Методы исследования нативного мазка мокроты и лаважной жидкости с центрифугированием

Подготовка к исследованию

1) Перелить мокроту (лаважную жидкость) в центрифужные пробирки.

2) Центрифугировать в течение 3-5 мин при 1500 об./мин.

3) Перенести осадок пипеткой на предметное стекло, прикрыть покровным.

4) Микроскопировать при увеличении: объектив 8 или 10, окуляр 10, для уточнения морфологических особенностей - окуляр 40.

Методы исследования мочи

Применяются для выявления возбудителя мочеполового шистосомоза при любой стадии инвазии. Возможно обнаружение яиц диоктомифы (Dioctophyma renale) - редко встречаемого гельминта - паразита почечной лоханки.

Необходимое оборудование

Центрифужные пробирки

Пипетки

Предметные и покровные стекла

Центрифуга

Микроскоп

Метод концентрации мочи

Подготовка к исследованию

1) Всю разовую порцию мочи отстаивать в высоких банках или цилиндрах в течение 30-45 мин.

2) Слить верхнюю часть, оставив 10-15 мл осадка, который перелить в центрифужные пробирки.

3) Оставшуюся часть центрифугировать в течение 5 мин при 1500 об./мин, или 1-2 мин при 3000 об./мин.

4) Слить надосадочную жидкость.

5) Осадок перенести пипеткой на предметное стекло, прикрыть покровным.

6) Микроскопировать с объективом 8 или 10, окуляр 10, для уточнения морфологических особенностей - окуляр 40.

Метод фильтрации мочи

Подготовка к исследованию

1) 5-10 мл мочи от порции, собранной с 11 ч утра до 15 ч дня, или все порции суточной мочи смешивают с равным количеством детергента-типола.

2) Фильтруют под вакуумом через фильтровальную бумагу (или фильтры N 1).

3) На увлажненных фильтрах обнаруживают яйца и личинки гельминтов при микроскопии.

4) Микроскопируют при увеличении: объектив 8 или 10, окуляр 10.

Диагностические признаки возбудителей гельминтозов

Для видовой идентификации яиц гельминтов при микроскопии препаратов используются следующие морфологические признаки:

1) Размеры: измеряют длину и ширину обнаруженных яиц. Для каждого вида гельминта характерна определенная величина яиц, которая варьирует от среднего значения (рис.1).

Рис.1. Размеры яиц гельминтов

1 - Metagonimus yokogawi, 2 - Heterophyes heterophyes, 3 - Opisthorchis felineus, 4 - Opisthorchis (Clonorchis) sinensis, 5 - Taeniidae g. sp., 6 - Hymenolepis nana, 7 - Enterobius vermicularis, 8 - Trichuris trichiura, 9 - Ascaris lumbricoides (оплодотворенное), 10 - Ancylostomatidae sp., 11 - Diphyllobotriidae g. sp., 12 - Hymenolepis diminuta, 13 - Paragonimus westermani, 14 - Trichostrongylus, 15 - Ascaris lumbricoides (неоплодотворенное), 16 - Schistosoma japonicum, 17- Schistosoma haetmatobium, 18 - Schistosoma mansoni, 19 - Fasciola hepatica, 20 - Fasciolopsis buski

2) Форма: яйца гельминтов в основном имеют эллипсоидную форму, вытянутую в разной степени, часто асимметричны.

3) Толщина оболочки яиц разных видов гельминтов сильно различается: от очень тонкой (как у анкилостоматид) до толстой многослойной с наружной крупнобугристой белковой оболочкой, характерной для яиц аскарид.

4) Цвет: яйца некоторых видов гельминтов окрашены в желто-коричневый цвет уже в матке самок (у большинства трематод), у других - изначально бесцветны, но прокрашиваются пигментами испражнений в темно-желтый или коричнево-бурый цвет по мере прохождения по кишечнику (яйца аскарид, власоглава), встречаются и неокрашенные яйца, например, у анкилостоматид, остриц, карликового цепня.

5) Наличие морфологических особенностей таких, как крышечки, шипы, пробки, крючки или фестончатая наружная оболочка.

6) Внутреннее содержимое: яйца выделяются из матки гельминтов на разных стадиях развития: они могут содержать практически неразличимый зародыш, окруженный желточными клетками, один или несколько хорошо заметных бластомеров или сформированную личинку. Если пробы кала исследуют через несколько часов или спустя 1-2 дня после дефекации, яйца некоторых нематод могут развиваться до более взрослых стадий, что следует учитывать при диагностике.

