Методы приготовления постоянных окрашенных препаратов кала
Методы приготовления постоянных окрашенных препаратов из нативного кала включают применение фиксирующих смесей на основе сулемы и окраску препаратов трихромовым методом или по Цилю-Нильсену, что позволяет выявлять морфологию ядерных структур.
Метод окрашивания трихромовой краской
Самый простой и быстрый метод для обнаружения структуры ядер и компонентов цитоплазмы амеб.
Необходимые реактивы и оборудование
Предметные стекла обезжиренные, желательно с шлифованным краем, покровные стекла 24 
24 мм
Батарея стеклянных банок с притертыми крышками для хранения и использования реактивов при окраске: диаметр горла не менее 24 мм для погружения предметного стекла
Стеклянные палочки
Пинцет пластмассовый
Фильтровальная бумага
Фиксатор Шаудина
Этанол 95%-й
Этанол 70%-й
Этанол абсолютный
Обесцвечивающий раствор уксусной кислоты и спирта
Карбол-ксилол
Раствор йода и спирта
Раствор трихромовой краски
Ксилол
Канадский бальзам или же его быстро высыхающие заменители
Сыворотка любая
Подготовка к исследованию
1) Приготовить тонкий мазок из исследуемого нативного кала.
1а. Если используется осадок после седиментации, каплю осадка смешать с каплей любой сыворотки (для лучшего прилипания) и распределить по стеклу. Мазки готовить быстро, не допуская высыхания препарата.
|
|
|
2) Фиксировать мазок в смеси Шаудина в течение часа (при необходимости мазок может быть оставлен в фиксаторе до 2 дней).
3) С помощью пластмассового пинцета вынуть стекло, слегка обсушить фильтровальной бумагой, но не досуха!
4) Выполнять п.3 после каждого этапа работы.
5) Поместить стекло в 70%-й этанол-1 на 1 мин.
6) Поместить стекло в 70%-й этанол-2 на 1 мин.
Внимание! На этапе работы в п.5 процесс окраски при необходимости может быть приостановлен. После завершения этого этапа процесс прерывать нельзя!
7) Окрасить смесью трихром - 8 мин.
8) Обесцветить мазок раствором уксусной кислоты со спиртом: 2-кратным погружением стекла.
9) Погрузить препарат в 95%-й этанол-1 на 1-2 сек.
10) Погрузить препарат в 95%-й этанол-2 на 2-3 сек.
11) Обезводить в карбол-ксилоле или абсолютном спирте 1 мин.
12) Просветлить препарат в ксилоле - 2-3 мин.
13) Препарат высушить и сразу же нанести каплю (или несколько капель) бальзама.
14) Закрыть покровным стеклом.
15) Микроскопировать препараты следует сначала при большом увеличении: окуляр 10, объектив 40, находя похожие по размеру объекты - на малом увеличении, а затем с водной или масляной иммерсией при увеличении: окуляр 10, объектив 90 или окуляр 10, объектив 100.
|
|
|
Результаты окрашивания
Цитоплазма простейших окрашивается в зеленовато-голубой или зеленый цвет. Ядра и их структуры (кариосомы, периферический хроматин), хроматоидные тельца в цистах амеб, филаменты в цистах жгутиковых окрашиваются в красный или фиолетовый цвет. Гликоген растворяется, и в цитоплазме будут видны пустые участки. Оттенки окрашивания могут варьировать и зависят от точности соблюдения экспозиций, сроков использования и замены реагентов (пропись - прилож.8).
Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 2425; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!