Реакция на ретинол (витамин А)
Принцип
Метод основан на способности концентрированной серной кислоты отнимать воду от ретинола с образованием окрашенных продуктов.
Материал для исследования
Витамин А (0,05 % масляной раствор).
Проведение анализа
В пробирку вносят 2 капли раствора витамина А, 5 капель хлороформа и 1‑2 капли концентрированной серной кислоты. Появляется синее окрашивание, очень быстро переходящее сначала в фиолетовое, затем в красно‑бурое (окраска развивается до темного, почти черного цвета).
Реакция на кальциферол (витамин D)
Принцип
Витамины группы D и их провитамины в присутствии серной кислоты и уксусного ангидрида теряют молекулу воды, превращаясь в продукт холестерилен сине-фиолетового и зеленого цвета.
Материал для исследования
Витамин D (масляной раствор).
Проведение анализа
В пробирку вносят 3 капли раствора витамина D, 5 капель хлороформа, добавляют 3 капли уксусного ангидрида и 3 капли концентрированной серной кислоты. Развивается красное окрашивание, быстро переходящая в фиолетовое, синее и далее в зеленое. Если объекты имеют примеси холестерина, то зеленая окраска переходит в красную.
Реакция на токоферол (витамин Е)
Принцип
При взаимодействии токоферола с концентрированной азотной кислотой образуется соединение хиноидной структуры красного или желтовато-красного цвета.
Материал для исследования
Витамин Е (0,1 % спиртовый раствор).
|
|
|
Проведение анализа
В сухую пробирку вносят 2 капли раствора витамина Е и добавляют 10 капель концентрированной азотной кислоты. Пробирку встряхивают и наблюдают появление красного окрашивания. Для ускорения реакции пробирку можно поместить на 3 мин в кипящую водяную баню.
Реакция на викасол (синтетический аналог витамина К1)
Принцип
Викасол в присутствии цистеина в щелочной среде окрашивается в лимонно-желтый цвет.
Материал для исследования
Викасол (0,05 % раствор).
Проведение анализа
К 5 каплям викасола добавляют 5 капель раствора цистеина и 1 каплю NaOH. Развивается лимонно-желтое окрашивание.
Оформление работы
Указывают принципы методов, регистрируют результаты в виде таблицы и делают вывод о наличии витаминов в исследуемом материале.
| Название исследуемого витамина | Наблюдаемое окрашивание | Вывод о наличии/отсутствии витамина |
| Ретинол (витамин А) | ||
| Кальциферол (витамин D) | ||
| Токоферол (витамин Е) | ||
| Викасол (аналог витам. К) |
Лабораторная работа 2.
Реакции на водорастворимые витамины
Реактивы:
1) 10 % раствор NаОН, 2) конц. НСl, 3) 1 % раствор FеСl3, 4) 10 % раствор CН3CООН, 5) 10 % раствор тиомочевины, 6) 5 % раствор Сu(СН3СОО)2, 7) изобутиловый спирт, 8) цинк металлический, 9) 5 % раствор калия гексацианоферрата K3Fe(CN)6, 10) порошок гидросульфита натрия, 11) 0,1 % 2,6-дихлор-фенолиндофенол (ДХФИФ, краска Тильманса), 12) 2 % и 10 % растворы HСl, 13) 10 % раствор Na2CO3, 14) 0,01 % раствор метиленового синего.
|
|
|
Оборудование
Электроплитка, беззольные фильтры, ртутно-кварцевая лампа.
Материал для исследования
Порошок тиамина (5 % раствор тиамина бромида), порошок рибофлавина (а также 0,025 % раствор рибофлавина ‑ перед употреблением разводят в 5 раз; 0,1 % раствор рибофлавиннуклеотида в ампулах ‑ из него готовят 0,002 % раствор; флавинат в ампулах ‑ содержит 0,002 % раствор ФАД), порошок никотинамида (никотиновой кислоты), 1 % раствор витамина В6 (или 5 % раствор пиридоксина гидрохлорида), витамин В12 (раствор цианокобаламина), 1 % раствор аскорбата.
