрации гемоглобина наблюдается при анемиях – железодефицитной (до 60 г/л), геморрагической, гипопластической, гемолитической, В12-дефицитной. Увеличение концентрации гемоглобина наблюдается при миелопролиферативных заболеваниях – эритремии (до 210 г/л), симптоматических эритроцитозах – пролиферации элементов эритропоэза, при обезвоживании.
|
|
|
Оформление работы
Указывают принцип метода, регистрируют результаты, делают расчёты, вывод.
Лабораторная работа 2.
Определение концентрации общего билирубина
и его фракций в сыворотке крови
Актуальность
Определение концентрации билирубина и его фракций в крови служит важным критерием при определении типа желтухи и выбора стратегии лечения.
Принцип
Сульфаниловая кислота с азотистым натрием дает диазофенилсульфоновую кислоту, образующую с билирубином окрашенные азопигменты (диазореакция Эрлиха). Связанный (прямой) билирубин реагирует быстро, и о его концентрации судят по первоначальной интенсивности окраски. Несвязанный билирубин вступает в реакцию после добавления акселератора (кофеин), который освобождает билирубин из комплекса с белками, чем ускоряет реакцию азосочетания.
Материал исследования
Сыворотка крови.
Реактивы
1) 5 мкмоль/л стандартный раствор билирубина, 2)сульфаниловая кислота в HCl (реагент 1), 3) раствор NaNO2 (реагент 2), 4) кофеиновый реактив (реагент 3), 5) 0,9% раствор NaCl, 6) буферный раствор (реагент 4).
|
|
|
Проведение анализа
|
| Общий билирубин, мл | Прямой мл | Стандартная проба, мл | Контроль, мл | |||
| Сульфаниловая кислота | 0,2 | 0,2 | 0,2 | — | |||
| NaNO2 | 1 капля | 1 капля | 1 капля | — | |||
| Кофеиновый реактив | 1,0 | — | 1,0 | 1,0 | |||
| NaCl | — | 1,0 | — | 0,2 | |||
| Сыворотка крови | 0,2 | 0,2 | — | 0,2 | |||
| Стандарт билирубина | — | — | 0,2 | — | |||
|
| Перемешивают и инкубируют 10 минут | ||||||
| Буферный раствор | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | |||
Измеряют экстинкцию стандартной пробы и пробы на прямой билирубин против контроля при 540 нм (зеленый светофильтр) в кювете 5 мм. Еще через 10 мин измеряют экстинкцию стандартной пробы и пробы на общий билирубин.
Расчет
Рассчитывают концентрацию общего и прямого билирубина по формуле:
Билирубин [мкмоль/л] = 
,
где ЕОП и ЕСТ — оптическая плотность опытной и стандартной проб,
ССТ — концентрация билирубина в стандартном растворе, 5 мкмоль/л
Непрямой билирубин [мкмоль/л] = общий билирубин ‑ прямой билирубин
Нормальные величины
| Сыворотка крови | общий билирубин | 8,5‑20,5 мкмоль/л |
| прямой билирубин | 2,2‑5,1 мкмоль/л |
Клинико-диагностическое значение
|
|
|
В таблице отражены сдвиги содержания основных пигментов в сыворотке крови, моче и кале людей при различных типах желтухи ( ‑ увеличение, ¯ ‑ снижение, N ‑ нормальные значения):
|
| Типы желтухи | |||||||
| Гемолитическая | Паренхиматозная | Обтурационная | ||||||
| Билирубин крови |
|
|
| |||||
| ‑ Общий | | | | |||||
| ‑ Непрямой | | | N или | |||||
| ‑ Прямой | N или | | | |||||
| Билирубин мочи | N | N или | | |||||
| Уробилин мочи | | | ¯ | |||||
| Стеркобилин кала | | N или ¯ | Отсутствует | |||||
Накопление билирубина в крови свыше 43 мкмоль/л ведет к его связыванию эластическими волокнами кожи и конъюнктивы, проявляется желтухой. Для дифференциальной диагностики типа желтухи определяют, за счет какой фракции билирубина возникает билирубинемия.
