Методы выявления соединительной и мышечной ткани
Окрашивание по методу ван-Гизон. Данный способ является наиболее популярным методом окраски соединительной и мышечной ткани. При этом коллагеновые волокна окрашиваются в ярко-красный цвет, благодаря чему они резко выделяются среди элементов других тканей. В тоже время элементы мышечные ткани (пучки) и нейроглии, окрашиваются в желтый цвет. Метод применим при различных фиксациях материала, и широко используется для обзорного описания препаратов.
Приготовление растворов: Для окраски необходимо приготовить смесь растворов пикриновой кислоты и кислого фуксина. Эта смесь готовится различными способами, из которых можно рекомендовать следующие способы.
Первый способ: 150мл насыщенного раствора пикриновой кислоты смешать с насыщенным водным раствором кислого фуксина, которго следует брать 3-5 мл.
Второй способ: 100 мл насыщенного при комнатной температуре водного раствора пикриновой кислоты сливают с 10 мл 1% раствора кислого фуксина.
Приготовленные смеси имеют красный насыщенный цвет. Обычно перед тем как окрасить срезы одной из указанных смесей, их подкрашивают гематоксилином для выявления ядер. Для этой цели рекомендуется окраска гематоксилином Вейгерта. Можно пользоваться и гематоксилином Эрлиха, только при этом окраску не следует дифференцировать солянокислым спиртом, так как этот процесс происходит одновременно с пребыванием срезов в пикрофуксине.
|
|
|
Гематоксилин Вейгерта готовится перед окраской смешением двух растворов:
Первый раствор: 1 г гематоксилина растворяют в 100 мл 96% или абсолютного спирта.
Второй раствор: 4 мл 29% раствора полуторахлористого железа (официальный раствор) сливают с 1 мл соляной кислоты и добавляют 95мл дистиллированной воды.
Внимание! Оба раствора хранят отдельно в банках с притертыми пробками. Перед употреблением сливают поровну небольшое количество обоих растворов (приблизительно по 10,0 мл каждого). При окраске по методу Ван Гизон следует помнить, что пикриновая кислота вызывает некоторое обесцвечивание гематоксилина. Окраска кислым фуксином легко дифференцируется промыванием среза в воде, а окраска пикриновой кислоты ослабляется ополаскиванием среза в 96% спирте. Необходимо, чтобы после дифференцировки окраска была не диффузной, а элективной, избирательной. При обработке по данному методу нервной ткани надо окрасить миелин кислым фуксином, для этого рекомендуется в красящей смеси увеличить количество фуксина по отношению к пикриновой кислоте.
Пропись методики окрашивания по ван-Гизон
1.Срезы, взятые из воды интенсивно, окрашивают гематоксилином Вейгерта в течение – 2-3 минут. (Срез должен быть перекрашен гематоксилином).
|
|
|
2. Срез ополаскивают в дистиллированной воде, не дифференцируя его солянокислым спиртом.
3. Погружают в смесь пикриновой кислоты и кислого фуксина на 3-5 минут;
4. Промывают в дистиллированной воде (не долго) - 1-2 минуты.
5. Быстро обезвоживают срезы в 96% спиртом (спирт извлекает пикриновую кислоту).
6. Просветляют в ксилоле.
7. Заключают в канадский бальзам.
Результаты: Ядра клеток окрашиваются либо в темно-коричневый цвет, либо фиолетово-черный(в зависимости каким гематоксилином окрашивались срезы). Коллагеновые волокна окрашиваются в красный цвет. Мышцы, цитоплазма различных клеток, кровяные тельца – окрашиваются в желтый цвет.
Окрашивание азаном по методу Гейденгайна
Окрашивание азаном по методу Гейденгайна – является модификацией метода Маллори, что позволяет получать более четкоеокрашивание соединительной ткани, чем основной метод. Данную методику хорошо использовать при окраске железистой и других тканей. Окраска срезов лучше удается после сулемовых фиксаторов (жидкость Ценкера и её модификация по Максимову), можно и после простой формалиновой фиксации материала.
Приготовление растворов:
|
|
|
1. Раствор азокармина – к 100млдистиллированной воды добавляют 0,1 г азокармина. Затем в течение нескольких минут кипятят и после охлаждения профильтровывают. К фильтрату добавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты.
2. Раствор анилинового синего и оранжевого G - к 100мл дистиллированной воды добавляют 0,5 г анилинового синего, 2,0 г оранжевогоG. Смесь кипятят в течение 2-3 минут, охлаждают и профильтровывают. Перед употреблением раствор разводят в 2-3 раза дистиллированной водой.
3. Раствор анилинового спирта – в 100 мл 90% спирта растворяют 0,1 мл анилинового масла (практически удобнее 1,0 мл анилинового масла растворить в 1 л спирта).
4. Уксуснокислый спирт – к 100 мл 96% спирта добавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты.
5. Раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты – 5 мг химически чистого препарата растворяют в 100 мл дистиллированной воды.
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 1498; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!