Реакция на тиамин (витамин В1)
Принцип
Железосинеродистый калий в щелочной среде окисляет тиамин в тиохром, интенсивно флуоресцирующий синим светом в ультрафиолете.
Проведение анализа
К 1‑2 каплям раствора или 1‑2 мг порошка тиамина прибавляют 5‑10 капель раствора NаОН и 2 капли раствора К3[Fе(СN)6], перемешивают, нагревают на спиртовке, наблюдают флуоресценцию в лучах ртутно-кварцевой лампы.
|
|
|
Реакции на рибофлавин (витамин В2)
Реакция восстановления
Принцип
Метод основан на восстановлении рибофлавина водородом, выделяющимся при добавлении металлического цинка к концентрированной HСl. В начале образуется промежуточный продукт родофлавин розового цвета, а затем постепенно бесцветная лейкоформа.
Проведение анализа
0,025 % раствор рибофлавина. К 10 каплям раствора витамина В2 добавляют 5 капель концентрированной HCl и гранулу металлического цинка. Жидкость окрашивается в розовый цвет, а затем обесцвечивается. Сравнить обе получаемых формы витамина В2 по степени флуоресценции.
Реакция флуоресценции
Рибофлавин обладает окислительно-восстановительными свойствами. Это связано с наличием двойных связей в структуре изоаллоксазинового кольца, по месту разрыва которых к азоту могут присоединяться два протона и два электрона окисляемого субстрата.
Принцип
Метод основан на способности окисленных форм рибофлавина и флавиновых коферментов давать в ультрафиолетовом свете желто-зеленую флуоресценцию, интенсивность которой зависит от их концентрации. Восстановленные формы флавинов не флуоресцируют.
Проведение анализа
|
|
|
В три пробирки вносят: в 1 ‑ 10 капель рибофлавина, во 2 ‑ 10 капель рибофлавинмононуклеотида, в 3 ‑ 10 капель флавината. Приливают в каждую по 5 мл дистиллированной воды. Перемешивают. Прибавляют в каждую пробирку на кончике скальпеля порошок натрия гидросульфита (восстановитель) и наблюдают за гашением флуоресценции.
Реакция на никотиновую кислоту (витамин В5)
Принцип
При нагревании витамина РР с раствором уксуснокислой меди образуется плохо растворимой осадок медной соли никотиновой кислоты синего цвета.
Проведение анализа
5‑10 мг никотиновой кислоты (никотинамида) помещают в пробирку с 10 каплями 10 % р-ра уксусной кислоты и растворяют при нагревании. К нагретому до кипения раствору добавляют равный объем 5 % раствора уксуснокислой меди. Жидкость в пробирке мутнеет. При стоянии и постепенном охлаждении раствора выпадает осадок медной соли никотиновой кислоты синего цвета.
Реакция на пиридоксин (витамин В6)
Принцип
Витамин В6 с FеСl3 образует комплексную соль красного цвета по типу фенолята железа.
Проведение анализа
К 5 каплям раствора витамина В6 прибавляют равное количество раствора FеСl3. Развивается красное окрашивание.
Реакция на кобаламин (витамин В12)
Принцип
Взаимодействие с тиомочевиной ионов кобальта, содержащихся в витамине, при нагревании приводит к образованию роданида кобальта зеленого цвета.
Проведение анализа
Приготовление минерализата: в пробирку вносят 5 капель раствора витамина В12, 5 капель конц. H2SO4 и сжигают (минерализуют), нагревая под тягой. Пробирку осторожно охлаждают под проточной водой и добавляют 1 мл воды.
Проведение реакции: на беззольный фильтр наносят 2‑3 капли тиомочевины, высушивают над плиткой. Поверх высохшего пятна на фильтр наносят 1‑2 капли минерализата и вновь нагревают над плиткой до высыхания. На фильтре по краям пятна появляется сине-зеленое окрашивание, свидетельствующее о наличии кобальта.
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 321; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!