1. Гемолитическая (надпеченочная) желтуха — ускорено образование билирубина в итоге гемолиза. Гипербилирубинемия развивается за счет фракции непрямого билирубина. В моче резко возрастает содержание уробилина, билирубина нет. В кале увеличено содержание стеркобилина.
Данный тип желтухи может развиваться при В12‑дефицитной анемии, гемолитических анемиях различного происхождения (порфирии, несовместимость крови, дефект глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, лекарства).
2. Паренхиматозная (печеночно‑клеточная) желтуха — нарушено извлечение билирубина печеночными клетками, его конъюгирование и выведение. Гипербилирубинемия за счет обеих фракций: непрямой билирубин возрастает за счет функциональной недостаточности гепатоцитов или снижения их количества, а прямой — за счет цитолиза гепатоцитов. В моче определяется билирубин, умеренно увеличена концентрация уробилина. В кале уровень стеркобилина в норме или снижен. Паренхиматозный тип желтухи отмечается при вирусных и иных формах гепатитов, циррозе, опухолях, жировой дистрофии печени и других состояниях.
3. Механическая (подпеченочная) желтуха развивается вследствие нарушения оттока желчи при закупорке желчного протока. Из-за застоя желчи растягиваются желчные капилляры, растет их проницаемость. Не имея оттока в желчь, прямой билирубин поступает в кровь (гипербилирубинемия). В тяжелых случаях переполнение гепатоцитов прямым билирубином нарушает конъюгацию с глюкуроновой кислотой, в крови растет уровень несвязанного билирубина. В моче резко повышен уровень билирубина. В кале нет стеркобилина. Такую желтуху выявляют при желчнокаменной болезни, опухолях поджелудочной железы, гельминтозах.
Оформление работы
Указывают принцип метода, регистрируют результаты, производят расчёты, делают вывод о наличии/отсутствии возможной патологии.
Лабораторная работа 3.
Обнаружение билирубина и желчных пигментов в моче
Реактивы
1) диагностические полоски «Билифан», 2) концентрированная H2SO4, 3) концентрированная HNO3 с примесью HNO3, 4) сухой порошок аммония молибдата, 5) 1% спиртовый раствор J2
Материал для исследования
1) Нормальная моча, 2) патологическая моча с желчью.
Экспресс-метод
Принцип
Полуколичественное определение билирубина в моче диагностическими полосками «билифан» основано его качественной реакции, дающей продукты с характерным розовым окрашиванием.
Проведение анализа
Диагностическую полоску погружают в мочу и немедленно вынимают. Через 1 мин сравнивают окраску зоны индикации с цветной шкалой сравнения на этикетке. Примерную концентрацию билирубина в моче определяют согласно оттенкам зоны индикации в соответствии с таблицей:
| Обозначения на шкале | Содержание билирубина | |
| мкмоль/л | мг/л | |
| 1 | 5‑10 | 3‑6 |
| 2 | 10‑21 | 6‑12 |
| 3 | 21‑41 | 12‑24 |
| 4 | 51 | 30 |
Проба с молибдатом аммония
Принцип
Желчные пигменты билирубина и биливердина окисляются молибдатом аммония в присутствии H2SO4 с образованием синего билицианина.
Проведение анализа
На предметное стекло отдельно наносят соль аммония молибдата, каплю мочи с желчью, каплю концентрированной H2SO4, смешивают стеклянной палочкой. В присутствии билирубина развивается синяя окраска.
Проба Гмелина
Принцип
Под действием HNO3 с примесью HNO2 билирубин окисляется в биливердин (зелёный), билицианин (сине-фиолетовый), холетелин (жёлтый).
Проведение анализа
В пробирку с 5‑10 каплями концентрированной HNO3 по стенке осторожно наслаивают равный объём исследуемой мочи. При наличии в моче желчных пигментов на границе жидкостей появляются цветные кольца. Первым появляется зелёное кольцо биливердина.
Нормальные величины
| Моча | отсутствие билирубина |
Клинико-диагностическое значение
Билирубинурия характерна для обтурационной и паренхиматозной желтухи при повышении уровня прямого билирубина в крови, но отсутствует при гемолитической желтухе. При гепатите билирубин может быть обнаружен в моче до появления желтухи.
