Количественное определение витаминов
Реактивы и оборудование:Сыворотка крови, этиловый спирт, петролейный эфир (или авиационный бензин) K2Cr2O7 (720 мг/л,. что соответствует по окраске 1мг% каротина), солянокислый буфер (рН= 5,2), реактив Тильманса, фильтры, пробирки, пипетки
Опыт 1. Количественное определение каротина в сыворотке крови
Приготовление исследуемого раствора.
В пробирку внести 1мл сыворотки крови, добавить 3мл 96% этилового спирта для осаждения белков. Содержимое пробирки перемешать. Затем прилить 6мл петролейного эфира для экстракции каротина. Энергично встряхивать 2 минуты. После этого добавить 2мл Н2Одист.для лучшего расслоения жидкостей.
Верхний эфирный слой перенести в кювету ФЭКа и колориметрировать с синим светофильтром (λ =440нм) в кювете толщиною слоя 1см против дист. воды.
Приготовление рабочего калибровочного раствора.
В пробирку внести 2,4мл основного калибровочного раствора K2Cr2O7и добавить 2,6мл Н2Одист..Содержимое пробирки перемешать и колориметрировать в том же режиме.
Расчет произвести по формуле:
Еоп
Х = ----- ´ 1
Екал
где, Х - содержание каротина в сыворотке, мг%; Еоп -экстинция образца сыворотки крови; Ека-экстинция калибровочного раствора, 1 - коэффициент перевода в мг%.
Полученные результаты сравнить с нормативными показателями и сделать соответствующий вывод.
Опыт 2. Спектрофотометрическое определение витамина С в напитках
Для исследования берут неокрашенные или слабоокрашенные напитки. После дегазации и, если необходимо, фильтрования исследуемых напитков готовят три раствора, согласно таблицы:
|
|
|
| Реагент | Опытная проба | Калибровочная проба | Контрольнаяя проба |
| Солянокислый буфер (рН 5,2), мл | 4,5 | 4,5 | 5,0 |
| Напиток, мл | 0,5 | - | - |
| Раствор витамина С, мл | - | 0,5 | - |
| Реактив Тильманса, мл | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
Содержимое каждой пробирки перемешать и колориметрировать опытную и калибровочную против контрольной в кювете толщиною слоя 1см при длине волны 540нм.
Расчет произвести по формуле:
К * Еоп * 1000
Х = ------------------- ´ 0,05
ЕкалVпр
где, Х - содержание витамина С, мг/л; Еоп -экстинция опытной пробы; Ека-экстинция калибровочного раствора, Vпр – объем исследуемого напитка, 1000 - коэффициент перевода в мг/л, 0,05 – количество витамина С в 0,5 мл стандартного (калибровочного) раствора, мг.
Примечание: Опыт № 2 не делали.
Лабораторная работа № 10
Качественные пробы на присутствие ферментов
Реактивы и оборудование:3% раствор пероксида водорода, кристаллический гидрохинон, насыщенный раствор тирозина, 5% раствор мочевины, 1% раствор сахарозы, фенолфталеин, красная лакмусовая бумага, сырой картофель, морковь, капуста, мясо, соевая мука, дрожжи, реактив Фелинга, центрифуга, ступки, песок, марля, воронки, пипетки, водяная баня, лучинки, плитка,
|
|
|
Опыт 1.Обнаружение каталазы в мышечной кашице.
Перекись водорода может образовываться в организмах как конечный продукт дыхания, но поскольку в больших концентрациях перекись водорода является ядом для живых клеток, существуют ферменты, способные ее обезвреживать. К таким ферментам относится каталаза. Она расщепляет пероксид до воды и кислорода. Каталаза вызывает бурное выделение пузырьков кислорода при промывании ран пероксидом водорода. Содержится каталаза и в растительных объектах, например, в картофеле, моркови.
каталаза
2 Н2О2 → 2 Н2О + О2
В пробирку помещают 0,5 – 1 г мышечной кашицы, добавляют 2 мл дистиллированной воды и 1 мл 3% раствора пероксида водорода. Встряхивают пробирку и наблюдают выделение пузырьков газа. Используя тлеющую лучинку, можно доказать, что выделяющийся газ – кислород.
Опыт 2. Обнаружение пероксидазы в растительных тканях
Некоторые ферменты выделяющийся в ходе разложения пероксида водорода кислород используют для окисления органических соединений. К таким ферментам относят пероксидазу. С помощью пероксидазы, содержащейся в больших количествах в растительных клетках, происходит окисление дифенолов в хиноны, в результате чего темнеет лежащий на воздухе очищенный картофель и другие растительные продукты.
|
|
|
В две пробирки наливают по 3 мл 3% раствора пероксида водорода. В одну из них помещают 2-3 кусочка свеженарезанного картофеля. В обе пробирки добавляют одинаковое количество кристаллического гидрохинона. Содержимое пробирок встряхивают. Через некоторое время наблюдают образование розово-красной окраски в пробирке с картофелем вследствие окисления гидрохинона в хинон перекисью водорода под действиемпероксидазы. Много пероксидазы содержится в хрене, поэтому вместо картофеля можно использовать это растение.
Дата добавления: 2018-05-13; просмотров: 471; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!