Оценка неспецифической резистентности
1.Оценка бактерицидной активности кожи по Клемпарской.
Принцип метода: на поверхность кожи предплечья наносится культура E.coli. Через определенные промежутки времени определяют количество жизнеспособных бактерий методом отпечатков.
На основании полученных результатов рассчитывается индекс бактерицидности (ИБ) по формуле:
КО – К20
ИБ=---------------- х 100, где
КО
КО – количество колоний сразу после контаминации кожи;
К20 – количество колоний через 20 минут.
В норме ИБ 95%
2. Определение активности комплемента с помощью РСК.
3. Определение активности лизоцима.
Титр лизоцима – это максимальное разведение исследуемого материала (слюны), в котором еще проявляется литическая активность лизоцима по отношению к эталонному штамму микроорганизмов (Micrococcus lysodeicticus).
4. Оценка фагоцитоза.
А. Определение процента активных фагоцитов – это количество клеток, обладающих фагоцитарной активностью. В норме – не менее 50%.
Фагоцитарное число – среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом. В норме 4-6.
Принцип метода: в цитратную кровь вносят культуру стафилококков и инкубируют в термостате 30 минут. Затем готовят мазки, окрашивают их по Романовскому, микроскопируют и рассчитывают показатели.
Б. Оценка завершенности фагоцитоза.
Принцип метода: в цитратную кровь вносят культуру кишечной палочки и делают мерный высев на питательную среду. После 120 минутной инкубации в термостате мерный высев повторяют и инкубируют оба посева в термостате. Через сутки проводят подсчет колоний и рассчитывают процент завершенности фагоцитоза (ЗФ) по формуле:
|
|
|
КО – К30
ЗФ= ------------------- х 100, где
КО
КО – количество колоний сразу после инокуляции;
К30 – количество колоний через 120 минут.
В норме завершенность фагоцитоза – 50-99%
Методы оценки клеточного иммунитета
Количественная оценка.
1.Определение количества Т- лимфоцитов методом Е – розеткообразования (Е-РОК).
Принцип метода: на первом этапе методом центрифугирования в градиенте плотности из крови выделяют лимфоциты. На втором этапе с помощью реакции розеткообразования с эритроцитами барана определяют процент Т-лимфоцитов от общего числа. Реакция розеткообразования основана на наличии на поверхности Т-лимфоцитов рецепторов, способных фиксировать эритроциты барана. Поэтому при добавлении к суспензии лимфоцитов эритроцитов барана, последние адсорбируются Т- лимфоцитами. Образующиеся при этом структуры называются розетками. Розеткообразующей считается клетка, окруженная с тремя и более эритроцитами. Общее количество лимфоцитов подсчитывают под микроскопом и количество розеток.
|
|
|
2. Определение количества Т-лимфоцитов ( CD3+) и их субпопуляций - Т- хелперов ( CD4+) и Т- киллеров ( CD8+) в реакциях иммунофлюоресценции (РИФ), ИФА и проточной цитометрии.
Принцип РИФ: лимфоцитарная взвесь обрабатывается моноклональными антителами против отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов, а затем – меченой флюорохромом антиглобулиновой сывороткой. Подсчет флюоресцирующих клеток проводят под люминесцентным микроскопом (двухэтапная РИФ).
3.Определение иммунорегуляторного индекса (соотношения CD4+_/CD8+)
Качественная (функциональная) оценка.
1. Оценка способности к пролиферации в реакции бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ).
Принцип метода: Т- лимфоциты под воздействиемнон некоторых биостимуляторов, например, фитогемагглютинина (ФГА) в культуре in vitro способны превращатся в большие бластоподобные клетки с разрыхленным ядром и базофильной цитоплазмой, активно синтезирующие ДНК.
2.Определение цитокинов (ИФН-α, ИЛ-2, -4, -6, ФНО) с помощью ИФА и проточной цитометрии.
|
|
|
3.Постановка кожно-аллергических проб с целью выявления Т клеток ГЗТ и другие.
Методы оценки гуморального иммунитета
Количественная оценка
1.Определение количества В-лимфоцитов методом ЕАС – розеткообразования (ЕАС-РОК).
Принцип метода: аналогичен реакции розеткообразования для выявления Т-лимфоцитов, но вместо эритроцитов барана используются эритроциты быка (Е), нагруженными антителами (А) и комплементом (С). взаимодействие обусловлено наличием у В-лимфоцитов рецепторов к комплементу.
2.Определение числа В-лимфоцитов ( CD20+ или CD19+) с помощью ИФА и проточной цитометрии.