Оформление работы
Указывают принципы методов, результаты заносят в таблицу, делают вывод о наличии билирубина и возможной патологии.
| Название метода | Материал для | Результат реакции (наличие окраски) | |
| Экспресс- метод | моча | нормальная | |
| с желчью | |||
| Проба с молибдатом аммония | моча | нормальная | |
| с желчью | |||
| Проба Гмелина | моча | нормальная | |
| с желчью | |||
Вопросы для самоконтроля
1) Строение, функции, метаболизм эритроцита. Значение гликолиза и 2,3-дифосфоглицерата, пентозофосфатного пути и НАДФН. Мембрана эритроцитов: белки, мишени окисления и роль витаминов-антиоксидантов и НАДФН.
2) Гемоглобин как гемопротеин, типы гемоглобина. Транспорт газов эритроцитом, участие О2 и СО2 (схемы: в капиллярах легких и в тканях), кооперативность и эффект Бора. Гликозилированный гемоглобин и сахарный диабет.
3) Функции и локализация других гемопротеинов (миоглобин, цитохромы, пероксидаза и каталаза). Гемопротеины и гипоксия.
4) Железо, роль, токсичность. Обмен Fe, нарушения (анемия, гемохроматоз).
5) Синтез и распад гема, гемоглобина, регуляция и нарушения. Роль РЭС, печени и почек в обмене гемоглобина. Заболевания: талассемии, порфирии и др.
6) Желтуха, виды, причины, диагностика. Прямой и непрямой билирубин.
ТЕМА 11.3.
Неорганические вещества крови.
Кислотно-основное состояние
Актуальность
Кровь занимает особое место в метаболизме благодаря ряду специфических функций, принадлежащих ее компонентам. Незаменима роль крови в газообмене и регуляции кислотно-основного состояния организма, нарушения которых часто встречаются в клинической практике.
Цель
1. Изучить кислотно-основное состояние крови, механизмы его обеспечения.
2. Освоить методы оценки буферной ёмкости сыворотки крови, содержания хлоридов в сыворотке крови и моче, показателя рН мочи и их клинико-диагностическое значение.
Вопросы для самоподготовки
1) Электролиты плазмы крови:
~макроэлементы (Na, K, Ca, P, Fe, Cl), распределение и значение в организме, нормальные концентрации в плазме крови и факторы, от которых зависит их концентрация в плазме крови;
~микроэлементы (J, Cu, Zn, Co, Se), примеры участия в обмене веществ.
2) Роль эритроцита в изменении концентрации бикарбонат-ионов плазмы, карбоангидраза.
3) Механизм транспорта кислорода. Связывание кислорода с гемоглобином. Кривая насыщения гемоглобина кислородом / диссоциации гемоглобина.
4) Схема реакций, происходящих в эритроците, в капиллярах легких и тканей.
5) Показатели кислотно-основного состояния, нормальные величины (Приложение).
6) Химические механизмы регуляции кислотно-основного состояния. Каким образом работают буферные системы крови – фосфатная, белковая, бикарбонатная, гемоглобиновая. Химические реакции. Буферная емкость крови, клинико-диагностическое значение и нормальные показатели.
7) Характеристика и механизмы основных физиологических систем компенсации нарушения кислотно-основного состояния, роль легких и почек. Определение рН мочи, клинико-диагностическое значение.
8) Значение печени и костной ткани в реакциях компенсации нарушений КОС. Механизмы их работы.
9) Влияние секреции желудка и поджелудочной железы на кислотно-основное состояние организма. Роль печени. Определение концентрации ионов хлора в сыворотке крови и моче. Клинико-диагностическое значение и нормальные величины.
10) Основные виды нарушений кислотно-основного состояния – респираторный (дыхательный) ацидоз и алкалоз, метаболический ацидоз и алкалоз, причины, их вызывающие. Изменение показателей кислотно-основного состояния при данных нарушениях. Способы компенсации нарушений.
11) Причины сдвигов кислотно-основного равновесия при нижеперечисленных состояниях, способы их химической и физиологической компенсации:
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 99; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!