Сульфаниловая кислота п-сульфобензолдиазоний
Диазобензолсульфоновая кислота)
Опыт 11.В одну пробирку вносят 1 мл раствора тирозина, в другую – 1 мл раствора белка. В каждую добавляют по 2 мл диазореактива. (готовится перед опытом, смешиванием в отдельной пробирке 1% раствора сульфаниловой кислоты в 5% растворе соляной кислоты и 5% раствора нитрита натрия в соотношении 1:3). После этого в каждую пробирку добавляют 10% раствор углекислого натрия до появления желтой или оранжевой окраски, которая постепенно становится все более интенсивной.
Оформление работы
Оформить работу следует в виде таблицы, в которой привести название реакции, название определяемого вещества, уравнение реакции, условия, при которых следует проводить реакцию, наблюдения и выводы.
Лабораторная работа № 2
Реакции осаждения белков
Реактивы и оборудование:раствор яичного белка, кристаллический сульфат аммония, насыщенный раствор сульфата аммония, 1% и 10% растворы уксусной кислоты, 10% раствор гидроксида натрия, концентрированные растворы соляной, серной и азотной кислот, 5% раствор трихлоруксусной кислоты, 20% раствор сульфосалициловой кислоты, 1% раствор медного купороса, 1% раствор ацетата свинца, насыщенный водный раствор фенола, раствор формалина, этиловый спирт, спиртовки пробирки, воронки, бумажные фильтры.
Высаливание белков сульфатом аммония
В водном растворе белков их частицы заряжены и гидратированы, что обусловливает устойчивость белковых растворов. Но при высокой концентрации солей, ионы которых тоже гидратируются, происходит разрушение водных оболочек белковых молекул, и снимается заряд с белковой молекулы адсорбирующимися на ней ионами солей. В результате этих двух процессов белковые растворы теряют устойчивость, частицы белка слипаются друг с другом, укрупняются и выпадают в осадок.
|
|
|
Опыт 1.В пробирку наливают 1 мл раствора белка, добавляют равный объем насыщенного раствора сульфата аммония, встряхивают. Выпадает осадок глобулинов. Раствор фильтруют. Одну часть фильтрата нагревают до кипения и наблюдают свертывание альбуминов, находящихся в растворе. К другой части фильтрата добавляют кристаллический сульфат аммония до насыщения. Появляется муть или хлопья выпадающих в осадок белков альбуминов. Если понизить концентрацию солей добавлением дистиллированной воды, то осадок альбуминов вновь растворится. Объясняется это тем, что осаждение белков определенными солями является обратимым процессом.
Из приведенного опыта следует, что для высаливания различных белков требуется разная концентрация одной и той же соли.
Свертывание белков при нагревании
|
|
|
Практически все белки при нагревании подвергаются денатурации. Но особенно быстро белки денатурируют вблизи их изоэлектрических точек (ИЭТ), то есть при том значении рН, когда суммарный заряд молекулы белка равен нулю. В этих условиях на молекулах белков имеется равное количество отрицательно и положительно заряженных групп. Благодаря этому белковые молекулы быстрее свертываются. ИЭТ яичных белков находится в слабо-кислой среде, поэтому добавление к раствору яичного белка небольшого
количества слабой уксусной кислоты ускоряет свертывание белка при нагревании. Добавление к раствору белка нейтральных солей в кислой среде облегчает и ускоряет свертывание белков при кипячении благодаря дегидратации белковых молекул.
В кислой среде диссоциация белка по карбоксильным группам подавляется, молекулы заряжаются положительно, а в щелочной среде подавляется ионизация по аминогруппам, белки заряжаются отрицательно. И в том и в другом случае молекулы отталкиваются друг от друга, и осадок не образуется даже при кипячении.
Кислая среда Нейтральная среда Щелочная среда
Опыт 2.Наливают в 5 пробирок по 2 мл раствора яичного белка. Раствор в первой пробирке нагревают. Осадок образуется до того, как раствор закипит. Произошла денатурация белка.
|
|
|
Опыт 3. Во вторую пробирку добавляют 1 каплю 1% раствора уксусной кислоты и нагревают. Осадок белка образуется быстрее, так как рН раствора близок его ИЭТ.
Опыт 4. В третью пробирку добавляют 1-2 капли 1% раствора уксусной кислоты и несколько капель насыщенного раствора хлорида натрия и нагревают. Осадок белка образуется быстро. В изоэлектрической точке и в присутствии соли денатурация происходит быстрее, чем в опыте 3.
Опыт 5. В четвертую пробирку добавляют 0,5 мл 10% раствора уксусной кислоты и нагревают. В кислой среде все белковые молекулы заряжаются положительно, и осадок белка не образуется даже при кипячении.
Опыт 6. В пятую пробирку добавляют 0,5 мл 10% раствора гидроксида натрия и нагревают. В щелочной среде все белковые молекулы заряжаются отрицательно, и осадок белка не образуется даже при кипячении.
Дата добавления: 2018-05-13; просмотров: 1093; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!