При обнаружении яйца гельминта или похожего на него объекта следует тщательно оценить все перечисленные признаки, чтобы установить видовой диагноз.

Иллюстрация возбудителей глистных инвазий приведены в прилож.2, 3, 4.

Видовая диагностика трематодозов

Представители класса Trematoda, паразитирующие у человека, локализуются в разных органах, в связи с чем условно разделены на 4 группы: I - трематоды, паразитирующие в гепатобилиарной системе (сем. Opisthorchidae, Fasciolidae, Dicrocoeliidae); II - кишечные трематоды (сем. Heterophyidae, Nanophyetidae и др.); III - легочные трематоды (сем. Paragonimidae) и IV - трематоды кровеносной системы (сем. Schistosomatidae). В соответствии с этим, яйца I группы трематод могут быть выявлены в дуоденальном содержимом и кале; II группы - только в кале (в связи с тем, что продолжительность жизни кишечных трематод невелика, в кале можно обнаружить и самих взрослых паразитов); III группы - в мокроте и кале, так как мокрота часто заглатывается; IV - в кале или моче в зависимости от вида паразита и его локализации в организме хозяина.

Яйца разных видов трематод существенно отличаются по размеру: от самых мелких, присущих кишечным трематодам, до самых крупных, таких как яйца фасциол. Оболочки яиц чаще всего тонкие и ровные, за исключением таковых у D. lanceatum, Sch. japonicum и видов Paragonimus.

Цвет оболочек яиц разных видов трематод варьирует от желтовато-золотистого до буро-коричневого.

Наиболее характерным признаком практически всех яиц трематод - паразитов человека, является наличие крышечки, которая открывается для выхода созревшей личинки - мирацидия во внешнюю среду. Крышечка может быть разной высоты, примыкает к скорлупе яйца плотно, так что становится практически неразличимой. Край крышечки может быть в виде ровной тонкой или волнистой линии. Часто оболочка перед крышечкой образует валик, выраженный в разной степени. При рассматривании яйца под микроскопом этот валик виден в виде выступов с его боков, так называемых "плечиков". Размер их, высота крышечки и способ ее прилегания являются важными систематическими признаками. Яйца шистосом крышечки не имеют, при выходе мирацидия оболочка яйца разрывается.

На противоположном полюсе от крышечки находится в разной степени развитый бугорок: от небольшого утолщения оболочки до выраженного выроста - "шишечки", иногда широкой. Яйца шистосом снабжены шипами, место их расположения и размер является видовым признаком.

Яйца возбудителей описторхоза, шистосомозов и некоторых кишечных трематод выделяются из матки самок полностью зрелыми со сформированной личинкой - мирацидием внутри, которая хорошо видна при микроскопировании. Яйца возбудителей фасциолеза, парагонимоза, нанофиетоза содержат плохо различимый зародыш в центре, окруженный желточными клетками. Развитие этих яиц происходит во внешней среде.

Сравнительная характеристика морфологических признаков яиц трематод представлена в прилож.2.

При обнаружении в кале яиц D. lanceatum и F. hepatica следует помнить, что они могут быть транзитными. При употреблении в пищу печени крупного и мелкого рогатого скота, зараженного возбудителями фасциолеза или дикроцелиоза, их яйца при недостаточной термической обработке могут сохраняться и транзитом проходить через желудочно-кишечный тракт человека, обнаруживаясь затем в кале. Необходимо повторное исследование после исключения из пищи указанных продуктов.

Видовая диагностика цестодозов

Класс ленточных гельминтов относится к типу плоских червей и делится на два отряда - лентецов и цепней.

К отряду лентецов относятся 3 вида возбудителей дифиллоботриоза, встречающихся на территории Российской Федерации (Diphyllobothrium latum, D. dendriticum, D. luxi). В связи с тем, что матка хвостовых члеников Diphyllobothriidae имеет выводное отверстие, в кале обнаруживаются яйца, имеющие характерное строение: они сероватого цвета, овальной формы с тонкой двуконтурной оболочкой. На одном полюсе имеются крышечки, на другом - утолщение оболочки в виде бугорка. Последний виден не всегда, особенно при работе методом Като. В центре яйца находится зародышевая клетка. По яйцам Diphyllobothriidae невозможно определить видовую принадлежность лентеца, в связи с чем при записи результатов анализа указывают "обнаружены яйца Diphyllobothriidae sp.".

Дифференциальная диагностика лентецов и цепней приведена в прилож.3.

К отряду цепней относятся Taenia solium, Taeniarhynchus saginatus, Hymenolepis nana, Hymenolepis diminuta, Dipylidium caninum.

