Анализ активности ферментов класса гидролаз
Подкласс – гликозидазы
Материал для исследования
Слюна (разведение 1:10).
Принцип
a‑Амилаза (1,4‑a‑D‑глюкангидролаза, КФ 3.2.1.1.) катализирует гидролиз a‑1,4‑глюкозидных связей крахмала до мальтозы и декстринов.
Крахмал + Н2О 
Мальтоза + Декстрины
Присутствие фермента класса гидролаз обнаруживают по изменению окраски субстрата в реакции с реактивом Люголя. Крахмальный субстрат дает с йодом синюю окраску, декстрины (эритро-, ахро-, мальтодекстрины и др.) в зависимости от длины фрагментов меняют окраску от сине-фиолетовой и красной на характерное для йода желтое окрашивание, мальтоза не окрашивается йодом.
Проведение анализа
Берут 3 пробирки. В каждую вносят по 5 капель крахмального субстрата и по 5 капель разведенной слюны (1:10). В 1-ю пробирку добавляют каплю раствора Люголя, наблюдают синее окрашивание. Инкубируют 2-ю и 3-ю пробы в термостате 5 мин при 37°С. Во 2-ю пробу добавляют каплю раствора Люголя и наблюдают изменение окраски. Икубируют 3-ю пробу ещё 5 мин при 37°С, добавляют каплю раствора Люголя, наблюдают дальнейшее изменение окраски.
Практическое значение
Амилаза присутствует не только в пищеварительном тракте, кровь содержит небольшое количество изоферментов амилазы – панкреатический P-тип (около 30 %) и слюнной S-тип (около 70 %), попадающих в кровь в результате естественного старения и отмирания клеток слюнных и поджелудочной желез. В сыворотке крови в норме активность амилазы 140‑350 Е/л. Фермент имеет относительно низкую молекулярную массу (около 48 000 D), фильтруется в клубочках почек и проявляет активность в моче (диастаза мочи). Соотношение изоферментов в моче иное, чем в плазме крови: Р-тип ‑ 70 %, S-тип ‑ до 30 %.
Активность альфа-амилазы в крови повышается, в основном, при заболеваниях поджелудочной железы (при остром панкреатите в 10‑30 раз в крови и моче), растёт при поражении слюнных желёз, беременности, почечной недостаточности, кишечной непроходимости, заболеваниях желчных путей, диабетическом кетоацидозе, некоторых опухолях легких и яичников.
|
|
|
Анализ активности ферментов класса оксидоредуктаз
Подкласс – каталазы
Материал для исследования
Свежая кровь.
Принцип:
Каталаза является ферментом геминовой природы, разлагает перекись водорода
2 Н2О2 
Н2О + О2
Ход работы:
В пробирку наливают 10 капель 3% перекиси водорода и добавляют каплю крови. Наблюдают выделение пузырьков кислорода.
Подкласс – анаэробные дегидрогеназы
Материал для исследования
1) Кипяченые дрожжи, 2) некипяченые дрожжи.
Принцип:
Анаэробные дегидрогеназы дрожжей – холоферменты с коферментами НАД+ и НАДФ+, катализируют реакции переноса атомов Н oт альдегидоспиртов, альдегидов на промежуточный субстрат (акцептор). Обнаружение дегидрогеназ проводят по изменению окраски добавленного к раствору дрожжей акцептора водорода – метиленового синего, который при восстановлении обесцвечивается.
|
|
|
Ход работы:
Берут 2 пробирки. В 1-ю наливают 10 капель кипяченых дрожжей, во 2-ю 10 капель некипяченых, добавляют по 10 капель 10 % глюкозы и по 1–2 капли метиленового синего (акцептор). Пробирки закрывают пробками и помещают в термостат при 37º С. Наблюдают изменение окраски в одной из пробирок.
Оформление работы
Указывают принципы методов, регистрируют результаты, делают вывод о проявлении активности ферментов разных классов, поясняют особенности реакций (донорно-акцепторные отношения – I класс, атакуемые связи – III класс).
Вопросы для самоконтроля
1) Природа, структурно-функциональная организация и роль простых и сложных ферментов. Классификация и роль кофакторов (коферментов и др.)
2) Механизм действия и свойства ферментов. Регуляция действия ферментов.
3) Современная номенклатура и классификация ферментов.
4) Принципы количественного определения активности ферментов. Единицы измерения активности ферментов.
|
|
|
5) Практическое использование ферментов и их ингибиторов в медицине.
ТЕМА 2.2.
Строение, классификация и роль витаминов
Актуальность
Витамины ‑ низкомолекулярные органические вещества различной химической природы, регуляторы обменных процессов и жизнедеятельности организма. В организме не синтезируются и являются незаменимыми пищевыми факторами. Биологическая роль витаминов связана с регуляцией обменных процессов в организме, поскольку многие из них входят в состав коферментов (простетических групп) ферментов. При недостаточном поступлении витаминов в организм развиваются тяжелые заболевания ‑ авитаминозы. Теоретические сведения о витаминах, а также практические навыки качественного и количественного определения этих веществ в различных биологических объектах нужны врачу для профилактики, диагностики и лечения гипо‑ и авитаминозов.
Цель
1) Изучить свойства, химическую структуру, классификацию, биологическую роль и источники витаминов и витаминоподобных веществ, клиническую картину гипер- и гиповитаминозов.
2) Научиться проводить качественные реакции с растворами витаминов.
3) Использовать полученные навыки для обнаружения водо‑ и жирорастворимых витаминов в биологических объектах.
|
|
|
Вопросы для самоподготовки
1) Понятие о витаминах. Признаки витаминов и витаминоподобных веществ, сходство и отличия.
2) Классификация и номенклатура витаминов. Единицы активности.
3) Разнообразие химических структур витаминов. Свойства витаминов.
4) Роль витаминов в метаболизме (коферменты, антиоксиданты и др.), способы регуляции обменных процессов.
5) Значение витаминов в питании, суточная потребность, возможности синтеза в организме.
6) Понятие о провитаминах. Примеры превращения провитаминов в витамины.
7) Понятие об антивитаминах. Примеры использования антивитаминов в качестве лекарственных средств.
8) Степени обеспеченности организма витаминами и влияющие факторы. Гипо‑ и авитаминозы (экзо‑ и эндогенные).
9) Гипервитаминозы, неспецифические признаки и признаки, характерные для отдельных витаминов. Депонирование жирорастворимых витаминов.
10) Характеристика отдельных жирорастворимых и водорастворимых витаминов. Их строение, активный центр и биологическая роль.
11) Лекарственные формы жиро‑ и водорастворимых витаминов.
Самостоятельная работа
Заполнить графы 1‑8 в Приложении 2 (таблица витаминов и витаминоподобных веществ, где графа 9 заполняется по мере изучения материала в течение года).
Лабораторная работа 1.
Реакции на жирорастворимые витамины
Реактивы
1) Серная кислота (конц.), 2) хлороформ, 3) уксусный ангидрид, 4) азотная кислота (конц.), 5) 0,025 % раствор цистеина, 6) 10 % раствор NaOH.
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 191; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!