Оценка концентрации альбуминов в сыворотке крови
Принцип
При взаимодействии альбумина с красителем бромкрезоловым зелёным в слабокислой среде образуется комплекс зелёного цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации альбумина в пробе.
Проведение анализа
Перед анализом рабочий и стандартный раствор альбумина выдерживают 30 мин при комнатной температуре. Готовят опытную и стандартную пробы:
| Опыт, мкл | Стандарт, мкл | |
| Сыворотка крови | 20 | ‑ |
| Стандартный альбумин | ‑ | 20 |
| Рабочий раствор | 2000 | 2000 |
| Перемешивают, инкубируют 1 мин, измеряют оптическую плотность опыта и стандарта против рабочего реактива при 628 (578‑640) нм в кювете 5,0 мм | ||
Расчет
Содержание альбуминов [г/л] = 
,
где ЕОП и ЕСТ ‑ оптическая плотность опытной и стандартной проб,
ССТ ‑ концентрация альбумина в стандартном растворе (40 г/л).
Если концентрация альбумина выше 80 г/л, пробу разбавить дистиллированной водой в 2 раза, повторить анализ, результат умножить на 2.
Нормальные величины
| Сыворотка крови | 30‑50 г/л |
Биуретовый метод определения общего белка
Принцип
Пептидная связь в щелочной среде образует с медью комплексное сине-фиоле-товое соединение, интенсивность окраски пропорциональна содержанию белка.
Проведение анализа
Рабочий и стандартный растворы должны быть комнатной температуры. Готовят опытную и стандартную пробы согласно таблице:
|
|
|
| Опыт, мкл | Стандарт, мкл | |
| Сыворотка крови | 20 | –– |
| Стандартный р-р белка | –– | 20 |
| Биуретовый реактив | 1500 | 1500 |
| Инкубируют 10 мин, измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против воды при длине волны 540 нм в кювете 5,0 мм | ||
Расчет
Содержание общего белка [г/л] = 
,
где: ЕОП и ЕСТ — оптическая плотность опытной и стандартной проб,
ССТ — концентрация белка в стандартном растворе (70 г/л).
Нормальные величины
| Сыворотка крови | 65–83 г/л |
Расчёт процентного содержания белков альбуминовой фракции в сыворотке крови производят по формуле:
Фракция альбуминов [%] = 100 А/Б ,
где А — концентрация альбуминов в сыворотке крови (г/л),
Б — концентрация общего белка в сыворотке крови (г/л),
100 — коэффициент пересчёта в %.
Нормальные величины
| Альбумины сыворотки крови мужчины женщины | 49–62 % 48,9–61,7 % 48,8–54,6 % |
Клинико-диагностическое значение
Изменения концентрации альбуминов в плазме крови. Снижение содержания альбуминов (если исключить неполноценное питание, нарушение всасывания в кишечнике, большую потерю белка организмом) чаще бывает при выраженном нарушении синтетической функции печени. Максимальное снижение – при портальном циррозе и жировой дистрофии печени. Альбумины первыми теряются при нарушении функции почек, первыми выходят в ткани при отёках (концентрация альбуминов в плазме крови <20 г/л сопровождается отёками).
|
|
|
Альбумины – отрицательные реактантыи острой фазы: диспротеинемии на фоне неизменной концентрации общего белка формируются при воспалении за счёт снижения альбуминов и роста белков острой фазы (глобулины). Возрастание глобулиновых фракций в крови при парапротеинемиях или иных патологиях происходит также за счет снижения концентрации альбуминов.
Изменения концентрации общего белка в плазме крови могут иметь как абсолютный, так и относительный характер. Изменения абсолютного характера являются следствием колебаний содержания белка в плазме крови, в свою очередь относительные изменения зависят от объема крови, то есть наблюдаются при обезвоживании или гипергидратации.
Гиперпротеинемия. Истинный рост содержания белка в крови чаще всего связан с увеличением фракции глобулинов при острых инфекциях (активный синтез белков острой фазы), хронических инфекциях (за счет g‑глобулинемии), миеломной болезни, лимфогрануломатозе, саркоидозе.
Относительная гиперпротеинемия вызывается потерями внутрисосудистой жидкости в результате профузных поносов (например, холере), усиленном потоотделении, неукротимой рвоте, несахарном диабете, тяжелых и обширных ожогах, генерализованных перитонитах.
|
|
|
Гипопротеинемия часто связана с уменьшением фракции альбуминов крови. Истинная (абсолютная) гипопротеинемия: при недостаточном потреблении белка с пищей — заболевания желудочно-кишечного тракта, сужение пищевода, частичное/полное голодание; снижении синтеза белка — дисбаланс пищи по аминокислотам, хронические гепатиты, интоксикации, злокачественные опухоли, лечение кортикостероидами; усиленном распаде белка — кахексия, тяжелые инфекции, длительные воспалительные процессы, лихорадочные состояния, тиреотоксикозы; потере белка — нарушения проницаемости стенок капилляров, кровоизлияния, ожоги, острые и хронические кровотечения, нефротический синдром.
Относительная гипопротеинемия связана с нарушением водного баланса — гипергидратация при гиперальдостеронизме; со снижением экскреции солей — при почечной недостаточности, а также использовани для питья морской воды и неадекватных инфузиях солевых растворов.
Оформление работы
|
|
|
Указывают принципы методов, регистрируют результаты по общему белку и альбумину, производят расчёты с вычислением %-го содержания фракции альбуминов от общего белка сыворотки крови, делают вывод о наличии/отсутствии патологий, отмечают клиническое значение.
Лабораторная работа 4.
Проведение проб на коллоидоустойчивость
белков сыворотки крови
Устойчивость белков сыворотки крови зависит от заряда и наличия гидратной оболочки. Нарушение коллоидной устойчивости белков под влиянием различных агентов проявляется сначала склеиванием (коагуляцией) молекул, а затем выпадением в осадок. При этом в первую очередь осаждаются более крупные и менее заряженные белки — глобулины. В норме устойчивость сывороточных белков зависит от соотношения количества альбуминов и глобулинов.
Материал для исследования
Сыворотка крови.
Тимоловая проба
Принцип
Сывороточные b‑, g‑глобулины, липопротеины осаждаются тимоловым реактивом при рН 7,55 при образовании глобулин-тимол-липидного комплекса.
Реактивы
1) Тимоловый буфер, рН 7,55‑7,6, 2) шкала сравнения: калибровочные растворы с разной интенсивностью мутности (перед использованием их перемешивают)
| N пробы | Единицы помутнения, S‑H (по авторам: Shank‑Haagland) |
| 1 2 3 4 | 5 10 15 20 |
Проведениеанализа
Берут 0,05 мл сыворотки крови, добавляют 3,0 мл тимолового буфера, перемешивают и инкубируют 15 мин при комнатной температуре, перемешивают и сравнивают со шкалой. Результат выражают в единицах помутнения S‑H.
Нормальные величины:
| Сыворотка крови | 0‑4 ед.S‑H |
Практическое значение
Как и все коагуляционные тесты, тимоловая проба неспецифична. Однако по сравнению с другими коллоидными пробами она более приемлема для функционального исследования печени при дифференциальной диагностике. При поражении паренхимы печени (инфекционный, токсический гепатит) уже в преджелтушной стадии или при безжелтушной форме в 90‑100 % случаев проба выше нормы. У здоровых лиц, при механической желтухе, иной патологии печени, нарушении функции других органов тимоловая проба в пределах нормы.
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 125; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!