Taeniarhynchus saginatus - возбудитель бычьего цепня и Taenia solium - возбудитель свиного цепня локализуются в тонком кишечнике. Строение яиц этих двух видов возбудителей одинаковое. Яйцо имеет тонкую прозрачную оболочку с двумя нитевидными придатками. Внутри яйца находится зародыш (онкосфера) почти правильной круглой формы, окруженной толстой оболочкой желтовато-коричневого цвета и снабженной тремя парами крючьев. Оболочка яйца, как правило, быстро разрушается и при исследовании кала видна только онкосфера. Онкосферы бычьего цепня обнаруживаются при исследованиях перианальных отпечатков, возможно их обнаружить и в кале. При записи результатов исследований указывают "обнаружены онкосферы Taeniidae g. sp.".

Дифференциальная диагностика Т. solium и Т. saginatus проводится по концевым членикам (прилож.3).

Во внешнюю среду самостоятельно или вместе с калом могут выделяться членики Т. saginatus, Т. solium, Diphyllobothriidee sp. и D. caninum. Диагностика проводится по форме членика (соотношение ширины и длины) и особенностям строения матки:

концевой членик Т. saginatus имеет ширину меньшую, чем длину. Матка замкнутая, имеет центральный ствол с большим числом боковых ответвлений - до 30 и более;

концевой членик Т. solium также имеет ширину меньшую, чем длину. Матка замкнутая, имеет центральный ствол с небольшим числом боковых ответвлений - до 10-12;

концевой членик Diphyllobothriidae sp. имеет ширину большую, чем длину. Матка имеет выводной приток, расположена в середине членика в виде розетки, боковые ответвления отсутствуют;

концевые членики D. caninum имеют формы семечек тыквы.

Hymenolepis nana - возбудитель гименолепидоза (карликовый цепень) паразитирует в нижнем отделе тонкого кишечника. Яйца имеют эллипсоидную форму, не окрашены, слегка ополесцируют. Между оболочкой и зародышем находятся нити (филаменты). Зародыш (онкосфера) имеет три пары крючьев. Яйца H. nana выявляются и при использовании метода Като сразу после просветления препарата. В дальнейшем они разрушаются. Определить строение матки невозможно, так как членик разрушается в кишечнике человека.

Hymenolepis diminuta - крысиный цепень, крайне редко паразитирует у человека. Облигатным хозяином являются грызуны. У человека гельминт находится в тонком кишечнике. Яйца - округлые, желтоватого цвета. Наружная оболочка - толстая, двухконтурная, радиально исчерченная. Внутри яйца расположена круглая онкосфера с тремя парами крючьев.

Dipylidium caninum - цепень тыквовидный вызывает дипилидоз. Облигатным хозяином являются кошки, собаки, лисы и другие животные. У человека встречается крайне редко. Паразит локализуется в тонком кишечнике. В выделившемся членике находятся коконы с несколькими яйцами. Форма яйца круглая, оболочка толстая, цвет сероватый или желтоватый. Внутри яйца 6 крючьев.

Видовая диагностика нематодозов

Идентификация возбудителей нематодозов в кале.

Ascaris lumbricoides - возбудитель аскаридоза паразитирует в тонком кишечнике. Половозрелая самка в сутки выделяет более 200 тыс. яиц. Яйца могут быть оплодотворенные и неоплодотворенные. Морфологическое строение их различно.

Взрослые особи имеют веретенообразную форму. Живые или свежевыделившиеся из кишечника аскариды красновато-желтые, после гибели становятся беловатыми. Самец заметно меньше самки, длина его 15-25 см, толщина 2-4 мм, задний конец тела загнут крючком. Самка имеет прямое тело длиной 25-40 см и 3-6 мм в толщину.

Оплодотворенное яйцо имеет овальную, реже шаровидную форму. Яйца покрыты толстой, многослойной оболочкой. Наружная белковая оболочка фестончатая, окрашена в коричневый цвет. Внутренние толстые липоидные оболочки гладкие, бесцветные. Внутри яйца располагается шаровидный бластомер. Если исследуется кал через несколько дней после дефекации, внутри яйца можно обнаружить 2, 4, 8 и так далее бластомеров, вплоть до личинки. Иногда можно выявить оплодотворенные яйца без белковой оболочки, что затрудняет диагностику.

Неоплодотворенные яйца могут иметь разнообразную форму - вытянутую треугольную и так далее - яйца покрыты грубой белковой оболочкой с неравномерными зубцами. Все содержимое яйца заполнено крупными желточными клетками (от полюса до полюса). Неоплодотворенные яйца без белковой оболочки практически не диагностируются.

