Подготовка проб к исследованию (первичная обработка проб)

Прием и сортировку проб проводят в специально отве­денном для этого помещении или настольном боксе лабора­тории.

Сортировка проб состоит из:

- определения очередности исследования проб;

- определения возможности объединения (усреднения) проб;

- увлажнения (при необходимости) сухих материалов пробы небольшим количеством стерильного изотонического раствора хлорида натрия;

- отделения от пробы части материала, подлежащего (в случае необходимости) пересылке в лаборатории, прово­дящие индикацию в полном объеме.

В первую очередь исследованию подлежат:

- пробы воздуха;

- осколки и содержимое биологических боеприпасов;

- смывы из носоглотки людей, оказавшихся без защиты в зоне прохождения аэрозольного облака;

- материалы от внезапно заболевших людей.

Объединение этих проб не допускается. Остальные про­бы, если их раздельное исследование лаборатория обеспе­чить не может, могут быть объединены (но не более 3—5 об­разцов в одну пробу). В этих случаях объединению подле­жат только односменные пробы, взятые в одном очаге.

Каждую поступившую пробу регистрируют в специаль­ном журнале, куда вносят основные данные сопроводитель­ной записки и время доставки ее в лабораторию.

Первичная обработка пробы состоит из:

- приготовления мазков для МФА из нативных материа­лов пробы;

- перевода сухих и плотных материалов пробы в жид­кую фазу;

- концентрирования содержащихся в пробе возбудите­лей физическими (иммуносорбционными) методами.

В целях четкой организации и преемственности исследо­ваний все подлежащие анализу материалы (мазки, взвеси и т. п.) целесообразно маркировать, помимо номера пробы, римскими цифрами, обозначающими ту или иную стадию анализа:

- цифрой «I» обозначают мазки-отпечатки, приготовлен­ные из нативных материалов пробы для ее первичной обра­ботки;

- цифрой «II» обозначают мазки-отпечатки, приготов­ленные из нативной жидкой пробы или из взвеси, получен­ной после перевода пробы в жидкую фазу, а также сами на­тивные взвеси пробы;

- цифрой «III» обозначают мазки и взвеси, приготовлен­ные из материалов, пробы после ее концентрирования физи­ческими (или иммуносорбционными) способами;

- цифрой «IV» обозначают мазки и взвеси, приготовлен­ные из посевов на питательные среды, пластин с монослоем зараженной клеточной культуры и поддерживающую куль­туральную жидкость из пробирок с культурой клеток;

- цифрой «V» обозначают мазки-отпечатки и взвеси, приготовленные из органов лабораторных животных, исполь­зованных для биологического обогащения пробы,

Из нативных материалов пробы мазки готовят на трех предметных стеклах (по 8-10 мазков на каждое стекле). После фиксации в течение 15-20 мин в охлажденном аце­тоне два стекла с мазками используют для исследования, одно (резервное) хранят на холоде до конца анализа данной пробы.

Из жидких материалов пробы мазки готовят в виде ма­леньких капель, наносимых на стекло в центре каждого ква­драта бактериологической петлей, диаметром 2-3 мм.

Из плотных материалов пробы мазки готовят в виде пре­паратов-отпечатков на предметном стекле.

Из секционного материала и органов животных мазки го­товят в виде отпечатков на предметном стекле. Для этого от исследуемого органа отрезают кусочек и поверхностью среза слегка прикасаются к предметному стеклу. Если ткань орга­на чрезмерно пропитана кровью, избыток ее целесообразно удалить, вначале прикоснувшись срезом к листу фильтро­вальной бумаги.

Перевод пробы в жидкую фазу предусматривает суспен­зирование плотных (сухих) материалов в стерильном изото­ническом растворе хлорида натрия. Вначале готовят взвесь исследуемого материала в небольшом объеме изотонического раствора хлорида натрия - до 5 мл (получение так называе­мого первичного объема жидкой фазы). После того как из этой суспензии будут приготовлены мазки на предметных стеклах, ее объем доводят изотоническим раствором хлорида натрия до 22 мл (получение так называемого конечного объема жидкой фазы пробы).

При поступлении пробы в виде секционного материала или органов животных жидкую фазу получают путем гомо­генизации кусочков исследуемого материала в стерильной фарфоровой ступке. Стерильный изотонический раствор хло­рида натрия добавляют к гомогенату из расчета получения 20% взвеси.

Приготовленную тем или иным способом суспензию (ко­нечный объем жидкой фазы пробы) распределяют на порции, предназначенные:

- флакон «а» - для постановки РНГА-2 мл;

- флакон «б» - для посева на питательные среды и по­становки биопробы на токсины (заражение двух опытных мышей) - 2 мл;

- флакон «в» - для заражения четырех мышей с ослаб­ленной резистентностью к инфекции (биологическое обога­щение пробы) - 2,5 мл;

- флакон «г» - для заражения культуры клеток для на­копления риккетсий и хламидий-4 мл;

- флакон «д» - для заражения культуры клеток в целях накопления вирусов-8 мл;

- флакон «е» - остаток пробы (резерв на случай повто­рения или продолжения анализа).

Флакон «а» со взвесью, предназначенной для постановки РНГА, передают в группу индикации ВС без дополнительной обработки.

Флакон «б» со взвесью, предназначенной для обогащения пробы на питательных средах и постановки биопробы на токсин, передают в первую подгруппу идентификации ВС также без дополнительной обработки.

Во флакон «в» со взвесью, предназначенной для биоло­гического обогащения пробы на белых мышах с ослабленной к инфекции резистентностью, добавляют 2,5 мл поливалент­ной противоботулинической сыворотки, содержащей 100 - 200 ед/мл антитоксинов к ботулиническим токсинам типов А, В, Е. Смесь пробы с противоботулиническими сыворотка­ми выдерживают 10-15 мин при комнатной температуре, а затем используют для заражения четырех белых мышей.

Во флакон «г» со взвесью, предназначенной для накоп­ления на культуре клеток, содержащихся в пробе риккетсий и хламидий, добавляют 0,1 мл стерильной сыворотки круп­ного рогатого скота и 0,1 мл смеси растворов антибиотиков, содержащей 4000 ЕД/мл пенициллина и 2000 ЕД/мл стрепто­мицина. После этого флакон «г» передают во вторую под­группу идентификации БС.

Во флакон «д» со взвесью, предназначенной для накоп­ления содержащихся в пробе вирусов, добавляют 0,1 мл сме­си растворов антибиотиков, содержащей 80000 ЕД/мл пени­циллина и 40000 ЕД/мл стрептомицина. После этого флакон «д» передают во вторую подгруппу идентификации БС, про­водящую биологическое обогащение материалов проб на кле­точных культурах.

Флакон «е» с остатками жидкой фазы пробы хранят в группе первичной обработки проб при температуре 2-4⁰ С до окончания анализа данной пробы и используют при необ­ходимости для повторения или продолжения исследования.

---

Дата добавления: 2021-11-30; просмотров: 21; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!