Исследование химической денатурации белков
Проведение анализа
Берут 2 ряда пронумерованных пробирок, помещая каждый ряд в отдельный штатив. В 1-й ряд пронумерованных пробирок вносят по 5 капель 1 % раствора яичного белка, во 2-й ряд ‑ по 5 капель сыворотки крови. В каждый ряд пробирок добавляют реактивы, пользуясь указаниями приведённой ниже таблицы. После проведения всех реакций оценивают результаты, сравнивают с изменениями в соседних пробирках. Затем для всех пробирок устанавливают необратимость/обратимость осаждения белка, добавляя к осадку 10‑20 капель дистиллированной воды, результат сравнивают с изменениями в соседних пробирках.
Практическое значение
Реакции химической денатурации используют для осаждения белка в биоматериале с целью дальнейшего определения в надосадке низкомолекулярных веществ (чаще всего веществ углеводной и липидной природы); выявления или оценки содержания белка в биологических жидкостях; связывания солей тяжелых металлов при лечении отравлений и для профилактики их на производстве; обезвреживания отходов в санитарной практике; дезинфекции кожи, слизистых покровов.
Оформление работы
Регистрируют результаты работы в виде таблицы, оценивая по выпадающему осадку интенсивность денатурации белков: – отсутствие; + слабая; ++ сильная; +++ очень сильная. В конце таблицы делают общий вывод по химической денатурации белка, особенностям действия отдельных денатурирующих агентов и обратимости химической денатурации белков.
|
|
|
| Денатурирующие агенты | № пробы | Используемые реактивы | Число капель | Механизм и особенности реакции | Осадок |
| Соли тяжелых металлов | 1 2 | Меди сульфат Свинца ацетат | 2 2 | Ионы металлов связываются с функциональными группами аминокислот, разрушая структуру белка в пространстве | |
| Концентрированные минеральные кислоты | Влияют на заряд и строение молекул белка | ||||
| а) небольшие количества б) избыток | 3 4 5 6 | Азотная Серная Азотная Серная | 2 2 10 10 | Кислоты вызывают дегидратацию частиц, нейтрализацию комплексных соединений с белком. Оцените поведение белка в избытке кислот | |
| Органические кислоты | Нейтрализуют заряд, образуют комплексы с белком | ||||
|
| 7 | Трихлоруксусная | 2 | Осаждает только белки |
|
| 8 | Сульфосалициловая | 2 | Осаждает белки и полипептиды | ||
| Алкалоиды | 9 | Танин | 2 | Образуют нерастворимые солеобразные соединения с основными азотистыми группами | |
| Органические | 10 | Ацетон | 5 | Нарушают гидрофобные взаимодействия внутри молекулы белка Вызывают обезвоживание | |
| 11 | Этанол | 5 | |||
|
|
|
Вопросы для самоконтроля
1) Основные физико-химические свойства белковых молекул.
2) Основные типы структур и уровни организации белковых молекул.
3) Методы очистки белков. Анализ первичной структуры и состава белковых молекул.
4) Свойства белковых растворов, факторы стабилизации белков в растворе.
5) Пути выделения белковых веществ, способы осаждения и удаления белка из растворов.
6) Денатурация белковых молекул, типы денатурации, условия обратимости.
7) Виды денатурирующих агентов, механизмы действия на молекулы белков.
8) Ренативация белков. Фолдинг и рефолдинг. Шапероны, их виды и свойства.
ТЕМА 1.3.
Классификация, функции белков.
Простые и сложные белки
Актуальность
Белки выполняют разнообразные специфические функции в организме ‑ транспорт кислорода и других соединений, хранение и передача наследственной информации и т.д. Особенности строения белковых макромолекул и их изменения лежат в основе развития ряда патологических процессов. Изучение их структуры необходимо для понимания роли белков организме и характера нарушений при некоторых заболеваниях (серповидноклеточная анемия, наследственные нарушения биосинтеза белков и др.) Реакции открытия белковой и простетической групп позволяют понять состав и строение сложных белков, а также использовать эти данные для реакций количественного определения.
|
|
|
Цель
1) Научиться выделять сложные белки из различных объектов и проводить качественные реакции на компоненты сложных белков.
2) Изучить структуру и свойства сложных белков: фосфо‑, глико‑, флавопротеинов и других.
Вопросы для самоподготовки
1) Строение протеиногенных аминокислот, свойства боковых радикалов аминокислот в составе молекул белков, взаимодействие с небелковой частью.
2) Классификация белков по функциональным признакам, основные представители классов.
3) Классификации белков по строению.
4) Простые белки. Характеристика, особенности строения и функции классов простых белков (протамины, гистоны, альбумины, глобулины и др.).
5) Общая характеристика, особенности строения сложных белков.
6) Фосфопротеины: строение и узел связи с небелковой частью, функции.
7) Хромопротеины. Разнообразие небелковой части (гемо‑, флаво‑, ретиналь‑ протеины и др.), функции, основные представители. Понятие о строении витаминов В2, А, гема, гемоглобина и миоглобина.
8) Металлопротеины: понятие о строении и связях, основные представители, роль в транспорте и депонировании металлов, металлоферменты.
|
|
|
9) Гликопротеины: строение, связь с небелковым компонентом, состав углеводного компонента, функции в организме. Сходство и различия гликопротеинов и протеогликанов.
10) Протеогликаны: функции, представление о строении простетической группы (углеводный кор, пример его построения и связи с белком, участие гликозиламиногликанов – хондроитинсульфат и др.).
11) Липопротеины. Понятие о строении, связях липопротеинов мембран. Структура транспортных липопротеинов, функции апобелков. Основные транспортные формы липидов плазмы – хиломикроны, липопротеины очень низкой, низкой и высокой плотности (ЛПОНП, ЛПНП и ЛПВП).
12) Понятие о надмолекулярных комплексах и их построении – на примере протеогликанов и транспортных липопротеинов
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 186; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!