При заполнении результатов исследования обязательно указать вид яиц аскарид: оплодотворенные или неоплодотворенные.

Trichocephalus trichiurus - возбудитель трихоцефалеза паразитирует в слепой кишке и выделяет в сутки 1-3 тыс. яиц. Яйца имеют лимонообразную или бочонковидную форму с "пробочками" на обоих полюсах (рис. прилож.2). Яйца покрыты многослойной оболочкой. Наружная оболочка гладкая, темно-коричневая прерывается на полюсах и сквозь этот разрыв выпячивается бесцветная внутренняя оболочка. Внутреннее содержимое яйца - мелкозернистое. В дальнейшем можно обнаружить 2, 4, 8 и так далее бластомеров вплоть до личинки.

Ancylostoma duodenale, Necator americanus - возбудители анкилостомидозов паразитируют в 12-перстной кишке и верхних отделах тонкого кишечника. В сутки A. duodenale выделяет 25 тыс. яиц, N. americanus - 10 тыс. яиц. Определить видовую принадлежность анкилостомид по яйцам практически невозможно. В связи с этим, при выдаче результатов исследования указывается "обнаружены яйца Ancylostomatidae sp.". Яйца анкилостомы и некатора - овальные с закругленными полюсами, покрыты гладкой, бесцветной, тонкой двуконтурной оболочкой. При малом увеличении микроскопа оболочка кажется одноконтурной. Яйца выделяются с калом на стадии 4-8 бластомеров. При нахождении в течение 1-2 суток при комнатной температуре в яйце могут развиться личинки.

Дифференциальная диагностика до вида проводится только по филяриевидным личинкам (прилож.4).

Strongyloides stercoralis - возбудитель стронгилоидоза паразитирует в 12-перстной кишке. При интенсивной инвазии - в пилорической части желудка, поджелудочной железе, желчном пузыре. S. stercoralis - единственный паразит человека, выделяющий во внешнюю среду рабдитовидные личинки. Иногда в кале можно обнаружить и филяриевидные личинки. В сутки S. stercoralis откладывает до 50 тыс. яиц, которые в кишечнике превращаются в неинвазионную рабдитовидную личинку. Личинки имеют размер 0,2 мм. Передний конец личинки тупой с четко выраженным ротовым отверстием. Пищевод занимает длины личинки и имеет 2 расширения. Между этими расширениями находится нервное кольцо. Кишечник занимает длины личинки. На границе средней и хвостовой трети кишечника находится половой зачаток в виде клетки серого цвета. Хвостовой конец личинки заострен. Рабдитовидная личинка в течение 1-2 суток может превратиться в филяриевидную личинку. Размер ее достигает 0,6 мм, пищевод - цилиндрический, занимает 40% длины личинки. Половой зачаток практически не выделен. Хвостовой конец раздвоен.

Кроме личинок S. stercoralis в кале можно обнаружить личинки свободноживущих почвенных нематод, не являющиеся паразитами человека. На головном конце и в бульбусе этих личинок имеются хитиновые образования в виде "шапочки", усиков, стилета или "якоря". Все эти образования позволяют дифференцировать непаразитарные личинки от личинок S. stercoralis.

Enterobius vermicularus - возбудитель энтеробиоза паразитирует в нижнем отделе тонкого и верхнем отделе толстого кишечника. В матке самки содержится от 5 до 17 тыс. яиц. Яйца чаще всего обнаруживаются в перианальных складках. При исследовании кала яйца остриц выявляются крайне редко. Возможно обнаружение взрослых паразитов, представляющих из себя мелкую нематоду 9-12 мм с резко заостренным хвостовым концом. Яйца остриц - асимметричной формы, покрыты тонкой, гладкой, двуконтурной оболочкой. Внутри яйца находится "зародыш", который через 4-6 ч превращается в инвазионную личинку.

Trichostrongylus sp. - возбудитель трихостронгилёза паразитирует преимущественно в тонком кишечнике. Это раздельнополые гельминты длиной 0,5 см, продолжительность жизни которых свыше 8 лет. Яйца трихостронгилид - овально-эллипсовидной формы с тонкой прозрачной оболочкой с одним тупым закругленным и другим острым концом. Внутри свежевыделенных яиц 16-30 бластомеров. Во внешней среде через 1-3 сутки из выделенных яиц вылупляются рабдитовидные личинки, которые после двукратной линьки превращаются в инвазионные филяриевидные личинки.

Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 335; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 3 4 5 6 789 10 11 12 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!