Методы микробиологической диагностики стафилококковых инфекций.
1. Бактериологический (Материал из зева, носа, отделяемое ран, кровь, гной)
Материал засевают на кровяной агар (гемолиз) или на молочно-желточно-солевой агар (угнетение роста посторонних бактерий за счет содержания соли, лучше выделяется пигмент и лецитиназа). Выделенную культуру идентифицируют по видовым признакам, определяют у нее наличие основных признаков и факторов патогенности, обязательно проверяют чувствительность к антибиотикам, в случае необходимости проводят фаготипирование.
2. Серологический (Определение анти-O-стрептолизина. Определение антигиалуронидазы.)
См. в тетради стр. 18
Выделение чистой культуры стафилококков.
Для выделения чистой культуры используют непрямой бактериологический метод.
Для чего и как проводят фаготипирование?
Фаготипирование стафилококков, как и многих других возбудителей бактериальных инфекций, проводится исключительно для эпидемиологических целей – для более тонкого типирования возбудителя внутри вида, что помогает найти источник инфекции и определить пути её распространения.
Для типирования патогенных плазмокоагулирующих стафилококков используют международный набор из 23 умеренных бактериофагов. Эти фаги разделены на группы:
1 группа - фаги 29, 52, 52А, 79, 80;
2 группа - фаги ЗА, ЗС, 55, 71;
3 группа - фаги 6, 42Е, 47, 53, 54, 75, 77, 83А, 84, 85;
4 группа - фаги 94 ,95 ,96; и вне групп фаг 81.
Перед работой набор сухих фагов стерильно растворяют в щелочном бульоне (рН-7,6) с 0,4% глюкозы и 0,02% CaCl2 . В ампулу добавляют I мл бульона и получают разведение фага 10-1. Из этого основного разведения готовят два рабочих разведения, соответствующие тест-разведению (ТР) и 100 ТР. Разведение, соответствующее 1 ТР, указано на этикетке фага.
|
|
|
Степень лизиса культуры разными разведениями фага регистрируется по следующей схеме:
++++ сливной, полный лизис,
+++ полусливной лизис (незначительный рост культуры в зоне лизиса),
++ наличие в месте нанесения капли фага свыше 50 колоний фага (пятен лизиса),
+ от 20 до 50 колоний фага,
— полное отсутствие лизиса.
Наивысшее разведение, вызвавшее лизис эталонного штамма на +++, называется тест разведением (I TP) фага. Например, если на этикетке указано, что I ТР данной серии фага 10-3, то для получения I TP надо из разведения 10-1 сделать два последовательных десятикратных разведения, и разведение 10-3 будет соответствовать I ТР.
Методика фаготипирования
Суточную агаровую культуру стафилококка засевают в 2,5 мл бульона Хоттингера, Мартена или МПБ (рН 7,2-7,4) и выращивают 3-4 часа при 37°C (до появления заметной мути).
Одновременно готовят чашки с 1,2% агаром, приготовленным на бульоне Хоттингера с добавлением свежей мясной вода (рН 7,6; глюкозы 0,4%). CaCl2 добавляют в расплавленный агар непосредственно перед разливом (0,2 мл стерильного 10%-ного раствора CaCl2 на 100 мл агара). По 25-30 мл расплавленного агара разливают в чашки Петри и после застывания подсушивают чашку 30-40 минут при 37°C. Затем 3-4-часовую испытуемую культуру стафилококка пастеровской пипеткой засевают газоном, избыток культуры удаляют пипеткой, а чашку подсушивают 30-40 минут.
|
|
|
Дно засеянной чашки расчерчивают карандашом на 23 квадрата и в каждый квадрат засеянной среды стандартной петлей (диаметр 2 мм) или тонко оттянутой пипеткой наносят каплю соответствующего фага всегда в одном и том же порядке.
После подсыхания фага чашку переворачивают крышкой вниз и инкубируют 18-20 часов при 30°C или 5-6 часов при 37°C и оставляют до следующего утра при комнатной температуре.
Фаготипирование начинают рабочим разведением фагов, соответствующим I ТР. Штаммы, с которыми получен отрицательный результат, на следующий день типируют повторно, используя разведения фагов, соответствующие 100 ТР (разведение 1:10) в нашем опыте.
Учет и регистрация результатов
Штамм считается типируемым, если хотя бы один фаг вызвал сильную реакцию при типировании I ТР или 100 ТР. Стафилококковые штаммы чаще лизируются не одним, а несколькими фагами, что дает для каждого штамма характерную для него фагомозаику. В зависимости от фагов, входящих в эту мозаику, штамм стафилококка относят к тем или иным фагогруппам.
|
|
|
Какие экзотоксины продуцируют стафилококки?
Комплекс секретируемых экзотоксинов:
o Мембраноповреждающие(α, β, ɤ, δ)
o Эксфолиативные(А-термостабилен, В-термолабилен)
o Истинный лейкоцидин-токсин избирательно действует на лейкоциты, разрушая их.
o Экзотоксин, вызывающий синдром токсического шока
Дата добавления: 2019-01-14; просмотров: 586; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!