Постановка основного опыта РСК Борде - Жангу.
В начале в 2 пробирки разливается инактивированная и разведённая 1:5 испытуемая сыворотка. Затем в 1-ю пробирку приливается антиген, во вторую физиологический раствор. После этого во все пробирки добавляются рабочая доза комплемента.
После смешивания ингредиентов штатив с пробирками помещается в термостат при 37 0С на 30 минут (горячее связывание). При холодном связывании штатив с пробирками помещается в ледник при температуре -40С на 18 часов. После выдерживания в термостате во все пробирки добавляется гемолитическая система. Реакция ставится в объёме 0,5 мл. Пробирки снова помещают в термостат на 2 часа, после чего производится предварительная регистрация результатов. Пробирки остаются при комнатной температуре, а на следующий день отмечается окончательный результат.
Степень интенсивности реакции оценивается в плюсах. Полная задержка гемолиза - четыре плюса (++++), неполная - три, и один плюс. Полный гемолиз обозначается минусами (-).
РСК Вассермана
Ставится для диагностики сифилиса с целью обнаружения антител, а также для определения эффективности специфической терапии. Она основана на принципе реакции связывания комплемента Борде-Жангу. Существенным отличием реакции Вассермана является неспецифичность антигена: в качестве антигена употребляют липоидные экстраты из нормальных органов животных.
Для постановки реакции Вассермана необходимо иметь сыворотку больного, диагностикумы перекрестнореагирующие антигены № 1 и № 2, комплемент, гемолитическую сыворотку, эритроциты барана, физиологический раствор.
|
|
|
Диагностикум № 1 - специфический, трепонемный.
Диагностикум №2 - неспецифический, кардиолипиновый антиген, который представляют собой высокоочищенный экстракт бычьего сердца, имеющий постоянный химический состав липоидов. Липоиды, экстрагированные из сердца, по химическому составу близки к липоидам бледной трепонемы, поэтому хотя и не являются специфическими, но фиксируют антитела против спирохеты. Указанные антигены выпускаются централизованно и в реакцию употребляются, разведёнными согласно к титру, указанному на этикетке.
Одновременно с основным опытом ставят 2 контроля: с заведомо отрицательной и заведено положительной сыворотками.
Постановка основного опыта.
В начале в 3 пробирки разливается инактивированная и разведённая 1:5 испытуемая сыворотка. Затем в 2 пробирки разливаются антигены (№ 1, № 2), в 3-ю пробирку физиологический раствор. После этого во все пробирки добавляется рабочая доза комплемента. После смешивания ингредиентов штатив с пробирками помещается в термостат при 370 С на 30 минут. После выдерживания в термостате во все пробирки добавляется гемолитическая система. Пробирки снова помещают в термостат на 2 часа, а затем оставляют при комнатной температуре. На следующий день отмечают результат. Степень интенсивности реакции оценивается в плюсах. Полная задержка гемолиза - четыре плюса (++++), три (+++), два (++) и один (+) - в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне. Полный гемолиз обозначаются (-) минусом. При резком расхождении результатов с различными антигенами опыт повторяют с новой порцией крови.
|
|
|
Реакция радиального гемолиза
Реакция радиального гемолиза применяется для определения антител против вирусов гриппа, краснухи, клещевого энцефалита, активности комплемента, гемолитической сыворотки.
Компоненты реакции:
1) исследуемая сыворотка крови с неизвестными противовирусными антителами;
2) антигены вирусов, адсорбированные на поверхности эритроцитов барана;
3) комплемент (сыворотка морской свинки в рабочей дозе);
4) агарозный гель.
Реакцию ставят в лунках геля из агара, содержащего вирусных антигенов , адсорбированных на поверхности эритроцитов и комплемента. После внесения в лунки геля исследуемой сыворотки с антителами (лизинами, связывающих комплемент) вокруг них, в результате радиальной диффузии АТ, образуется зона гемолиза, т.к. АТ взаимодействует с антигенами, адсорбированными на эритроцитах, после чего к этому комплексу присоединяются компоненты комплемента, что заканчивается активацией системы комплемента и гемолизом эритроцитов. Размеры зоны гемолиза прямо пропорциональны титру сыворотки.
|
|
|
Реакция иммунного прилипания
Реакции иммунного прилипания основана на активации системы комплемента антигенами микроорганизмов (бактериями, вирусами), обработанными иммунной сывороткой. На эритроцитах, тромбоцитах, макрофагах имеются рецепторы для компонентов комплемента, благодаря чему при смешивании этих клеток с иммунным комплексом (АГ – АТ - С), происходит их соединение и агглютинация.
Компоненты:
1) исследуемая сыворотка с неизвестными АТ-ми;
2) антигены микроорганизмов (например, антиген стафилококка)
3) комплемент;
4) форменные элементы крови (эритроциты, тромбоциты, макрофаги)
Дата добавления: 2019-01-14; просмотров: 386; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!