Окраска включения волютина (по Нейссеру).
1) Окрасить мазок уксуснокислой синькой Нейссера (2-3 минуты);
2) Промыть;
3) Окрасить раствором Люголя (30 секунд);
4) Слить раствор Люголя и окрасить везувином (1 минута)
5) Промыть препарат и высушить
Цитоплазма клетки, имеющая кислую реакцию, принимает желтый цвет. Зерна волютина – темно-синие, почти черные.
Окраска по Бурри (обнаружение капсул). Для обнаружения капсул используют негативную окраску, т.к. окрашивается пространство между бактериями. Таким образом, образуется темное поле с неокрашенными бактериями.
1) Смешать на предметном стелке немного капсульной культуры и каплю разведенной (1:9) туши;
2) Высушить на воздухе и бактериоскопировать.
Модификация по Бурри-Гинсу включает создание фона краской конгорот, последующую фиксацию в 5% растворе соляной кислоты, дополнительную окраску водным фуксином. В результате – общий фон темный, капсулы бесцветны, сами бактерии – красные.
Окраска по Романовскому-Гимзе. Относится к сложным методам окраски и применяется чаще всего для мазков-отпечатков из органов или мазков крови после фиксации в жидком фиксаторе. Позволяет выявить ядерные элементы бактериальных клеток и зерна волютина. Для окраски берут каплю готовой краски на 1мл воды, которая должна быть подщелочена до рН – 7,2.
1) Поместить препарат (мазком вниз) в чашку Петри, подложив под края стекла спички или кусочки предметных стекол;
2) Подлить краску сбоку так, чтобы она без пузырей подтекла под мазок (красить 1-24ч);
|
|
|
3) Промыть водой (рН – 7,2) и высушить;
Протоплазма молодых клеток окрашивается в сине-фиолетовый цвет, ядерные элементы – в краснофиолетовый.
4. Правила проведения посева на жидкие и плотные питательные среды для получения чистых культур аэробных бактерий. Методы выделения чистых культур бактерий.
1. Посев петлей. Посевной материал втирают петлей в поверхность среды у края чашки. Избыток снимают, поколов петлей агар, а оставшийся материал рассеивают параллельными штрихами по всей поверхности агара.
2. Посев шпателем. Материал наносят петлей или пипеткой, а затем стеклянным или металлическим шпателем тщательно втирают его по всей поверхности среды.
3. Посев тампоном. Тампон и исследуемым материалом вносят в чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в поверхность среды, одновременно вращая тампон и чашку.
4. Посев на секторы. Дно чашки делят на секторы. Посев производят зигзагообразными движениями от края чашки к центру так, что бы штрихи с одного не переходили на другой.
5. Посев газоном. 1мл исследуемого материала (жидкая бульонная культура или взвесь микробов в физиологическом растворе) наносят пипеткой на поверхность среды и тщательно распределяют по всей поверхности. Избыток материала отсасывают пипеткой.
|
|
|
После посева чашки закрывают и кладут вверх дном. Надписи на чашках делают со стороны дна, на пробирках – в верхней части.
При посеве на жидкую среду петлю слегка погружают в жидкость и растирают посевной материал по стенке пробирки. После чего смывают его средой.
Правила проведения посева на питательные среды для получения чистых культур анаэробных бактерий. Методы создания анаэробных условий.
Анаэробные бактерии можно культивировать только на специальных бескислородных питательных средах с низким окислительно-восстановительным потенциалом. Для контролем за насыщением этих сред кислородом используют специальные радокс-индикаторы.
Для сохренения низкого ОВП среды должны быть агаризованы. Для культивирования оглигатно-анаэробных бактерий среды должны быть свежеприготовленными (не позднее 2 часов). Для успешного выращивания требуется внесение большого количества посевного материала. Это связано с тем, что в больших количествах анаэроб способны быстрее понижать ОВП среды.
Среды должны очень богаты питательными субстратами и витаминами, факторами роста, т.к. анаэробный типа дыхания менее продуктивный, чем аэробный.
|
|
|
Методы создания анаэробных условий
1.Физичесикие методы. Для удаления растворенного в питательных средах кислорода используют их регенерацию путем кипячения в течение 15-20 минут на водяной бане с последующим быстрым охлаждением до 50 градусов. После посева поверхность среды заливают парафином или вазелиновым маслом. Так же, возможен посев в столбик плотной или полужидкой среды на глубину 10-12см. кислород с воздуха диффундирует на 1,5-2см, а в глубине создаются благоприятные условия.
Применение анаэростатов и анаэробных боксов.
2.Химические методы. Для поглощения кислорода из замкнутого простанства можно использовать гидросульфит натрия. Для связывания кислорода в 1л объема используют 100мл свежеприготовленного 20% Na2S2O4 и 16мл 50% КОН.
Для связывания остатков кислорода используют вещества-редуценты, к которым относится тиогликоевая кислота или тиогликолат натрия, аскорбиновая кислота, различные сахара, цистин и цистеин, муравьинокислый натрий и т.д.
3.Биологические методы. Совместнео выращиевание анаэробов и аэробов (метод Фортнера). При нем на одну половину чашку засевают исследуемы материал, а на другую – культуру аэробного или факультативно-анаэробного микроба, способного энергично поглощать кислород.
Помещение в среду кусочков печени, почек, мозга. При это тканевые клетки активно поглощают и адсорбируют кислород, а в среде создаются анаэробные условия.
Дата добавления: 2018-09-20; просмотров: 680; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!