СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ
Методы посева.Образец взвешивают, смешивают с разбавителем и помешают на агар, после чего чашки инкубируют при заданной температуре в течение 5сут. Одновременно подсчитывают плесени и дрожжи, так как плесени вполне отличимы от дрожжей по характерным гифам. Масса образца может быть от 5 до 400 г; образец смешивают с 0,1%-пым понтонным бульоном и разбавляют в пропорции 1 к 10 или 1:5.Любой фрагмент мицелия, имеющий неповрежденные ядро и споры, способен образовать колонии.
Для количественною определения плесеней используют несколько сред, поскольку универсальной среды до сих пор не разработано. Рекомендуется использовать агар Чапека, декстрозный агар Сабуро,глюкозный агар на основе дрожжевого экстракта, агар на солодовом экстракте, питательную среду общего назначения– агар для определения микробного числа с добавлением по 100 мг хлорамфеникола и хлортетрациклина.
Следует отметить, что одно из ограничений методов количественного определения плесеней состоит в том, что не существует одной универсальной среды для выделения и количественного определения всех видов плесеней из всех возможных пищевых продуктов.Поэтому рекомендуется применять различные культуральные среды.
Поскольку в большинстве пищевых продуктов может развиваться несколько видов плесеней, для микологического анализа таких продуктов может потребоваться несколько сред и разные условия инкубирования, особенно если требуется провести не только количественное определение. Еще одним лимитирующим фактором является отсутствие единых правил по выбору того или иного антибиотика для подавления размножения бактерий.
|
|
|
Методыфильтрации .Сущность метода с применением гидрофобного мембранного фильтра заключается в том, что в процессе фильтрации жидкий образец (или твердый в растворе)проходит через фильтрующий элемент с предварительным фильтром в размером пор 5 мкм (для удаления частиц пищевого продукта).За первым фильтром расположен второй мембранный фильтр (размер пор 0,45 мкм)с гидрофобной сеткой, способный улавливать отдельные клетки. Этот фильтрующий элемент помещают в чашку Петри на агар КМ-11, содержащий краситель-индикатор и антибиотик, и проводят инкубирование при температуре 25 ± 1 °С в течение 50 ± 2 ч, после чего подсчитывается количество ячеек с колониями.
Методыподсчетагифов по Ховарду.Метод основан на стандартизированном методе, при котором вычисляется процент микроскопических полей с гифами плесени, которые превышают по размеру одну шестую диаметра поля. Перед тем как использовать данный метод, необходимо научиться различать клеточную ткань продукта, не содержащего плесени, структуры инородных включений животного или растительного происхождения и собственно плесени. Гифы плесени состоят из продольных трубок, поперечных перегородок, разделяющих гифна отдельные участки, клеточного материала в форме гранул, разветвлений гифов, их концов, не способных преломлять свет, однако не в каждом образце все они присутствуют.
|
|
|
ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПЛЕСЕНЕЙ
Растущие на поверхности пищевых продуктов плесенимогут быть идентифицированы опытными микологами на уровне рода путем визуального наблюдения и микроскопии. Стерильной инокуляционной спицей проводят через колонию плесени и под ее поверхностью, захватывая отдельные фрагменты мицелия.Материал переносят на двойное предметное стекло. Если плесень не сходит со спицы, ее смачивают каплей 70%-ного этанола и удаляют краешком покровного стекла. Препарат исследуют под микроскопом при 40-кратном увеличении. Если для анализа цельных или дифференцированных структур требуется большее увеличение, то на покровное стекло капают 1 каплю иммерсионного масла и повышают увеличение до 100-кратного.
Изолированные из пищевых продуктов методом посева плесени идентифицируют путем микроскопии в соответствии с методами анализа, рекомендуемыми в справочниках по таксономии плесеней пищевого происхождения. Существует список таксономических признаков для идентификации выдяляемых из пищевых продуктов плесеней. Полезны также руководства по таксономии плесеней отдельных родов – по Aspergillus, Fusarium и Penicillium. Традиционно плесени определяют по таксономическим «ключам», в которых описаны их макроскопические и микроскопические характеристики после выращивания на селективной среде при определенной температуре в течение заданного времени.
|
|
|
Разрабатываются новые методы и аналитическое оборудование с целью идентификации плесеней– это разработка иммунологических тест-наборов, определение летучих соединений, молекулярные методы, основанные на анализе нуклеиновых кислот, ИК-спектроскопия и другие системы распознавания спектров.
Иммунологические тест-наборы разработаныдля AItemaria, Aspergillus, Botrytis, Сlаdosporium|, Fusarium, Geotrichum, Monascus, Mucor, Penicillium и Rhizopus. В тест-наборах используют антитела к компонентам клеточных стенок, внеклеточных полисахаридов и гликопротеинов плесеней. Имеется неспецифичный тест-набор на основе метода ELISA, способный обнаруживать в смеси 6 родов плесеней (Aspergillus, Cladosporiurn, Fusarium, Geotrichum, Mucorи Penicillium), a также плесени 10 других родов. Разработаны тест-наборы для обнаружения плесеней, продуцирующих микотоксины:афлатоксин, трихоцетен и фумонизин.
|
|
|
Для контроля роста плесеней модифицируются и некоторые бактериологические методы, в частности проточная цитометрия, в которой подсчитывается количество отдельных клеток в жидкости по мере их прохода через сенсорный датчик. Методы проточной цитометрии используются для обнаружения плесеней в воздухе с помощью разных параметров: размера частиц, гранулярности (бокового светорассеяния) клетки, а также красной флуоресценции при длине волны 620 нм после окрашивания и микроволнового облучения при 440 Вт и частоте 2450 МГц в течение 30с.
Разрабатываются современные методы идентификации плесеней: биосенсоры на основе ДНК и РНК, масс-спектроскопия, биолюминисцентные и другие подобные системы для обнаружения бактерий в пищевых продуктах.
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 255; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!