Методика взятия крови для исследования
Кровь для биохимического исследования берут обычно утром натощак из медиальной или латеральной подкожной вены руки. Пункция вены производится без шприца, только иглой. Венепункцию проводят в положении пациента лежа или сидя. Для максимального разгибания руки в локтевом суставе под локоть подкладывают клеенчатую подушечку. На среднюю треть плеча (обязательно на рубашку или салфетку) накладывают резиновый жгут и завязывают его так, чтобы его свободные концы были направлены вверх, а петля вниз. После этого кожу в области локтевого сгиба последовательно обрабатывают двумя ватными шариками, смоченными в спирте. При этом движения должны быть направлены от периферии к центру, что несколько увеличивает наполнение вены. Одновременно просят пациента сжать и разжать кулак. Перед тем как пунктировать вену, левой рукой следует натянуть кожу локтевого сгиба, несколько смещая ее к периферии, чтобы фиксировать вену; кулак больного при этом сжат. Под канюлю иглы подкладывают стерильную салфетку, чтобы не запачкать руку пациента кровью. Держа иглу за канюлю срезом вверх и почти параллельно коже, прокалывают кожу и осторожно вводят иглу рядом с веной примерно на 1/3 ее длины. После этого слегка изменяют направление иглы и пунктируют вену: при этом появляется своеобразное ощущение «попадания в пустоту». В просвете канюли появится капля крови. К канюле подставляют стеклянную или пластиковую пробирку вместимостью 5–10 мл и набирают в нее нужное количество крови. Только после этого снимают жгут, и пациент разжимает кулак. Иглу извлекают из вены, на место пункции прикладывают ватный шарик, смоченный спиртом, и просят больного согнуть руку в локтевом суставе. В последние годы кровь для биохимического исследования берут из вены с помощью так называемых вакуумных пробирок, в которых в заводских условиях создают давление ниже атмосферного. Пробирка плотно закрыта пластиковой пробкой, в которой имеется резиновая мембрана. При необходимости в пробирку добавляют раствор ЭДТА. Для заполнения пробирки кровью используют специальные двойные стерильные иглы (рис. 7, а). Один конец иглы предназначен для пункции вены, а другой, на который плотно надет резиновый колпачок, — для прокола мембраны вакуумной пробирки. Канюля, расположенная между двумя концами иглы, снабжена резьбой, с помощью которой игла навинчивается на специальный переходник. После пункции вены в переходник вставляют вакуумную пробирку и легким плавным движением прокалывают вторым концом иглы резиновый колпачок и мембрану в пробке вакуумной пробирки. При этом под действием градиента давления нужное количество крови быстро заполняет пробирку. Такой же способ используют для взятия крови для общего клинического анализа на автоанализаторах. В зависимости от конкретных целей биохимического анализа используют плазму крови или ее сыворотку. Сыворотка крови — это плазма, свободная от фибриногена и получаемая после естественного свертывания крови. Для приготовления сыворотки венозную кровь набирают в несиликонированную стеклянную пробирку без антикоагулянтов и помещают ее на 4 часа в водяную баню при 37°С или оставляют при комнатной температуре на 24 часа. После этого отсасывают супернатант, центрифугируют его в течение 5–10 мин и собирают надосадочную жидкость. Для получения плазмы венозную кровь для исследования набирают в пробирку, в которую предварительно добавлен антикоагулянт (натрия или лития гепаринат, ЭДТА или натрия цитрат). Сразу после взятия крови ее осторожно перемешивают, ставят в ледяную баню, а затем центрифугируют при 3000–4000 об/мин в течение 15–20 мин и собирают надосадачную жидкость. Для биохимического исследования плазмы и сыворотки крови используют различные методы, подробно описываемые в специальных руководствах по лабораторной диагностике. К числу таких методов относятся фотометрия, нефелометрия, электрофорез, рефрактометрия, многочисленные иммунологические и другие методы. Современные автоматизированные биохимические анализаторы и стандартные наборы химических реактивов дают возможность одновременно производить соответствующие исследования большого количества образцов крови, полученных от разных пациентов, что существенно сокращает время исследования и уменьшает его трудоемкость. Стандартный биохимический анализ крови включает определение различных параметров, отражающих состояние белкового, углеводного, липидного и минерального обмена, а также активность некоторых ключевых ферментов сыворотки крови.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА В КРОВИ
Белки — это высокомолекулярные азотсодержащие органические соединения, в состав которых входят более 20 видов аминокислот. Концентрация белков в плазме здорового человека колеблется от 65 до 85 г/л. Основная часть общего белка плазмы крови (около 90%) приходится на альбумины, глобулины и фибриноген.
Альбумины — это наиболее гомогенная фракция простых белков, почти исключительно синтезирующихся в печени. Около 40% альбуминов находится в плазме, а 60% — в межклеточной жидкости. Основные функции альбуминов — поддержание коллоидно-осмотического (онкотического) давления, а также участие в транспорте многих эндогенных и экзогенных веществ (свободных жирных кислот, билирубина, стероидных гормонов, ионов магния, кальция, антибиотиков, сердечных гликозидов, барбитуратов, ацетилсалициловой кислоты и др.).
|
|
|
Глобулины сыворотки крови представлены четырьмя фракциями (α1, α2, β и γ), каждая из которых не является однородной и содержит несколько белков, отличающихся по своим функциям.
