Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ)
ИЭМ представляет собой метод непосредственной визуализации взаимодействия антигена с антителом. Это было впервые предложено для вирусологических исследований Дж. Альмейда и А. Ватерсоном в 1969г.
Методически тест ИЭМ выполняется в следующей последовательности:
- материал, в котором предполагается наличие искомого вируса, смешивается и инкубируется со стандартной иммунной сывороткой;
- комплекс вирус-антитело осаждается центрифугированием в подходящих для него режимах;
- к ресуспендированному осадку добавляется контрастирующее вещество, и полученный препарат исследуется под электронным микроскопом.
В случае положительной реакции выявляются характерные агрегаты, состоящие из вирусных частиц, соединенных между собой мостиками из антител. Порог чувствительности ИЭМ невысок. Преимуществом метода является возможность оценивать не только исход серологической реакции, но и идентифицировать ее морфологический субстрат, т. е. определить форму и размер вирусных частиц. При наличии препаратов вируса с известным содержанием частиц ИЭМ может применяться и для количественного определения антител в сыворотках, для чего предложена специальная система учета интенсивности взаимодействия вируса и антител.
На начальных этапах работы с вирусными гепатитами ИЭМ широко использовалась в диагностических и исследовательских целях; с ее помощью, в частности, были идентифицированы вирус гепатита А и вирус гепатита Е . После появления новых, более практичных, тестов для массовых исследований клинических материалов диагностика гепатитов с помощью ИЭМ постепенно утратила свое значение, но ее возможности по-прежнему ценны для характеристики морфологически отличных от вируса антигенов или каких-либо ранее неизвестных вирусных агентов.
|
|
|
РЕАКЦИИ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ (РН)
Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой
Этот тип иммунологической реакции основан на способности специфических антител – антитоксинов подавлять биологическую активность бактериальных экзотоксинов.
Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой in vitro.
1.Реакция флоккуляции. Феномен флоккуляции – помутнение – внешнее проявление образования комплекса экзотоксин (анатоксин) + антитоксин в оптимальных количественных соотношениях ингредиентов.
Реакция применяется:
- для определения специфической активности токсинов (анатоксинов) по стандартной антитоксической сыворотке. Активность выражается в Limes flocculationis (Lf – порог флокуляции) или иммуногенной единицей (ИЕ). Lf – это то количество токсина (анатоксина), которое даёт интенсивную, «инициальную» флокуляцию с 1МЕ сыворотки
|
|
|
- для титрования антитоксических сывороток по известному анатоксину или токсину (метод Рамона). Сила антитоксических сывороток выражается содержанием международных антитоксических единиц (МЕ) в 1 мл. За 1МЕ принимается то минимальное количество сыворотки, которое даёт интенсивную «инициальную» флоккуляцию с 1 Lf анатоксина (токсина). Например, это реакция применяется для определения активности дифтерийного, столбнячного, ботулинического, гангренозного анатоксинов и титрования противодифтерийной, противостолбнячной, противоботулинической, противогангренозной и др. антитоксических сывороток.
2. Выявление токсигенности возбудителя дифтерии в РП в геле по Оухтерлоне (см. раздел «РП»).
Реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой in vivo
Реакция нейтрализации на животных применяется
- для определения специфической активности анатоксинов и опытной дозы токсина по стандартной антитоксической сыворотке (дифтерийной, столбнячной и др.) . Активность анатоксинов выражается в единицах связывания (ЕС). ЕС – количество анатоксина, которое целиком связывается с 1МЕ/мл антитоксической сыворотки;
|
|
|
- для идентификации токсина бактерий (возбудителей газовой анаэробной инфекции, столбняка, ботулизма и др.) по стандартной антитоксической сыворотке;
- для титрования антитоксических сывороток (противодифтерийная, противостолбнячная, и др.) по стандартному токсину. Титрование – это определение количества антитоксинов в 1 мл сыворотки. Специфическая активность сывороток выражается в международных антитоксических единицах (МЕ). 1МЕ – минимальное количество сыворотки, которое способно нейтрализовать определенную дозу токсина, выражающуюся в стандартных единицах: смертельных, некротических или реактивных дозах в зависимости от вида токсина и способа титрования.
Титрование антитоксических сывороток может производиться следующими методами:
Метод Эрлиха. Титрование антитоксических сывороток по известной смертельной (опытной) дозе токсина.
Проводится в 2 этапа:
1) определение опытной дозы токсина. Смертельная доза – это количество токсина, которое в смеси с 1МЕ стандартной сыворотки вызывает гибель 50% взятых в опыт животных.
2) к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсина, инкубируют 45 минут и вводят животным. По результатам производят расчет титра сыворотки.
|
|
|
Метод Ремера Титрование антитоксических сывороток по известной некротической дозе токсина.
Проводится в 2 этапа:
1) определение опытной некротической дозы токсина путём внутрикожного введения морской свинке различного количества токсина со стандартной сывороткой. Некротическая доза токсина – это его минимальное количество, которое в смеси с 1/50МЕ стандартной сыворотки вызывает на месте внутрикожного введения некроз на 4-5 – й день;
2) к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсина и вводят внутрикожно морской свинке.
По результатам производят расчёт титра сыворотки. Так титруется противодифтерийная сыворотка.
Дата добавления: 2019-01-14; просмотров: 1495; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!