Качественная (функциональная) оценка.
1.Определение концентрации иммуноглобулинов в реакции преципитации по Манчини и ИФА.
Принцип метода метода по Манчини: образцы исследуемой сыворотки помещают в лунки агарового геля, который содержит антитела против иммуноглобулина определенного класса. Иммуноглобулины, диффундирующие в агар, при взаимодействии с соответствующими антителами образуют кольца преципитата, диаметр которых пропорционален концентрации иммуноглобулинов соответствующего класса в исследуемой сыворотке. Концентрацию иммуноглобулина определяют по заранее построенному с помощью эталонных сывороток графику (калибровочной кривой).
|
|
|
2.Определение функциональной активности лимфоцитов с помощью РБТЛ на В-митоген.
3.Определение продукции ИЛ-6 с помощью ИФА и проточной цитометрии.
КОЖНЫЕ АЛЛЕРГИЧЕСКИЕ ПРОБЫ
Применяются для выявления ГЗТ (инфекционной аллергии). ГЗТ – реакция, опосредованная Т- лимфоцитами играют важную роль в патогенезе многих инфекций (туберкулеза, лепры, бруцеллеза, сифилиса и др.). Для постановки аллергических проб применяются аллергены (корпускулярные и растворимые).
Растворимые аллергены - отдельные фракции клеточной стенки, выделенные из микробов.
Очищенный туберкулин (ППД - Л) – очищенный белок (низкомолекулярный белок) туберкулезной палочки. Применяется для выявления аллергии к возбудителю туберкулеза (проба Манту).
Аллерген бруцеллезный (бруцеллин) – полисахаридно-белковый комплекс B. аbortus. Применяется для выявления аллергии к возбудителю бруцеллеза.
Аллерген сибироязвенный (антраксин) – белковонуклиосахаридный комплекс. Применяется для выявления аллергии к возбудителю сибирской язвы.
Корпускулярные аллергены (взвесь убитых микробов):
Аллерген туляримийный (тулярин) применяется для выявления аллергии к возбудителю туляремии.
Лепромин применяется для выявления аллергии к возбудителю лепры.
Принцип метода: внутрикожно или накожно в ладонную поверхность предплечья вводится небольшое количество аллергена. При наличии инфекционной аллергии через 24-48-72 час. Развивается инфекционная аллергия в виде гиперемии, инфильтрата, отека кожи (см. прилож. 3, рис.17).
СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ
Задача 1. Из испражнения больного с подозрением на дизентерию выделена чистая культура Sh.flexneri. Какая серологическая реакция позволит определить серотип возбудителя для расшифровки эпидемиологической обстановки? Назовите компонентов реакции.
Задача 2. В клинику поступил больной с предполагаемым диагнозом: «Грипп», «Парагрипп». Для экспресс - диагностики поставлен непрямой способ РИФ. Назовите компонентов реакции.
Задача 3. В инфекционную больницу поступили двое больных с предполагаемым диагнозом «Гепатит А». У первого больного в сыворотке крови обнаружены IgM против вируса гепатита А, а у второго – IgG. С помощью какого метода можно определить Ig? У кого из больных подтвержден диагноз и почему?
Задача 4. Выделена чистая культура вируса полиомиелита. Требуется определение серотипа вируса (1,2,3) в реакции нейтрализации на тканевой культуре. Назовите ингредиентов и механизм реакции.
Задача 5. В вирусологическую лабораторию поступил материал (ликвор) от больного с предположительным диагнозом: «Клещевой энцефалит». После выделения чистой культуры вируса осуществляется идентификация вируса в РН на мышах. Назовите ингредиентов и механизм реакции.
Задача 6. В лабораторию поступила сыворотка крови пациента переболевшего брюшным тифом. С помошъю какой серологической реакции можно установить брюшнотифозное бактерионосительство? Назовите ингредиентов.
Задача 7. Выделить чистую культуру М.pneumoniae удается редко и не ранее через месяц. В связи с этим основным методом диагностики пневмоний является серодиагностика, которая осуществляется постановкой РСК. Назовите компонентов реакции.
Задача 8. При исследовании отделяемого зева больного выделена культура С. Diphteriae. Какой метод следует применить для определения ее токсигенности? Назовите ингредиентов реакции.
Задача 9. Для уточнения диагноза заболевания больного с подозрением на бруцеллез необходимо использовать опсонофагоцитарную реакцию. Какие ингредиенты следует подготовить для ее постановки? Что такое опсонины, фагоцитарный показатель и опсонический индекс?
Задача 10. Какие ингредиенты необходимо подготовить для постановки непрямого способа ИФА с целью определения Т хелперов?
