ДЕКАЛЬЦИНАЦИЯ И СМЯГЧЕНИЕ ПЛОТНОГО МАТЕРИАЛА
Декальцинация костной ткани и обызвествленного материала.. Материалы, подлежащие исследованию и содержащие кость или обызвествленные частицы, после фиксации декальцинируют. При исследовании таких костных пластинок или невыраженного обызвествления, а также, если предполагается в материале наличие зерен извести, достаточно применять фиксаторы, содержащие трихлоруксусную, или ледяную уксусную, сульфосалициловую и пикриновую кислоты. Очень хорошо подходят, например, смеси «суза» или Саномия.
Плотные кости и сильно обызвествленный материал, после фиксации формалином, промывают, проводят через спиртовый ряд, в котором концентрация спирта сначала постепенно возрастает до 96%, затем понижается в обратном порядке, и, наконец, снова кладут в воду. После этого материал декальцинируют часто сменяемой 5-% трихлоруксусной или 7,5-% азотной кислотой до его смягчения.
Необходимо знать, что соляная и серная кислоты для декальцинирования непригодны.
Длительная декальцинация ухудшает окрашиваемость ядер клеток. После декальцинации рекомендуется удалить кислоту проточной водой, но предварительно, для избежания набухания соединительной ткани, переносят материал на 24 часа в 5-% раствор сульфата натрия или лития. В противном случае для промывания надо пользоваться часто сменяемым 96% спиртом. Для декальцинации зубов применяется 7-5% азотная кислота или смесь из равного количества 70% спирта и муравьиной кислоты.
|
|
|
В последнее время, особенно при гистохимических исследованиях, рекомендуют бескислотную декальцинацию при помощи солей этилен-диамин-тетраацетата динатрия или тетранатрия. Эти соли имеются в продаже под названием «Версен» (Versen) и давно уже применяются в биохимии. В Венгрии их изготовляет фармацевтический завод «Киноин» (Chinoin) под названием «Комплексон III». Преимущества раствора «Комплексон III» заключается в его щелочности, быстром действии, а также в том, что из него не выделяется углекислый газ, так как образуется легко растворимый отрицательно заряженный комплекс кальция.
Фиксированные ткани обрабатываются 24-27% раствором «Комплексон III» или «Версен» с рН 7,4 при температуре 37-40C. Для растворения одного грамма кальция требуется 100,0 мл вышеуказанного раствора, но целесообразнее брать 100 мл раствора на каждый 1,0 грамм исследуемого материала. Декальцинация проверяется рентгеном, но в практике ее считают достигнутой при смягчении материала.
После декальцинации следует промывка материала в водопроводной воде и заливка по указанию доктора Блума (Bloom).
Смягчение хитина и рога. При обработке хитина или толстых роговых образований, необходимо их смягчать диафанолом (диафанол- двуокисьхлорная уксусная кислота). После фиксации и промывки материал проводят через спиртовый ряд до 96% спирта, затем кладут в 93% спирт, а из него в диафанол до наступления полного смягчения. Диафанол следует держать на дневном свету в стеклянной бутылке, закрытой стеклянной же пробкой. При обесцвечивании его необходимо приготовить новый раствор. После полного смягчения материал нужно тщательно промыть 96% спиртом.
|
|
|
Смягчение материала, засохшего в фиксаторе. Материал, засохший в фиксаторе или другой жидкости – особенно в формалине – легко размягчается в смеси из 20,0 мл антиформина и 80,0 мл воды, в которой его следует держать до набухания, затем промыть проточной водой.
УПЛОТНЕНИЕ И ОБЕЗВОЖИВАНИЕ МАТЕРИАЛА
Большинство фиксаторов в процессе фиксации более-менее уплотняют материал, однако очень часто плотность, необходимая для изготовления срезов, достигается лишь добавочным уплотнением. В отношении степени уплотнения правил не существует, для определения ее нужна соответствующая практика и, если можно сказать, чутье. Излишне уплотненный материал трудно резать, поэтому уплотнение следует проводить осторожно. Причина переуплотнения материала заключается чаще всего в чрезмерно длительной фиксации. Материал нельзя фиксировать дольше указанного времени, но если это уже случилось, то необходимо сократить время последующего уплотнения.
|
|
|
Для уплотнения применяется спирт, так как он одновременно и обезвоживает материал.
После вымывания фиксатора проточной водой, при промывке спиртом концентрацию его следует увеличивать постепенно, чтобы избежать сморщивания и деформации исследуемого материала. Отказаться от применения спиртового ряда все возрастающей концентрации можно только тогда, когда материал промывают спиртом. В этом случае без опасения можно начать с концентрации в 80 %. В восходящий по концентрации спиртовой ряд входят 50-70-90-96-%, а также абсолютный спирт. Следует отметить, что спирт низкой концентрации мацерирует ткань, высокой концентрации - уплотняет исследуемый материал. Процесс можно прервать даже на несколько недели, но при этом материал следует поместить в безразличный, 70-80-% спирт. Целесообразно при проводке материала 96-% и абсолютный спирт по нескольку раз менять.
Уплотнение и обезвоживание материала является необходимым условием в связи с последующей его заливки, так как при обыкновенной заливке в парафин или целоидин основным требованием должно быть стопроцентное обезвоживание исследуемого материала. Однако при обезвоживании материала возможны двоякого рода ошибки: возможно полное обезвоживание с переуплотнением материала или нужное уплотнение, но недостаточное обезвоживание. Для установления оптимального состояния, несомненно, требуется практика и знание особенности структуры тканей различных органов, в частности, паренхиматозные органы более богаты белками, а ткань головного мозга или железистые органы более нежные, богаты водой.
|
|
|
После промывания кусочки подвергают дальнейшему уплотнению путем обезвоживания в спиртах увеличивающейся концентрации. Для проведения данной процедуры необходимо подготовить биксы или стаканчики с притертыми крышками, на которых наклеивают соответствующие этикетки и заливают спиртом (50,60,70,80, и 96%, каждая по 2 стаканчика). Такой ряд в гистологии получил название гистологической батареи.
Для проведения обезвоживания хорошо фиксированного материала толщиной 5-6 мм проводку начинают, с менее концентрированной части восходящего спиртового ряда, в течение 2-4 часов, затем материал оставляют на 12 часов в 70-80-% спирте. После истечения этого времени материал через каждые 6 часов перемещают в более концентрированный спирт, при этом 96-% спирт необходимо через каждые 3 часа сменять.
Рекомендуется до помещения в 96-% спирт придать материалу, который к этому времени уже почти достаточно уплотнен, окончательную форму и величину, а также ориентировать его так, чтобы при заливке соответствующая поверхность была обращена вниз. Соблюдение этого простого правила упрощает работу и экономит время, так как уже залитый материал или срез ориентировать невозможно. При неправильном установлении плоскости срезывания важные детали могут не попасть в срез.
Так как абсолютный спирт очень дорог и неудобен в обращении, в больших лабораториях для завершения процесса обезвоживания применяют безводный ацетон. Его следует сменять через каждые 6 часов, всего 3 раза. Необходимо помнить, что при длительном нахождении в ацетоне материал чрезмерно уплотняется.
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 1443; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!