Оценка степени дегрануляции тучных клеток в опытной и контрольной каплях взвеси.
| Контрольная капля взвеси | Опытная капля взвеси | |||
| № опыта | % интактных тучных клеток | % дегранулир. тучных клеток | % интактных тучных клеток | % дегранулир. тучных клеток |
| 1. | ||||
| 2. | ||||
На основании полученных данных сделать вывод о реакции перитонеальных тучных клеток сенсибилизированной крысы на специфический аллерген.
АЛЛЕРГИЯ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ СТАДИИ АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ
Цель занятия : изучить «in vitro» проявления патофизиологической стадии аллергической реакции на модели изолированного кишечника сенсибилизированной крысы.
Анафилактическую реакцию можно воспроизвести «in vitro» на изолированных гладкомышечных органах сенсибилизированных животных (реакция Шульца-Дэйла), которые отвечают сокращением на воздействие специфического антигена. Контрактура гладких мышц является результатом действия на них высвобождающихся из активированных тучных клеток и макрофагов медиаторов аллергии. Методика Шульца-Дэйла позволяет воспроизвести патофизиологическую стадию аллергии на изолированном органе сенсибилизированного животного (отрезок кишки, полоска матки, участок трахеи, сердце и т.д.).
Животные, оборудование, реактивы
Морские свинки массой 250-300 грамм, сенсибилизированные яичным альбумином; электрокимограф; бумажная лента; чернила; рычажок Энгельмана; ванночка для изолированных органов объем 20 мл; полая стеклянная трубка с крючком для фиксации отрезка кишки и подачи в раствор воздуха, резиновый баллон; термометр; винтовой зажим; зажим Мора; ножницы; глазной анатомический пинцет; иглодержатель; круглая хирургическая игла; лигатура; чашка Петри; раствор Кребса; 0,1% раствор яичного альбумина; 0,001% раствор гидрохлорида ацетилхолина; 0,001% раствор дигидрохлорида гистамина; 0,001% раствора мепирамина малеата; 5% раствор гексенала.
|
|
|
Работа 2.
ИЗУЧЕНИЕ АНАФИЛАКТИЧЕСКОЙ КОНТРАКТУРЫ НА МОДЕЛИ ИЗОЛИРОВАННОГО КИШЕЧНИКА
Опыт 1. Воспроизведение анафилактической контрактуры изолированного кишечника
Сенсибилизированную яичным альбумином морскую свинку наркотизировать внутрибрюшинным введением гексенала (50 мг/кг массы) и забить кровопусканием. Вскрыть брюшную полость, выделить подвздошную кишку. Участок подвздошной кишки длиной 10-15 см тщательно отмыть от содержимого подогретым до 37оС раствором Кребса и рассечь на отрезки длиной 1,5 см.
Один из полученных отрезков кишки поместить в чашку Петри с раствором Кребса и прошить с обоих концов лигатурами (рис. 11.6). На одном конце отрезка длина двойной лигатуры должна быть около 10 см, на другом - не менее 30 см.
|
|
|
Заполнить ванночку для изолированных органов с помощью шприца 20 мл подогретого до 37оС раствора Кребса.
рис. 11.6.
Один конец отрезка кишки прикрепить с помощью короткой лигатуры к крючку стеклянной трубки и погрузить отрезок вместе с трубкой в ванночку с теплым раствором Кребса.
рис. 11.7.
Укрепить пробку стеклянной трубки в лапке штатива так, чтобы изогнутый в виде крючка конец трубки находился на расстоянии 0,5 см от дна ванночки. Лигатура от другого конца отрезка кишки должна проходить через центр ванночки к свободному плечу рычажка Энгельмана, не касаясь трубки и стенок ванночки. Установить писчик в горизонтальном положении и зафиксировать лигатуру заостренной спичкой в среднем отверстии короткого плеча рычажка (рис. 11.7).