Задача 11. У больного с хроническим сепсисом необходима оценка иммунологического статуса. Какие ингредиенты необходимо подготовить для постановки непрямого способа ИФА с целью определения В- лимфоцитов?
Задача 12. У ребенка 3 лет подозревают наличие иммунодефицитного состояния. Какие показатели будут использованы для оценки В- системы иммунитета и какие тесты будут включены в иммунологический анализ?
Задача 13. В лабораторию поступила кровь от больного брюшным тифом для постановки реакции агглютинации. Какие ингредиенты будут использованы для ее постановки? Какой показатель реакции будет использован в качестве диагностического?
Задача 14. Из испражнений больного выделена Е. сoli . Какие методики реакции агглютинации будут использованы для идентификации культуры?
Ответ: РА на стекле капельным способом. Положительная реакция подтверждается развернутой РА.
Задача 15. В детском саду планируется ревакцинация детей против туберкулеза. Какую аллергическую пробу и с какой целью предварительно сделать детям? Какой препарат применяется для постановки пробы?
Задача 16. В лабораторию поступил материал (кожа из полушубка) для выявления возбудителя сибирской язвы. Какую серологическую реакцию следует применить для обнаружения антигенов возбудителя в исследуемом материале? Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки?
Задача 17. В лабораторию поступила кровь больного с подозоением на грипп. Для подтверждения диагноза необходимо поставить РСК. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? По какому признаку будете оценивать положительный или отрицательный результат реакции?
Задача 18. Выделена культура вируса гриппа А заражением в аллантоисную полость куриного эмбриона. Необходимо поставить РТГА с целью определения серотипа вируса гриппа. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? По какому признаку можно оценить результат реакции?
Задача 19. В лабораторию поступил смыв из носоглотки больного аденовирусной инфекцией. Необходимо поставить реакцию нейтрализации с диагностической целью. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? Оцените результат.
Задача 20. В детском садике планируется осуществить вакцинацию против дифтерии и столбняка АДС вакциной. Какую иммунологическую реакцию используют для определения напряженности поствакцинального иммунитета? Какие ингредиенты следует подготовить? Как оценивается реакция?
Задача 21. В лабораторию института вакцин и сывороток поступила противодифтерийная сыворотка для определения ее специфической активности. Какую реакцию следует использовать для этой цели? Какие ингредиенты следует приготовить для ее постановки?
Задача 22. В лабораторию поступила кровь от больного с подозрением на эпидемический сыпной тиф. При изучении ее в реакции агглютинации получен положительный результат (титр сывороки 1:800). Антитела при сыпном тифе обнаруживаются с 5-6-го дня болезни, достигая максимума к 14-16-му дню и сохраняются в организме переболевших долгие годы.
Удалось ли поставить этиологический диагноз? Почему? Какие дополнительные исследования можно предложить?
Задача 23. У доярки совхоза при исследовании крови на наличие антител к бруцеллам обнаружен титр 1:200. Как доказать, больна ли доярка в настоящий момент или этот показатель - результат прививки?
Задача 24. В хирургическом отделении у больного развилось осложнение послеоперационной раны. Клинически была заподозрена газовая гангрена. Поставлена РНГА для обнаружения экзотоксина в крови больного. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки?
Задача 25. В порт прибыл корабль с грузом из Африки. Карантинная служба порта обнаружила в трюмах трупы крыс. Укажите метод серологического исследования термоэкстракта трупного материала крыс. Предполагаемый диагноз чума.
Задача 26. Мужчина 40 лет обратился к врачу на 8- й день болезни. Несколько дней назад он купался в реке, выше по течению которой было место скота. Среди животных в данной местности регистрировались заболевания лептоспирозом. Врач заподозрил возможность лептоспироза. Для подтверждения диагноза необходимо поставить реакцию агглютинации - лизиса. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? По какому признаку будете оценивать положительный или отрицательный результат реакции? Как оценивается реакция? Назовите механизм реакции.
Задача 27. В одном из детских садов зарегистрированы случаи заболевания скарлатиной. Как проверить наличие антитоксического иммунитета к скарлатине у контактных детей? Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки?
Задача 28. Первые опыты по противотуберкулезной иммунизации были проведены Р. Кохом. Он многократно вводил туберкулин морской свинке, а затем и инфицировал ее микобактериями туберкулеза. Животное погибало от туберкулеза через 2-4 недели. Почему у животных отсутствовал иммунитет против туберкулеза?
ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ
Дата добавления: 2019-01-14; просмотров: 594; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!