Микробиологическая диагностика бруцеллеза.
Методы МБ диагностики бруцеллеза.
· К биологической пробе ( заражение морских свинок) прибегают в том случае, если материал сильно загрязнён посторонней микрофлорой и получить непосредственно из него чистую культуру возбудителя трудно. (Вводится морской свинке по 1.0 подкожно в паховую обл. Через 30 дней: Проба Бюрне, р-ия Райта, посев материала из органов и лимфатических узлов на питатетльные среды для выделения чистой культуры)
· Для диагностики бруцеллеза используются следующие серологические реакции:
А. Для обнаружения антител
1. Реакция Райта (титр антител определяют в международных единицах - МЕ. Диагностическое значение имеет титр антител более 200 МЕ/мл.
2. Реакция Кумбса (для определения неполных антител).
3. Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).
4. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).
5. Иммуноферментный метод (ИФМ – лунки сенсибилизируют антигеном).
6. Реакция связывания комплемента.
7. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР) – прогностическое значение.
Б. Для обнаружения антигена
1. Реакция агрегат-гемагглютинации.
2. Иммуноферментный метод (луночки сенсибилизируют антителами к родоспецифическому антигену бруцелл).
|
|
|
3. РПГА с использованием эритроцитарного диагностикума с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл.
4. Реакция коагглютинации.
Кроме того, для быстрой диагностики бруцеллеза используют ПЦР.
· Аллергический - проба Бюрне
· Бактериологический.
От больного человека - кровь, костный мозг , моча (печеночный бульон + антифаговая сыворотка)
От больного животного - абортивный плод, околоплодная жидкость, кусочки некротизированной плаценты, моча, молоко, мясо (печеночный агар и бульон+ антифаговая сыворотка+ генциа-виолет)
Печеночный МПА + антифаговая сыворотка:
1)Биохимические тесты( активность уреазы, образование сероводорода. При необходимости др тесты.
2)Р-ия агглютинации со спец. сывороткой
3) Изучение отношения к Тбилиотическому бруцеллезному фагу
4)Изучение роста на средах с красителями
Серодиагностика бруцеллеза.
См. 23
Преимущества реакции Кумбса при серодиагностике бруцеллеза.
При помощи р-ии прямой и пассивной агглютинации определяют полные ( бивалентные) антитела. Неполные ( моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этими методами , так как, соединяясь с антигеном , блокируют его, но не могут вызвать аггрегации антигены в крупные конгломераты. Для выявления неполных антител используют спец. р-июКумбса. В р-ии участвуют : а)сыворотка больного в которой преобладают неполные антитела, б)антиген-диагностикум, в)антиглобулиновая сыворотка- антитела к человеческому глобулину.
|
|
|
Реакция протекает в 2 этапа:
1)взаимодействие антигена с неполными антителами
2)взаимодействие антиглобулиновой сыворотки с антителами, адсорбированными на антигене.
В силу того, что антиглобулиновые антитела двувалентны, они связывают 2 одновалентных антитела, адсорбированных соотвественно на 2 антигенах , что приводит к склеиванию антигенов, к их агглютинации.
Серологические экспресс-реакции для диагностики бруцеллеза.
Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).
Реакция Хеддльсона и реакция Райта, их сущность.
1. Реакция Хеддльсона: На стекле размечают карандашом 4 квадрата размером 3x3 см каждый. Микропипеткой наносят в квадраты капли сыворотки объемом 0,04, 0,02 и 0,01 мл, в последний квадрат одну каплю (0,03 мл) физиологического раствора (контроль). В каждую каплю другой микропипеткой добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума. Перемешивают капли стеклянной палочкой пли петлей, начиная с контрольной капли и идя от меньших количеств сыворотки к большим. Слегка подогревая и покачивая стекло, наблюдают за появлением агглютинации, которая должна наступать в течение 5 минут.
|
|
|
Оценка реакции: агглютинация только в первой капле – реакция сомнительная; агглютинация в первой и второй каплях – реакция положительная; агглютинация во всех трех каплях – реакция резко положительная.
Примечание: Реакция Хеддльсона имеет только скрининговое, ориентировочное значение. В случае ее положительного результата необходимо ставить более надежные серологические реакции (Райта, РПГА, ИФМ) и/или аллергическую пробу Бюрне.
Зарисовать реакцию Хеддльсона с указанием доз сыворотки в каждой капле.
2. Реакция Райта(ставится по классической схеме пробирочной реакции агглютинации (см. Часть I, занятие 16). Диагностический титр реакции Райта - 1:200): Наибольшую диагностическую ценность реакция агглютинации представляет при острой и подострой форме бруцеллеза. Отсутствие агглютинации во всех дозах сыворотки - реакция "отрицательная". Учет реакции проводят по стандарту мутности в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости. Для приготовления стандарта мутности антиген, применяемый для постановки РА, еще раз разводят в два раза
Дата добавления: 2019-01-14; просмотров: 1489; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!