Методы исследования венозной крови
Методы исследования венозной крови более эффективны благодаря большому объему (не менее 1 мл) исследуемой крови.
Метод концентрации микрофилярий в осадке по Кнотту
Необходимые реактивы и оборудование
Раствор уксусной кислоты 1%-й или раствор формалина 2%-й
Обезжиренные центрифужные пробирки
Обезжиренные предметные стекла
Дистиллированная вода
Краска Романовского-Гимза
Иммерсионное масло
Центрифуга
Микроскоп, стереомикроскоп
Подготовка к исследованию
1) Кровь из вены (1 мл) собирают в центрифужную пробирку, гемолизируют 9 мл 1%-го раствора уксусной кислоты.
2) Пробирки центрифугируют при 2000 об./мин в течение 3 мин.
3) Полученный осадок (0,5-1,0 мл) переносят на обезжиренные предметные стекла и микроскопируют в нативном виде.
4) Препараты с обнаруженными личинками высушивают, фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе.
5) Идентификация вида личинок проводится под иммерсией ( 
90).
Метод мембранной фильтрации микрофилярий по Беллу, модифицированный Супрягой и Андреенковым
Необходимые реактивы и оборудование
Раствор уксусной кислоты 1%-й или раствор формалина 2%-й
Обезжиренные центрифужные пробирки
Обезжиренные предметные стекла
Дистиллированная вода
Мембранные фильтры с диаметром пор 0,8-5,0 мкм
Краска Романовского-Гимза
Иммерсионное масло
Установка для вакуумного фильтрования
|
|
|
Фильтродержатель
Центрифуга
Микроскоп, стереомикроскоп
Специальное оборудование: аппарат для фильтрации крови состоит из воронки-фильтродержателя с прямоугольным отверстием размером меньше фильтра. Для ускорения фильтрации используют вакуум.
Подготовка к исследованию
1) К 1 мл крови в центрифужной пробирке добавляют 9 мл 1-3%-го раствора уксусной кислоты или 2%-го раствора формалина.
2) Фильтруют гемолизированную кровь и смывы 2-3 раза с пробирки на мембранные фильтры под вакуумом.
3) Полученный осадок на фильтре под вакуумом фиксируют крутым кипятком в объеме 20-30 мл и фильтры вынимают из фильтродержателя.
4) Фильтры высушивают и окрашивают по Романовскому-Гимзе.
5) Контроль качества окраски личинок в препаратах проводится по степени окрашивания ядер лимфоцитов.
6) Окрашенные фильтры тщательно споласкивают водой и высушивают.
7) Микроскопирование фильтров проводят на предметном стекле, предварительно покрыв всю поверхность фильтра тонким слоем иммерсионного масла, при малом увеличении с применением препаратоводителя.
8) Идентификацию окрашенных микрофилярий проводят под иммерсией ( 90), их количество учитывают отдельно по видам.
|
|
|
Примечание. Вместо специального аппарата можно использовать шприц с фильтродержателем: 25-миллиметровый держатель Суини с 25-миллиметровой мембраной "Миллипор" размером пор 5 мкм, который поддерживается снизу мягкой прокладкой.
Микрофилярии на окрашенных фильтрах, пропитанных иммерсионным маслом, сохраняют морфологические признаки в течение 5 лет и более.
Микроскопическое исследование препаратов крови
Нативные неокрашенные препараты микроскопируют с помощью любого стереоскопического бинокулярного микроскопа при увеличении: окуляр 12,5; объектив 2, 4, 6 последовательно.
Идентификация личинок
Идентификацию личинок на окрашенных препаратах проводят на любом световом микроскопе при увеличении окуляра 10, объектива 10, 20, 40.
Микрофилярии идентифицируют по морфологическим признакам:
наличие чехлика W. bancrofti, В. malayi, Loa loa - чехлик выступает за головной и хвостовой концы тела;
отсутствие чехлика М. perstans, M. ozzardi;
расположение окрашенных ядер соматических клеток внутри тела - на хвостовом конце в виде ядерной колонки (диагностический признак);
W. bancrofti - ядерная колонка заканчивается несколькими удлиненными ядрами, не доходящими до вершины хвостового конца;
|
|
|
В. malayi - ядерная колонка не доходит до хвостового конца. Отдельно от ядерной колонки и друг от друга расположены два ядра, одно - субтерминально на самой хвостовой вершине;
Loa loa - одноядерная колонка доходит до вершины хвостового конца;
М. perstans - ядерная колонка компактная по всей длине тела, форма хвостового конца - пальцевидная;
М. ozzardi - ядерная колонка заполняет хвостовой конец, форма хвостового конца - суженная;
ядра соматических клеток у всех видов микрофилярий на головном отделе отсутствуют (прилож.6).
Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 239; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!