Определение концентрации белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом

Реактивы и оборудование:Сыворотка крови, спирт для промывки призмы; рефрактометр, пипетка.

1. Юстировка Перед началом определения белка необходимо убедиться, что прибор настроен (отюстирован). Для этого нужно открыть рабочую камеру, на призму нанести несколько капель дистиллированной воды и осторожно закрыть. Глядя в окуляр, с помощью измерительного винта установить шкалу на деление 1,333 (показатель преломления воды). При этом в рабочем поле должны совместиться граница светотени и точка пересечения диагональных линий. Если этого нет, то не изменяя показания шкалы, добиваются совмещения регулировочным ключом.

2. Ход определения. Для определения содержания белка в сыворотке крови нужно открыть рабочую камеру, насухо вытереть призму и нанести на нее 1-2 капли раствора исследуемого белка. Осторожно закрыть, чтобы не было пузырьков воздуха в окне и с помощью измерительного винта добиться совмещения границы светотени и точки пересечения диагональных линий.

По шкале отметить значение коэффициента преломления, согласно которому по таблице 1 найти процентное содержание белка. Сравнить полученный результат с нормативными показателями (табл. 1 приложений) и сделать вывод.

Таблица 1

Расчет содержания белка по показателю преломления

П о к а з а т е л ь п р е л о м л е н и я

с точностью до

тысячной

с точностью до десятитысячной

К о н ц е н т р а ц и я б е л к а , %

1,343

4,09

4,15

4,20

4,26

4,32

4,38'

4,44

4,50

4,55

4,61

1,344

4,67

4,73

4,79

4,64

4,90

4,96

5,02

5,08

5,13

5,19

1,345

5,25

5,31

5,37

6,43

5,48

5,54

5,60

5,66

5,72

'5,77

1,346

5,83

5,89

5,95

6,01

6,07

6,12

6,18

6,27

6,30

6,36

1,347

6,41

6,47

6,53

6,59

6,65

6,70

6,76

6,82

6,88

6,94

1.348

7,00

7,05

7,17

7,23

7,29

7,34

7,40

7,46

7,52

1,349

7,58

7,63

7,75

7,81

7,87

7,93

7,98

8,04

8,10

1,350

8,16

8,22

8,33

8,39

8,46

8,51

8,57

8,62

8,68 ,

1,351

8,74

8,80

8,91

8,97

9,03

9',09

9,15

9,20

9,26

1,352

9,32

9,38

9,50

9,55

9^61

9,67

9,73

9,79

9,84

1,353

9,90

9,96

10,08

10,13

10,19

10,25

10,31

10,37

10,43

1,354

10,4В

10,48

10,54

10,66

10,72

10,77

10,83

10,89

10,95

11,01

1,355

11,06

11,12

11,23

11,29

11,35

11,41

11,47

11,52

11,58

Лабораторная работа № 6

Определение концентрации белка колориметрическим

Методом по биуретовой реакции

Реактивы и оборудование:набор реактивов для определения общего белка фирмы Ольвекс, спектрофотометр (ФЭК), пробирки, пипетки.

Опыт 1. В трех пронумерованных пробирках подготовьте пробы следующего состава:

Состав пробы	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Биуретовый реактив, мл	5,0	5,0	5,0
Сыворотка крови, мл	0,1
Калибратор, мл		0,1
Вода дист., мл			0,1

Пробы тщательно перемешайте и инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 минут или в 15 минут при 37⁰С. Измерьте оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной пробы при λ=540 нм.

Расчет концетрации белка произвести по формуле:

где

Где, С – концентрация белка, г/л

Е_пробы – оптическая плотность опытной пробы;

Е_{калибратора} – оптическая плотность калибровочной пробы;

70 – концентрация белка в калибровочной пробе, г/л

Произвести расчет концентрации белка в сыворотке крови, сравнить с нормативными значениями (табл. в приложении) и сделать вывод.

Лабораторная работа № 7

Кислотный гидролиз нуклеопротеида

Лабораторная работа № 12

В колбу Кьельдаля внести 30мл раствора нуклеопротеида, полученного из дрожжей, и добавить 30мл 10% H₂SO₄. Колбу закрыть пробкой с обратным холодильником и осторожно кипятить в течение часа. После этого содержимое колбы охладить и профильтровать.

Небольшую часть полученного гидролизата (фильтрата) отлить в пробирку и использовать для определения фосфорной кислоты.

Оставшийсягидролизат нейтрализовать щелочью и использовать для обнаружения белков, пентоз, азотистых оснований.

1. Обнаружение фосфорной кислоты.

В пробирку внести 0,5-1 мл кислого гидролизата, добавить 0,5-1мл реактива на фосфор (ванадат-молибденовый реактив). Появление желтого окрашивания свидетельствует о наличии фосфорной кислоты.

2. Обнаружение пентоз.

В пробирку внести 0,5-1мл нейтрализованногогидролизата, добавить равный объемреактиваФелинга. Содержимое пробирки перемешать и нагреть до кипения верхний слой жидкости. Появление красно-желтого окрашивания свидетельствует о наличии пентоз.

3. Обнаружение пуриновых оснований.

В пробирку внести 0,5-1 мл нейтрализованного гидролизата и добавить равный объем аммиачного раствора серебра. Появление хлопьевидного осадка свидетельствует о наличии аденина и гуанина.

4. Обнаружение протеинов.

В пробирку 0,5-1мл нейтрализованногогидролизата, добавить равный объем 10% NaOH и 1-2капли 1% СuSO₄. Появление сине-фиолетового окрашивания свидетельствует о наличии белков.

Провести визуальные наблюдения и сделать вывод. Написать уравнение ступенчатого гидролиза нуклеопротеида, указать ферменты.

Лабораторная работа № 8

Дата добавления: 2018-05-13; просмотров: 1267; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 2 3 4 5 678 9 10 11 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!