РЕАКЦИЯ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ ВИРУСОВ
Реакция нейтрализации основана на способности специфических вируснейтрализующих антител блокировать инфекционные, гемагглютинирующие, гемадсорбирующие, цитопатические, бляшкообразующие и др. свойства вирусов. Она применяется в двух направлениях:
1) для идентификации вирусов;
2)для серодиагностики вирусных инфекций, т.е. для определения нарастания титра вируснейтрализующих антител в «парных» сыворотках.
Компоненты:
1.Исследуемый вирус (при идентификации выделенного вируса) или исследуемая сыворотка (при серодиагностике инфекции).
2.Диагностическая (группо-, видо-, типоспецифическая) сыворотка (при идентификации вируса) или известный вирус – диагностикум (при серодиагностике).
3.Индикаторный объект: животные, куриные эмбрионы, культуры тканей или эритроциты.
Реакции нейтрализации in vivo ставят в культурах клеток (см. прилож. 3, рис.15), куриных эмбрионах и на лабораторных животных.
Принцип. Смесью вирус (исследуемый или известный) + сыворотка (диагностическая или исследуемая), выдержанной в течение определенного времени, заражают культуру клеток, куриный эмбрион или лабораторное животное. При (+) реакции, т.е. при нейтрализации вируса антителами индикаторные объекты продолжают нормально существовать, а в контроле – гибель или характерные изменения.
Реакция нейтрализации in vitro – реакция торможения гемагглютинации (РТГА) .
РТГА применяется:
|
|
|
- для серотипирования вирусов;
- для серодиагностики инфекций.
Выделяют два способа постановки:
- капельный способ на стекле (ориентировочная реакция), применяется для серотипирования вирусов;
- развернутый в пробирках.
Механизм. У некоторых вирусов (например, гриппа) есть гемагглютинин, вызывающий агглютинацию эритроцитов различных животных в зависимости от вида вируса: При наличии в сыворотке антител – антигемагглютининов наблюдается ингибированные активности вирусов (см. прилож. 3, рис.16).
РТГА. Цель: серотипирование вируса гриппа А.
Компоненты.
1.Исследуемый материал – аллантоисная жидкость куриного эмбриона.
2.Диагностические противогриппозные типоспецифические сыворотки.
3.5% взвесь куриных эритроцитов.
4.Физиологический раствор.
Реакция ставится на стекле капельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток и исследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, а при отрицательной – выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).
ОПСОНО – ФАГОЦИТАРНАЯ РЕАКЦИЯ
Применяется для определения опсонинов – антител, стимулирующих фогоцитарную активность лейкоцитов, т.е. серодиагностики инфекций, например, бруцеллёза.
|
|
|
Усиление фагоцитоза происходит за счёт присоединения опсонинов с активными центрами (Fав – фрагмент) к детерминантам бактерий, а затем с помощью Fc – фрагментов к Fc – рецепторам фагоцитов. В нормальной сыворотке содержится небольшое количество опсонинов, которые проявляют свое действие в присутствии комплемента. В иммунной сыворотке опсонинов больше и их активность в меньшей степени зависит от комплемента.
| Компоненты | опыт | Контрль |
| 1. Исследуемая сыворотка 2. Нормальная сыворотка 3. Суточная микробная культура (напр., стафилококковая) 4. Фагоциты – взвесь нейтрофилов | + - + + | - + + + |
Инкубация при 370С в течение 30 минут. Из каждой пробирки готовят мазки, окрашивают по Романовскому – Гимзе и считают под микроскопом количество микробов в 100 и более нейтрофилах, т.е. определяют фагоцитарный показатель.
Фагоцитарный показатель – количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом.
Опсонический индекс – фагоцитарный показатель иммунной (исследуемой) сыворотки / фагоцитарный показатель нормальной сыворотки.
Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), тем выше иммунитет.
|
|
|
Опсоно-фагоцитарный индекс – это цифровой показатель = количество фагоцитов х оценка фагоцитоза (в зависимости от количества поглащенных микробов). Максимальный показатель – 75.
ИММУННЫЙ СТАТУС
Иммунный статус определяется совокупностью показателей специфических и неспецифических факторов защиты и характеризует индивидуальную иммунореактивность организма. Оценка иммунного статуса имеет значение:
-для выявления иммунологической недостаточности (иммунодефицита) и других патологических нарушений работы иммунной системы;
-наблюдения за эффективностью иммунодепрессивной или иммуностимулирующей терапии;
-определения показаний и выбора терапевтических препаратов.
Исследование иммунного статуса включает проведение тестов 1-го и 2-го уровней.
Тесты 1-го уровня (ориентирующие):
1.определение факторов естественной резистентности (БАС, лизоцим, комплемент и др.);
2.подсчет абсолютного и относительного числа лимфоцитов в периферической крови;
3.подсчет числа Т- и В- лимфоцитов;
4.оценка фагоцитарной активности лейкоцитов;
5.определение концентрации разных классов иммуноглобулинов.
Тесты 2-го уровня (аналитические):
1.определение субпопуляции Т- лимфоцитов;
2.определение функциональной активности Т- и В- лимфоцитов;
3.определение медиаторов иммунной системы;
4.Тесты на ГЧЗТ.
Дата добавления: 2019-01-14; просмотров: 465; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!