Работа 2. Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ)
Кровь при движении представляет собой устойчивую суспензию. Если же стабилизированную цитратом натрия кровь отстаивать в течение часа, то она разделяется на верхний светлый слой плазмы и нижний красный слой эритроцитов. Высота столбика плазмы (в мм/ч) определяет величину СОЭ. Наиболее распространенным способом определения СОЭ является способ Панченкова. Сам прибор Панченкова представляет собой штатив, в котором помещаются одна или несколько капилляров с внутренним диаметром в 1мм. Капилляры градуированы в мм от 0 (верхняя метка) до 100. Кроме того, на уровне метки 0 имеется вторая - К (кровь), а на уровне 50 мм - Р (реактив).
Ход работы. Капилляр промывает 5% раствором цитрата натрия для предупреждения свертывания крови. Затем набирают в него цитрат натрия до метки Р и выдувают его на часовое стекло. Затем в тот же капилляр дважды набирают кровь до метки К, смешивают ее с цитратом натрия на часовом стекле. Полученную таким образом смесь цитрата натрия с кровью в соотношении 1:4 набирают в капилляр до 0 и ставят в штатив. Через час определяют высоту (в мм) образовавшегося верхнего столбика плазмы в капилляре. Его величина и является мерой СОЭ.
Рекомендации к оформлению работы. В результатах укажите полученный индивидуальный показатель и пределы его колебаний у юношей и девушек подгруппы. В анализе сравните их с нормальными показателями.
Работа 3. Химический гемолиз
|
|
|
Гемолиз - один из способов разрушения эритроцитов, сопровождающийся выходом гемоглобина в плазму крови или в другую окружающую жидкость. Химический гемолиз вызывается действием химических веществ.
Ход работы. Берут 3 пробирки, наливают в них по 5 мл изотонического раствора (0,85-0,9% раствор NaCl), добавляют по 0,3 мл взвеси эритроцитов и взбалтывают. Затем приливают по 0,5 мл в одну пробирку - 3н. раствор аммиака, в другую - эфира (или хлороформа), в третью - 1н. раствор соляной кислоты. Взбалтывают содержимое пробирок и ставят на 40-60 мин в штатив. По истечении времени оценивают изменение цвета и прозрачности жидкости в пробирках.
Рекомендации к оформлению работы. В результатах укажите, в каких растворах произошел гемолиз и в какой степени (полный или частичный). В анализе объясните причины гемолиза и укажите гемолиз в каком из этих растворов вы уже наблюдали и каково его практическое значение.
Работа 4. Определение группы крови по системе АВО перекрестным методом
Под группами крови по системе АВО подразумевают различные сочетания антигенных свойств эритроцитов, называемых агглютиногенами, и антител (IgM) к ним, называемых агглютининами. Определение групп крови проводится как у доноров, так и у реципиентов; лишь у реципиентов, которым переливание проводится по жизненным показаниям, возможно определение лишь агглютиногенов системы АВО.
|
|
|
1. Определение эритроцитарных антигенов А и В с помощью стандартных сывороток или моноклональных реагентов - цоликлонов (это асцитная жидкость мышей, в которой содержатся антитела против группоспецифических антигенов А и В человека)
Ход работы. На планшетку наносят по большой капле (0,1 мл) каждого реагента (цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ) или сывороток 0(I), A(II), B(III) групп двух серий.
- Наносят по одной маленькой капле (0,03 мл) исследуемой эритросодержащей жидкости рядом с каждой каплей реагента или сыворотки.
- Смешивают чистыми стеклянными палочками каждый из реагентов с исследуемой жидкостью.
- Легко покачивают планшетку и наблюдают за реакцией агглютинации. Результаты учитывают через 3 мин после смешивания. Если наступила агглютинация, то добавляют по одной капле (0,05 мл) 0,9% раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при покачивании планшетки до истечения 5 мин.
Рекомендации к оформлению работы. Результаты вносят в следующую таблицу, где (+) означает агглютинацию, а (-) ее отсутствие.
|
|
|
| Результат реакции с сыворотками и цоликлонами | Исследуемые эритроциты принадлежат к группе | ||
| Сыв. III (B) Ц. анти-А | Сыв. II (А) Ц. анти-В | Сыв. I (О) Ц. анти-АВ | |
| - | - | - | 0(I) |
| + | - | + | А(II) |
| - | + | + | В(III) |
| + | + | + | АВ(IV) |
В анализе объясните полученные результаты.
2. Определение изогемагглютининов анти-А и анти-В в сыворотке крови с помощью стандартных эритроцитов
Используют эритроциты доноров групп А и В. Эритроциты хранятся в холодильнике не более недели, применение лизированных эритроцитов недопустимо.
Ход работы.
1. Приготавливают 5% взвесь однократно отмытых в 0,9% р-ре NaCl стандартных эритроцитов.
2. В 2 маркированные пробирки помещают по 2 капли исследуемой сыворотки или плазмы.
3. Добавляют в одну пробирку 5% взвесь эритроцитов группы А, а в другую - группы В.
4. После тщательно мягко перемешивают, затем инкубируют их при комнатной температуре в течение 5 минут.
5. Центрифугируют пробирки при 2000 об/мин в течение 30 секунд.
6. Мягко покачивая пробирки, отделяют осадок от дна пробирки и взбалтывают осадок эритроцитов.
7. Определяют наличие агглютинатов, просматривая пробирку на свет.
Рекомендации к оформлению работы. Результаты вносят в таблицу, где (+) означает агглютинацию, (-) - её отсутствие.
|
|
|
| Результат реакции | Исследуемая кровь группы | Исследуемая кровь содержит изоагглютинины | |
| А | В | ||
| + | + | 0(I) | Анти-А и анти-В |
| - | + | А(II) | Анти-В |
| + | - | В(III) | Анти-А |
| - | - | АВ(IV) | Не содержит |
Анализ производится путём оценки и сопоставления результатов, полученных при помощи стандартных сывороток и цоликлонов и при помощи стандартных эритроцитов.
Дата добавления: 2018-10-26; просмотров: 175; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!