Опыт 3. Влияние рН на активность амилазы слюны
Известно, что ферменты проявляют свою максимальную активность при определенных значениях рН (оптимум рН), и очень чувствительны к изменению кислотности среды, в которой они действуют. Изменение кислотности среды в ту или иную сторону от оптимума рН вызывает понижение активности фермента, что объясняется действием ионов водорода на ионизацию белковой молекулы, а, следовательно, на пространственную структуру фермента.
Готовят серию буферных растворов с рН 4,49; 5,59; 6,98; 7,38; 8,04, используя растворы гидрофосфата и дигидрофосфата калия и бюретки.
Приготовление фосфатных буферных смесей
Таблица 2
| Номер пробирки | К2НРО4, мл | КН2РО4, мл | рН |
| 1 2 3 4 5 | 0,00 0,50 6,00 8,00 9,50 | 10,00 9,50 4,00 2,00 0,50 | 4,49 5,59 6,98 7,38 8,04 |
Определение рН буферных смесей проводят с помощью рН-метра. Для приблизительной оценки рН растворов можно воспользоваться индикаторной бумагой или прибором Алямовского. Необходимо сразу приготовить большое количество буферных растворов с таким расчетом, чтобы каждому выполняющему опыт досталось по 5 мл каждой буферной смеси.
В пять пробирок наливают по 5 мл каждой из приготовленных буферных смесей, добавляют по 2 мл препарата фермента амилазы и по 5 мл раствора крахмала, тщательно перемешивают.
|
|
|
После этого все пробирки помещают в водяную баню при 40ºС. Наблюдения за ходом гидролиза начинают сразу, проводя йодную пробу на пластинках с растворами из пробирок. Отмечают, в какой пробирке гидролиз крахмала идет быстрее всего. На основании полученных результатов делают вывод об оптимальных условиях гидролиза крахмала по величине рН.
Оформление результатов опыта
Результаты проведения опыта рекомендуется представить в форме таблицы:
Таблица 3
| Номер пробирки | рН | Реакция с йодом по истечении времени, мин | ||||||
| 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | ||
| 1 2 3 4 5 | 4,49 5,59 6,98 7,38 8,04 | |||||||
Опыт 4. Влияние активаторов и ингибиторов на активность амилазы слюны.
На активность ферментов оказывают воздействие активаторы и ингибиторы. Активаторы – это вещества, которые усиливают действие ферментов, а ингибиторы, наоборот, подавляют действие ферментов. В данном опыте предлагается экспериментально определить, какое из двух веществ – хлорид натрия или медный купорос является активатором, а какое - ингибитором фермента амилазы.
|
|
|
В три пробирки наливают по 1 мл препарата фермента амилазы. В первую пробирку добавляют 0,5 мл 1% раствора хлорида натрия, во вторую – 0,5 мл 1% раствора медного купороса, в третью – 0,5 мл дистиллированной воды. Во все пробирки добавляют по 3 мл раствора крахмала, перемешивают и ставят пробирки на водяную баню. Контроль ведут по реакции с йодом на пластинках сразу после начала опыта через каждые 0,5 – 1 минуту. Полученные результаты и наблюдения записывают в тетрадь, делают соответствующие выводы.
Оформление результатов опыта
Результаты проведения опыта рекомендуется представить в форме таблицы:
Таблица 4
| № пробир- ки | Реактивы, мл | Реакция с йодом по истечении времени, мин
 Мы поможем в написании ваших работ! | ||||||||||