Опыт №1. Моделирование опухолевого процесса на примере перевиваемой лимфосаркомы Плисса.
Первым отечественным перевиваемым клоном лимфом крыс явилась лимфосаркома Плисса (ЛФС), искусственно индуцированная в 1958 году при содержании подопытной крысы–самки на диете с 3,3–дихлорбензидином, в рамках проекта исследования канцерогенной активности данного вещества, проводимого в НИИ Онкологии им. проф. Н.Н. Петрова [7].
Гомогенат опухоли для поддержания клона перевивается в подкожную клетчатку крысам в дозе 0,2 - 0,5 см3 взвеси опухолевых клеток в физиологическом растворе на боковой поверхности туловища. При перевивке опухолевого материала в указанной дозе процент заболевших животных стремится к 100 %.
Лимфосаркома характеризуется прогрессивным ростом с тенденцией к инвазии в окружающие ткани, прорастанием забрюшинной клетчатки, прилегающей скелетной мускулатуры, глубоким нарушением функционирования системы гемостаза, метастазированием и выраженной некротизацией. Некрозы первоначально появляются в центре опухолевого узла, затем могут распространяться по всей опухоли и на покрывающие её подкожную клетчатку и кожу. В области некротических изменений кожи в дни предшествующие гибели животного развивается кровотечение. Продолжительность жизни крыс-опухоленосителей в среднем составляет 15 – 25 дней при перевивке гомогената лимфосаркомы.
Гистологическое изучение опухоли определило наличие скоплений опухолевых клеток в печени и селезёнке. Установлено, что трансплантация гомогената печени животного – опухоленосителя также способна вызвать рост лимфосарком. При вскрытии погибших животных отмечено наличие метастазов ЛФС в подмышечные и паховые лимфатические узлы, что может указывать на лимфогенный путь метастазирования. В крови крыс-опухоленосителей с развитием заболевания нарастает лейкоцитоз (более 30 х 109/л), содержание лимфоцитов – более 90 процентов.
|
|
|
Опухоль состоит из лимфоидных клеток различной величины, округлой или неправильной формы; выявлено большое количество митозов. При анализе гемограмм у животных с ЛФС отмечаются выраженные проявления анемического синдрома (снижение концентрации эритроцитов и гемоглобина), был установлен сдвиг лейкоцитарной формулы влево и появление в периферической крови эритробластов [7 – 8].
Для создания воспроизводимой модели неопластического процесса ткань ЛФС, полученную от живых доноров смешивается с физиологическим раствором в соотношении 1:10 и гомогенизируется в стеклянном гомогенизаторе. Полученная взвесь вводится крысам в подкожную клетчатку правого бока в объеме 0,1 мл.
Так как эксперимент хронический (среднее время выявления первичного опухолевого узла составляет 5-6 суток), на практическом занятии дополнительно демонстрируются животные на разных стадиях развития ЛФС: 6, 12, 18 суток.
|
|
|
Опыт №2. Микроскопическое изучение мазков крови животных с формирующейся ЛФС на разных стадиях опухолевого процесса.
Чистое предметное стекло нагревают в открытом пламени горелки и наносят на него каплю насыщенного раствора бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте и делают из него мазок по общепринятой технологии. Каплю крови крысы с формирующейся ЛФС (на 3, 6, 9, 12, 15 и 18 сутки от момента перевивки) наносят на мазок краски, готовят из нее мазок и помещают стекло во влажную камеру (чашка Петри с небольшим валиком смоченной водой ваты) на 3–5 минут. Затем мазки высушивают на воздухе. Ретикулоциты окрашиваются в зеленовато-голубой цвет, а внутриклеточная зернистая субстанция — в фиолетово-синий.
Производят подсчет ретикулоцитов и их отношение к числу эритроцитов. Данные о количестве ретикулоцитов (в процентах от общего числа эритроидных клеток) представляют в виде диаграммы.
Список литературы
1. Васильев Ю.М. Поисковые миграции клеток в нормальном развитии и в канцерогенезе / Ю.М. Васильев, И.М. Гельфанд // Биохимия. – 2006. – Т. 71. Вып. 8. – С. 1013 – 1020.
|
|
|
2. Копнин Б.П. Неопластическая клетка: основные свойства и механизмы их возникновения / Б.П. Копнин // Практическая онкология. – 2002. – Т. 3. №4. – С. 229 – 235.
3. Имянитов Е.Н. Молекулярная онкология: клинические аспекты / Е.Н. Имянитов, К.П. Хансон. – СПб.: СПбМАПО, 2007. с. 212.
4. Глушков А.Н. Общебиологические закономерности и механизмы канцерогенеза / А.Н. Глушков // Медицина в Кузбассе. – 2004. – № 1. – С. 3 – 9.
5. Greenblatt M.S. Mutations in the p53 tumor suppressor gene: clues to cancer etiology and molecular pathogenesis / M.S. Greenblatt, W.P. Bennett, M. Hollstein, C.C. Harris // Cancer Research. – 1994. – 54. – Р. 4855 – 4878.
6. Попова Н.А. Модели экспериментальной онкологии / Н.А. Попова // Соросовский образовательный журнал. – 2000. – Т.6. №8. – С. 33 – 38.
7. Плисс Г.Б. Онкологическая характеристика нового штамма лимфосаркомы крысы / Г.Б. Плисс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 1961. – № 2. – С. 95 – 99.
8. Васильев А.Г. Влияние пола животного и количества трансплантируемых опухолевых клеток на развитие Плисса / А.Г. Васильев, Н.В. Хайцев, А.П. Трашков, М.А. Реутин // Вестник Санкт-Петербургского университета. Сер. 11. Медицина. – 2009. – Вып. 2. – С. 135 – 142.
Дата добавления: 2019-03-09; просмотров: 376; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!