Значение реакции иммунофлуоресценции в диагностике ООИ.
Метод основан на использовании антител, связанных с красителем, например флюоресцеинизотиоцианатом. РИФ широко применяется для выявления вирусных антигенов в материале больных и для быстрой диагностики.
В практике применяются два варианта РИФ: прямой и непрямой. В первом случае применяются меченные красителем антитела к вирусам, которые наносятся на инфицированные клетки (мазок, культура клеток). Таким образом, реакция протекает одноэтапно. Неудобством метода является необходимость иметь большой набор конъюгированных специфических сывороток ко многим вирусам.
При непрямом варианте РИФ на исследуемый материал наносится специфическая сыворотка, антитела которой связываются с вирусным антигеном, находящимся в материале, а затем наслаивается антивидовая сыворотка к гамма-глобулинам животного, в котором готовилась специфическая иммунная сыворотка, например антикроличья, антилошадиная и т. п. Преимущество непрямого варианта РИФ состоит в потребности лишь одного вида меченых антител.
Метод РИФ широко применяется для быстрой расшифровки этиологии острых респираторных вирусных инфекций при анализе мазков-отпечатков со слизистой оболочки верхних дыхательных путей [2, 3]. Успешное применение РИФ для прямой детекции вируса в клиническом материале возможно лишь в случае содержания в нем достаточно большого числа инфицированных клеток и незначительной контаминации микроорганизмами, которые могут давать неспецифическое свечение.
|
|
|
Морфологические и тинкториальные особенности возбудителя чумы.
Морфологические свойства: Y.pestis имеет длину 1-2 мкм и толщину 0,3-0,7 мкм. В мазках из организма больного и из трупов, погибших от чумы людей и грызунов, выглядит как короткая овоидная палочка с биполярной окраской. В мазках из бульонной культуры палочка располагается цепочкой, в мазках из агаровых культур – беспорядочно. Спор не образует, жгутиков не имеет. При температуре 37о образует нежную капсулу белковой природы.
Тинкториальные свойства:Грамотрицательны, лучше красится щелочными и карболовыми красителями (синькой Леффлера)
Культуральные свойства возбудителя чумы.
Палочка чумы даёт характерный рост на жидких и плотных питательных средах:
· На бульоне он проявляется образованием рыхлой плёнки, от которой спускаются нити в виде сосулек, напоминающих сталактиты, на дне – рыхлый осадок, бульон остаётся прозрачным.
· Развитие колоний на плотных питательных средах проходит через три стадии: через 10-12 ч под микроскопом рост в виде бесцветных пластинок (стадия «битого стекла»); через 18-24 ч - стадия «кружевных платочков», при микроскопии заметна светлая кружевная зона вокруг центральной части желтоватой или слегка буроватой окраски. Через 40-48 ч наступает стадия «взрослой колонии» - буровато-очерченный центр с выраженной периферической зоной. Стимуляторы роста: сульфит натрия, кровь (или её препараты) или лизат культуры сарцины.
|
|
|
7. Подвиды Yersinia pestis.
Род Yersinia относится к семейству Enterobacteriaceae и включает 11 видов, из них патогенными для человека являются три: Y.pestis, Y.pseudotuberculosis, Y.enterocolitica.
Отечественная классификация вида Yersinia pestis (Саратов, 1985)
· Y. pestis subsp. pestis - основной подвид
· Y. pestis subsp. altaica- алтайский подвид
· Y. pestis subsp. caucasica- кавказский подвид
· Y. pestis subsp. hissarica- гиссарский подвид
· Y. pestis subsp. ulegeica- улэгейский подвид
Главные факторы патогенности возбудителя чумы
1. Способность клеток сорбировать эндогенные красители и гемин.
2. Зависимость роста при температуре 37о от наличия в среде ионов кальция.
3. Синтез V-W-антигенов. W расположен в наружной мембране, а V в цитоплазме. Эти антигены обеспечивают размножение Y.pestis внутри макрофагов.
4. Синтез «мышиного» токсина. Токсин блокирует перенос электронов в митохондриях сердца и печени, поражает тромбоциты и сосуды и нарушает из функцию.
|
|
|
5. Синтез капсулы (фракции I). Капсула угнетает активность макрофагов.
6. Синтез плазмокоагулазы. Оба белка обеспечивают высокие инвазивные свойства.
7. Синтез термоиндуцибельных белков наружной мембраны – Yop-белков. Белки YopA, YopD, YopE, YopH, YopK, YopM, YopN подавляют активность фагоцитов.
8. Синтез нейраминидазы. Она способствует адгезии.
9. Синтез аденилатциклазы. Она подавляет «окислительный взрыв».
10. Синтез пилей адгезии. Она угнетает фагоцитоз и обеспечивает внедрение.
11. Эндотоксин (ЛПС).
12. pH6-антиген. Подавляет фагоцитоз и обладает цитотоксическим действием на макрофаги.
Дата добавления: 2019-01-14; просмотров: 891; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!