В состав α1-глобулинов в норме входят два белка, имеющих наибольшее клинической значение:
1. α1-антитрипсин, являющийся ингибитором ряда протеаз (трипсина, химотрипсина, калликреина, плазмина);
2. α1-гликопротеид, участвующий в транспорте прогестерона и тестостерона и связывающий небольшие количества этих гормонов.
α2-глобулиныпредставлены следующими белками:
1. α2-макроглобулин — ингибитор ряда протеолитических ферментов (трипсина, химотрипсина, тромбина, плазмина, калликреина), синтезируется вне печени;
2. гаптоглобин — белок, связывающий и транспортирующий свободный гемоглобин А в клетки ретикулоэдотелиальной системы;
3. церулоплазмин — обладает оксидазной активностью и окисляет двухвалентное железо в трехвалентное, что обеспечивает его транспорт трансферрином;
4. апопротеиды А, В и С, входящие в состав липопротеидов.
Фракция β-глобулинов также содержит несколько белков:
1. трансферрин — белок, участвующий в транспорте трехвалентного железа;
2. гемопексин — переносчик свободного гема и порфирина, связывает геминсодержащие хромопротеиды (гемоглобин, миоглобин, каталазу) и доставляет их в клетки РЭС печени;
3. липопротеиды;
4. часть иммуноглобулинов;
5. некоторые белковые компоненты комплемента.
γ-глобулины — это иммуноглобулины, которым свойственна функция антител, вырабатываемых в организме в ответ на внедрение различных веществ, обладающих антигенной активностью; современные методы позволяют выделить несколько классов иммуноглобулинов (IgG, IgA, IgM, IgD и IgE).
Фибриноген является важнейшим компонентом системы свертывания крови (фактор I). Он образует основу кровяного сгустка в виде трехмерной сети, в которой задерживаются клетки крови.
Методы исследования
Стандартный набор биохимических показателей, отражающий состояние белкового обмена, чаще ограничивается определением содержания общего белка, белковых фракций (альбумина, α1-, α2-, β- и γ-глобулинов) и фибриногена. При необходимости определяют также С-реактивный белок (CRP), содержание серомукоида и других белков сыворотки крови.
Общий белок. Наиболее распространенным методом определения общего белка сыворотки крови является так называемый биуретовый метод. В состав биуретового реактива входит сульфат меди, который в щелочной среде реагирует с белками сыворотки и образует соединения, окрашенные в фиолетовый цвет. Интенсивность окраски, зависящую от концентрации белка в сыворотке, определяют на фотометре и сопоставляют с интенсивностью калибровочного раствора с известной концентрацией альбумина (фотометрический метод).
Существует также рефрактометрический способ определения общего белка, основанный на принципе измерения показателей преломления света, проходящего через окрашенные соединения.
Альбумин. Количество альбумина в сыворотке крови определяют фотометрическим методом с использованием красителя бромкрезолового зеленого, который при взаимодействии с альбумином в слабокислой среде образует окрашенный комплекс синего цвета.
Белковые фракции. В клинической практике для определения различных фракций белка ( в том числе альбуминов, α1-, α2-, β- и γ-глобулинов) чаще используют метод электрофореза. При электрофоретическом разделении белков сыворотки крови на отдельные фракции через исследуемую сыворотку, нанесенную на поддерживающую среду (бумагу, пленки ацетатцеллюлозы, полиакриламидный гель и др.) пропускают электрический ток (рис. 8). Скорость движения отдельных белковых фракций по направлению к аноду (+) зависит от их электрического заряда и других физико-химических свойств. Наиболее быстро движется к аноду фракция альбумина, затем α1-, α2, β- и γ-глобулинов.
После окончания электрофоретического разделения белковых фракций пленки из ацетата или полоски бумаги высушивают на воздухе и в сушильном шкафу и окрашивают одним из красителей (бромфеноловым синим, пунцовым С). Таким образом, получают кусочки бумажной ленты или пленки из ацетата целлюлозы, содержащие отдельные белковые фракции — электрофореграммы. Интенсивность окраски, соответствующую концентрации отдельных белковых фракций, измеряют на фотометре или денситометре. Результаты выражают в процентах к содержанию общего белка сыворотки крови. Для наглядности строят графики количественного соотношения белковых фракций. Для разделения белков сыворотки крови используют также другие, более тонкие методы исследования (ультрацентрифугирование, иммуноэлектрофорез и т. д.), позволяющие выявлять отдельные белки сыворотки, входящие в состав той или иной белковой фракции, а также определять их физико-химические свойства.
Интерпретация результатов
Содержание общего белка сыворотки крови у здорового человека колеблется в пределах от 65 до 85 г/л, а альбумина — от 35 до 50 г/л. Из таблицы видно, что у здорового человека наблюдаются колебания этих величин в достаточно широких пределах, что отчасти обусловлено методом определения белковых фракций, в частности, видом красителя, используемого для окрашивания бумаги или пленок из ацетата целлюлозы с электрофореграммами. Имеет значение также расчет альбуминово-глобулинового коэффициента (А/Г), который в норме равен примерно 1,5. Любые причины, приводящие к белковой недостаточности (например, белковое голодание), закономерно вызывают усиление катаболизма собственных белков при их распаде, что сказывается на функции всех органов и систем. Наиболее важными клиническими следствиями гипопротеинемии любого происхождения являются: 1) похудание, вплоть до кахексии, 2) анемия, 3) гипопротеинемические отеки (при снижении альбумина ниже 20 г/л), 4) нарушение функции различных органов и систем.
Дата добавления: 2018-08-06; просмотров: 278; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!