Соединить стеклянную трубку с резиновым баллоном, заполненным воздухом, и с помощью винтового зажима отрегулировать подачу воздуха в раствор, омывающий отрезок кишки (20-25 пузырьков воздуха в мин).
Установить флакон с чернилами на уровне писчика и, нагнетая шприцем воздух во флакон, заполнить капилляр писчика чернилами до появления первой капли на кончике пера. Установить скорость вращения барабана кимографа на 1,5 мм/сек. После 5-минутной адаптации отрезка кишки записать его спонтанные сокращения, включив двигатель кимографа.
|
|
|
Ввести в ванночку 0,2 мл 0,001% раствора гистамина, погрузив иглу шприца в жидкость Кребса (конечная концентрация гистамина в ванночке при этом будет равна 0,1 мкг/мл). Записать сокращение отрезка кишки на ленте кимографа в ответ на гистамин. После достижения максимальной амплитуды сокращения кишки выключить двигатель кимографа. Раствор Кребса слить, открыв зажим Мора на резиновой трубке, соединенной с дном ванночки. Заполнить ванночку 20 мл свежего теплового раствора Кребса с помощью шприца.
Дождавшись полного расслабления отрезка кишки, ввести в ванночку шприцем 0,2 мл 0,001% раствора ацетилхолина (конечная концентрация в ванночке будет 0,1 мкг/мл). Когда сокращение достигнет максимума, остановить барабан кимографа и заменить раствор Кребса в ванночке с изолированным отрезком кишечника.
После полного расслабления гладкомышечного органа ввести в ванночку 0,2 мл 0,1% раствора яичного альбумина (конечная концентрация 0,1 мкг/мл) и записать анафилактическую контрактуру кишечника.
После отмывания раствором Кребса и полного расслабления кишки ввести в ванночку ту же дозу яичного альбумина и записать реакцию отрезка кишки на повторное введение специфического антигена.
|
|
|
Снять бумажную ленту с барабана кимографа. Определить в мм амплитуды сокращений отрезка кишки в ответ на гистамин, ацетилхолин и яичный альбумин в испытанных концентрациях. Рассчитать относительную величину амплитуды анафилактической контрактуры в процентах от амплитуды сокращения отрезка кишки на гистамин в стандартной концентрации 0,1мкг/мл.
Опыт 2. Влияние супрастина на сократительную реакцию изолированного отрезка сенсибилизированной морской свинки, вызванную специфическим антигеном и гистамином
Подготовить изолированный отрезок кишки сенсибилизированной морской свинки для регистрации его сокращений по вышеописанной методике. Ввести в ванночку 0,2 мл 0,001% раствора гистамина и записать сокращение отрезка кишки. Когда контрактура достигнет максимума, остановить кимограф и заменить раствор Кребса в ванночке.
Ввести в ванночку 0,2мл 0,001% раствора супрастина (блокатор Н1 рецепторов гистамина)и записать реакцию отрезка кишки.
Для того, чтобы убедиться в эффективности блокады гистаминовых рецепторов, не меняя раствора Кребса, через 2 мин после добавления супрастина ввести в ванночку 0,2 мл 0,001% раствора гистамина и зарегистрировать на ленте кимографа реакцию изолированного кишечника.
Ввести в ванночку (без смены раствора в ней) 0,2 мл 0,001% раствора ацетилхолина, записав при этом реакцию гладких мышц.
Сменить раствор Кребса в ванночке и ввести в последнюю 0,2 мл раствора супрастина.
Не меняя раствора в ванночке, ввести в нее 0,2 мл 0,1% раствора яичного альбумина и зарегистрировать реакцию гладкомышечного органа на действие разрешающей дозы специфического антигена.
Вычислить относительную величину анафилактической контрактуры изолированного кишечника по способу, описанному в опыте 1. Сравнить относительные величины анафилактической контрактуры без добавления супрастина и на фоне действия последнего. Сделать выводы.
Работа 3.
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 301; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!