Методика окрашивание гематоксилином и эозином
Окраска гематоксилином и эозином наиболее распространенный метод окрашивания срезов для обзорного изучения материала, так как дает возможность установить взаимоотношение структур тканей и их состояние, а также выявить патологические изменения.
Окраска гематоксилином и эозином является двойной: гематоксилин – основной краситель и окрашивает ядра в сине-фиолетовый цвет, эозин – кислый краситель и окрашивает цитоплазму в розовый цвет и в меньшей степени различные внеклеточные структуры. Гематоксилин представляет собой экстракт древесины кампешевого дерева, произрастающего в Америке. Эозин является искусственным красителем.
Внимание! Растворы красителей и необходимая лабораторная посуда должны быть приготовлены для окраски заранее.
Перед окрашиванием парафиновых срезов необходима обработка с целью удаления парафина и пропитывания их той жидкостью, в которой растворена краска. Для удаления парафина применяют обычно ксилол несколько порций (2-3), а при отсутствии его можно использовать толуол или бензол. Чаще применяют водные растворы красителей, поэтому в этом случае и срез должен быть пропитан водой. Необходимо помнить, что ксилол в воде не растворяется и поэтому сразу переносить срезы из ксилола в воду нельзя. Предварительно освободиться от ксилола возможно, обрабатывая срезы в спиртах. Сначала проводят через абсолютный спирт, а затем в 96 и 70 градусных спиртах. Лишь после этого предметное стекло переносят в стаканчик с дистиллированной водой. Для подготовки срезов для окраски необходимо иметь 8 биологических стаканчиков, 3 – для ксилола, 1 – для абсолютного спирта, 1 – для 96% спирта, 1 - для 70% спирта и 1 стаканчик для дистиллированной воды.
|
|
|
Схема депарафинирования срезов:
| Реактивы | Время (в минутах) |
| Ксилол – 3 порции | 4-5 |
| Абсолютный спирт | 2-3 |
| Спирт 96% | 2-3 |
| Спирт 70% | 2-3 |
| Дистиллированная вода | 1-2 |
Переносить парафиновые срезы на предметном стекле из одного ста-канчика в другой надо осторожно, поддерживая ее, чтоб дать жидкости стечь с поверхности. Ускорить эту процедуру можно, прикладывая к реб-ру стекла фильтровальную бумагу под углом. Надо помнить, что срезы быстро подсыхают и поэтому все процедуры надо проводить осторожно и быстро.
Пропись окрашивания парафиновых срезов по методике гематоксилином и эозином
1. Депарафинизация срезов – проводится в ксилол-спирте, иногда применяется йодистый спирт или гипосульфит натрия (см. выше);
2. Дистиллированная вода;
3. Окрашивание ядер гематоксилином – в течение 2-5 минут;
4. Промывка в дистиллированной воде;
|
|
|
5. Промывка в водопроводной воде;
6. Контроль под микроскопом (при необходимости докрасить);
7. Дифференцировка 1% солянокислым спиртом в течении 1-2 секунды, затем срезы быстро переносят в водопроводную воду;
8. Промывка в дистиллированной воде при частой смене. Контроль под микроскопом, если ядерная структура выявляется не четко, то необходимо повторить дифференцировку;
9. Промывка в дистиллированной воде;
10. Окрашивание в 1% растворе эозина в течение 1-2 минут;
11. Промывка в дистиллированной воде с её дифференцировкой под контролем микроскопа (опытные лаборанты могут на глаз);
12. 96% спирт в течение 1-2 минут;
13. Абсолютный спирт (дважды) - по 2 минуты
или карбол-ксилол в течение 1-2 минут;
14. ксилол (дважды) - по 2 минуты;
15. Заключение микропрепарата канадским бальзамом;
16. Покрытие покровным стеклом (осторожно с угла края стекла опускают над срезом, чтоб не было пузырьков воздуха).
Необходимо знать: Для выяснения времени окраски гематоксилином или эозином надо предварительно определить на пробных срезах данного блока.
1) Если гематоксилин окрашивает срезы очень быстро даже при кратковременной обработке ядра, применяют метод с последующим её ослаблением до нормальной окраски. С этой целью препарат заведомо перекрашивают и из воды срезы переносят на несколько секунд в слабый раствор соляной кислоты в 70% спирте (5-6 капель крепкой соляной кислоты на 100мл спирта). При этом усиливается красный оттенок. В большинстве случаев достаточно опустить срез на 1-2 секунды в солянокислый спирт, чтобы получить желаемый тон. Далее по прописи. Данная пропись наиболее распространена при окраске гематоксилином Эрлиха.
|
|
|
2) Если эозин плохо окрашивает срезы, его можно подкислить уксусной кислотой (1 капля 3% уксусной кислоты на 100 мл раствора эозина). Следует иметь в виду, что в спиртах окраска срезов эозином несколько ослабляется, поэтому проводить срезы до карбол-ксилола следует быстро.
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 6339; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!