СПОНТАННЫЙ САХАРНЫЙ ДИАБЕТ У ЖИВОТНЫХ ЧИСТЫХ ЛИНИЙ
Еще Г. Негели (1896) сформулировал первую генетическую гипотезу о природе СД. С обнаружением в 1974 г. Дж. Нерупом и соавторами связи между СД и генами ГКГС исследования в области генетического моделирования СД особенно активизировались.
Животные чистых линий, развивающие спонтанный СД, служат объектами эффективного изучения как ИЗСД так и ИНСД. Подобных генетических моделей СД известно в настоящее время множество. Это чистые линии китайских хомячков, мышей ККА, мышей OB/OB и DB/DB, мышей AB/AB, колючих мышей, новозеландских мышей, песчаных крыс, крыс BB (BioBreeding), мышей NOD (Non Obese Diabetic), крыс WBH/Kobe .
У мышей NOD имеется генетическая аномалия экспрессии антигенов ГКГС 1 класса. Это приводит к облегченной провокации аутоаллергии против панкреатических В-клеток и развитию ИЗСД. Животные характеризуются избытком Т-эффекторов, действующих против островковых антигенов а также дефицитом супрессорных функций лимфоцитов.
Крысы ВВ, напротив, характеризуются наследственной лимфопенией и дефицитом цитотоксических лимфоцитов. Тем не менее, они развивают спонтанный аутоиммунный инсулит, который, так же как в случае мышей NOD, приостанавливается неонатальной тимэктомией или применением иммунодепрессантов, а в естественных условиях ведет к неизбежному ИЗСД.
Крысы WBH/Кобе самопроизвольно вырабатывают в высоких титрах аутоантитела к собственному инсулину, которые повреждают В-клетки и формируют основу для развития ИЗСД.
|
|
|
Б. Модели инсулиннезависимого сахарного диабета
У мышей линий ОВ и DB развивается спонтанно ожирение, инсулинорезистентность и ИНСД. Они представляют экспериментальные модели первичного ожирения, имеющие, соответственно, наследственный дефект гена лептина (ОВ) или лептинового рецептора (DB). У некоторых линий спонтанно диабетических мышей обнаружено сниженное содержание переносчика глюкозы Glut 2 в островковых b-клетках. При этом, аномально низкий уровень переносчика Glut 2 в островковых b-клетках коррелирует с ослабленной секрецией инсулина в ответ на повышение содержания глюкозы в крови.
Некоторые экспериментальные животные-модели инсулинорезистентного СД, по-видимому, имеют дефект хотя бы одного из белков-переносчиков глюкозы в плазматической мембране мышечных клеток.
Цель занятия:
Изучить особенности обмена веществ у кролика с экспериментальным сахарным диабетом (модель дитизонового сахарного диабета):
1. Определить наличие кетоновых тел в моче (проба Легаля)
2. Определить наличие сахара в моче (проба Фелинга).
Для исследования предлагается моча кролика, у которого был воспроизведен сахарный диабет, и моча контрольного (интактного) кролика. После проведения качественных реакций определения кетонов и сахара, делается заключение о принадлежности мочи больному или здоровому кролику.
|
|
|
Опыт 1. Качественная реакция определения кетоновых тел в моче (проба Легаля).
Реакция с нитропруссидом натрия дает положительный результат с ацетоуксусной килотой и ацетоном, причем реактив наиболее чувствителен к ацетоуксусной кислоте.
В пробирку наливают 0.5 мл исследуемой мочи и подщелачивают ее 2-3 каплями 10% раствора едкого кали.
Добавляют 3 капли 10% свежеприготовленного водного раствора нитропруссида натрия. Возникает рубиново-красное окрашивание, обусловленное присутствием в любой моче креатинина.
Добавляют 3 капли ледяной уксусной кислоты.
При наличии в моче кетонов цвет ее рубиново-красный и фиолетово-красный. Если кетонов в моче нет – цвет становится зеленовато-желтым.
Опыт 2. Качественная реакция определения сахара в моче (реакция Фелинга).
К 3 мл исследуемой мочи добавляют 2 мл реактива Фелинга. Пробирку взбалтывают. Верхнюю часть пробирки нагревают до кипения.
Реакция основана на способности глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета), а затем – в закись (красный цвет).
|
|
|
При наличии в моче сахара нагретая часть смеси изменяет свою окраску: синий цвет переходит в желтый или в кирпично-красный, а затем появляется красноватый осадок.
Реактив Фелинга: свежеприготовленная смесь реактива 1 (водный раствор сернокислой меди) и 2 (водный раствор едкого натра и сегнетовой соли).
В выводе отметить, какие метаболические нарушения зарегистрированы у подопытного кролика, каков их патогенез.
ЖИВОТНЫЕ, ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАКТИВЫ
1. Моча интактного кролика. 2. Моча кролика с воспроизведенным дитизоновым диабетом. 3. Дитизон (дифенилтиокарбазон) – 0.5 г. 4. 10% раствор едкого кали. 5. 10% свежеприготовленный раствор нитропруссида натрия. 6. Ледяная уксусная кислота. 7. Водный раствор сернокислой меди. 8. Водный раствор едкого натра. 9. Водный раствор сегнетовой соли. 10. Пробирки стеклянные. 11.Штатив для пробирок. 12. Бюретки для реактива Фелинга и для мочи каждого из кроликов.
Список литературы
1. Американская диабетическая ассоциация. Диабет от А до Я. (П./ред. А.С. Фокина, А.А. Фокина, Л.П. Чурилова, Ю.И. Строева). СПб:ЭлБи, 2003.-208 с.
2. Баранов В.Г. Экспериментальный сахарный диабет. Роль в клинической практике. Л.: Наука.-240 с.
|
|
|
3. Бергер М., Старостина Е.Г., Йоргенс В., Дедов И. Практика инсулинотерапии. Берлин-Гейдельберг: Шпрингер Ферлаг, 1990.- 365 с.
4. Фелиг Ф., Бекстер Дж.Д., Бродус А.Е., Нромен Л.А. (ред.)- Эндокринология и метаболизм,- М.- Медицина.- т. 1-2.- 1985.
5. Генec B.C., Генec C.Г. Патофизиология инсулинонезависимого сахарного диабета II типа..// Патол. физиол. эксперим. терап.- 1993.- N 10.- c.253-304
6. Зайчик А.Ш., Утехин В.И., Чурилов Л.П., Слободской Е.В. Патофизиология сахарного диабета. В кн.: Нарушения иммунитета и метаболические расстройства. Ч.1.-СПб: Изд-во ППМИ, 1995, с. 86-187
7. Куне Е.-Х. и соавт. Диабет. М.: Знание, 2001.-176 с.
8. Строев Ю.И., Либерман И.С. Общая характеристика ангиопатий при сахарном диабете. В кн.: Генетика сахарного диабета. Л.: Медицина, 1988,-с. 21-35.
Дата добавления: 2019-03-09; просмотров: 150; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!