Лабораторная диагностика эхинококкозов
Морфологические методы исследования ларвоцист при цистном и альвеолярном эхинококкозах
Морфологическими методами исследования паразита при эхинококкозах выявляются характерные элементы строения личинок паразита, что служит прямым неопровержимым подтверждением диагноза эхинококкозов.
Лабораторная диагностика цистного эхинококкоза
Методы исследования нативных и окрашенных мазков
Отбор биологического материала
Исследованию на цистный эхинококкоз подлежат: содержимое паразитарной кисты, ее оболочки, мокрота больного (при эхинококкозе легких), промывные воды при лаваже бронхов (в случаях вскрытия кисты в бронх), желчь (при подозрении на прорыв кисты в желчные протоки), содержимое брюшной и плевральной полостей (при вскрытии кист в полости), содержимое дренажной жидкости в разные сроки после операции, при бронхоскопии, плевральной пункции, дуоденальном зондировании.
Исследованию на цистный эхинококкоз подвергают также материал, полученный при биопсии во время операции, пункционной биопсии печени, открытой биопсии при лапаротомии или торакотомии, на секции.
Необходимое оборудование, инструменты, реактивы
Ножницы
Пинцеты
Мельничный газ с диаметром ячеек 0,3 мм
Стеклянные стаканчики объемом 0,5-0,7 л
Чашки Петри
Пластмассовые одноразовые пипетки
Предметные стекла
Хирургические перчатки
|
|
|
Изотонический раствор хлорида натрия
Концентрированный раствор антибиотиков (пенициллин 2000 ЕД/мл + гентамицин 0,3 ЕД/мл, разведенные в физиологическом растворе)
Эмалированные кюветы
Стереомикроскоп
Световой микроскоп
Подготовка к исследованию
1) Для исследования содержимое кисты, мокроту, желчь и другие объекты исследования собирают в стерильную пробирку для посева на стерильность, выделения микрофлоры и определения ее чувствительности к антибиотикам.
2) Остальную часть материала собирают в центрифужную пробирку и центрифугируют.
3) Из осадка приготовляют нативные и окрашенные мазки. Для окраски мазков используют краску Романовского-Гимза, азур II, эозин.
4) Нативные и окрашенные мазки просматривают под микроскопом при малом и большом увеличении.
5) Для гистологического исследования кусочки стенки кисты или только кутикулярной оболочки размерами 1 
1 см фиксируют в нейтральном формалине, жидкости Карнуа.
6) Материал для гистологического исследования заливают в парафин; срезы толщиной 4-6 мкм окрашивают гематоксилин-эозином, пикрофуксином по Ван-Гизон, азур-эозином, PAS-реакцией, реактивом Шиффа на нуклеиновые кислоты по методу Браше и Фельгена.
|
|
|
Результаты исследования
При микроскопическом исследовании выявляют свободные или заключенные в выводковых капсулах юные и зрелые ввернутые и вывернутые протосколексы, фрагменты герминативной и кутикулярной (хитиновой) оболочек, известковые тельца, отпавшие от протосколексов большие и малые крючья, микроскопические ацефалоцисты (рис.2-5).
При незрелых кистах (не содержащих протосколексы) основным диагностическим признаком цистного эхинококкоза является кутикулярная оболочка и ее фрагменты. Иногда при вскрытии кисты в бронх или брюшную полость выделяются крупные фрагменты кутикулярной оболочки или вся оболочка. Микроскопическая кутикулярная оболочка легко идентифицируется по характерной ярко выраженной слоистости, не утрачиваемой даже при некротических изменениях. Микроскопически кутикулярная оболочка представляет собой плотную эластическую ткань белого или желто-белого цвета.
При зрелых цистах (содержащих протосколексы) наличие юных и зрелых протосколексов является важным прямым диагностическим признаком цистного эхинококкоза, а оценка инвазивности и деструктивных изменений протосколексов является косвенным признаком жизнеспособности ларвоцисты эхинококка у больных, подвергнутых специфической химиотерапии.
|
|
|
При определении жизнеспособности протосколексов при слабо выраженных изменениях их морфологии проводят:
1) окрашивание погибших протосколексов некоторыми красителями (генциановый фиолетовый, толуидиновый синий, негрозин, Янус зеленый, метиленовый синий и др.);
2) активацию выворачивания и двигательной активности живых протосколексов при подогревании инкубационной среды до 39-40 °С;
3) обработку протосколексов 80%-м раствором глицерина, что приводит к резкому изменению структуры и очертания тегумента метацестоды.
Прямыми показателями гибели протосколексов являются разной степени выраженности следующие признаки:
1) отсутствие двигательной активности, уменьшение количества или полное исчезновение известковых телец, сглаженность, помутнение и потемнение структуры паренхимы;
2) деформация короны крючьев или ее отпадение у вывернутых форм;
3) набухание, отслоение и нарушение целостности тегумента;
4) наличие "экскреторных пузырьков" вокруг хоботка вывернутых протосколексов. Последний признак проявляется не всегда (рис.2).
|
|
|
1 - фрагмент слоистой (хитиновой) оболочки
2 - ввернутая выводковая капсула со зрелыми и юными протосколексами; 3 - вывернутая выводковая капсула со зрелыми протосколексами
3 - вывернутая выводковая капсула со зрелыми протосколексами: а - ввернутые протосколексы; б - вывернутый протосколекс
4 - микроскопические дочерние ацефалоцисты, формирующиеся из герминативных клеток "ножки" зрелых протосколексов
5 - погибшие зрелые ввернутый (а) и вывернутый (б) протосколексы с деформированной (у ввернутой формы) и отпавшей (у вывернутой формы) короной крючьев
6 - известковые тельца; 7 - отпавшие крючья протосколексов
Рис.2. Структурные элементы цистного эхинококка, имеющие диагностическое значение, в пунктатах из паразитарных кист больных. Нативные препараты. Длина измерительной шкалы - 50 мкм
Результаты гистологических исследований
Окраска гематоксилин-эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону необходимы для изучения структуры тканей паразита.
Гистохимические реакции применяют для оценки жизнеспособности возбудителя.
При микроскопии видно:
- кутикулярная оболочка имеет типичное слоистое строение, жизнеспособная киста хорошо окрашивается PAS-реакцией;
- зародышевый слой (герминативная оболочка) представлен рядом крупных клеток с темным ядром (рис.3).
5 - слой хитиновой оболочки эхинококковой кисты; 6 - герминативная оболочка эхинококковой кисты
2 - закладка протосколекса; 4 - зрелый протосколекс; 6 - герминативная оболочка эхинококковой кисты
1 - стенка выводковой капсулы эхинококковой кисты; 2 - закладка протосколекса; 4 - зрелый протосколекс
1 - стенка выводковой капсулы эхинококковой кисты; 2 - закладка протосколекса; 4 - зрелый протосколекс
1 - стенка выводковой капсулы эхинококковой кисты; 4 - зрелый протосколекс
4 - зрелый протосколекс
3 - юный протосколекс; 4 - зрелый протосколекс
Рис.3. Структурные компоненты эхинококковой кисты, выделенной оперативно из головного мозга больного М., 6 лет. Окрашенные гистологические препараты. Длина измерительной шкалы - 50 мкм
Выраженность зародышевого слоя у разных кист и разных больных может быть различной. Маложизнеспособная или нежизнеспособная киста теряет свою характерную структуру: исчезает зародышевый слой, кутикулярная оболочка утрачивает выраженную слоистость и теряет способность окрашиваться PAS-реакцией.
Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 402; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!