АЛЛЕРГИЯ. МЕДИАТОРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ АНАФИЛАКСИИ ГЛАДКИХ МЫШЦ
Цель работы: изучить влияние веществ, изменяющих внутриклеточный обмен циклических нуклеотидов, на развитие экспериментальной анафилаксии изолированного кишечника морской свинки.
Внутриклеточное содержание циклических нуклеотидов определяет анафилактическое высвобождение медиаторов из тучных клеток, тканевых макрофагов и сократительную реакцию гладкомышечных клеток. Изменяя внутриклеточное содержание циклического аденозинмонофосфата путем активации аденилатциклазы или блокады фосфодиэстеразы, можно существенно влиять на проявление анафилаксии гладкомышечных органов.
Животные, оборудование, реактивы
Морские свинки, сенсибилизированные яичным альбумином; электрокимограф; бумажная лента; чернила; рычажок Энгельмана; ванночка для изолированных органов (20 мл); полая трубка с крючком для фиксации отрезка кишки и подачи в раствор воздуха; резиновый баллон; термометр; винтовой зажим; зажим Мора; ножницы; глазной анатомический пинцет; иглодержатель; круглая хирургическая игла; лигатура; чашка Петри; раствор Кребса; 0,1% раствор яичного альбумина; 0,001% раствор дигидрохлорида гистамина; 0,001% раствор гидрохлорида ацетилхолина; 0,01% раствор изопротеренола; 0,25% раствор теофиллина; 0,25% раствор пропранолола.
Работа 4.
ХАРАКТЕР АНАФИЛАКТИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ
УРОВНЯ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ НУКЛЕОТИДОВ
Опыт 1. Воспроизведение анафилактической контрактуры изолированного кишечника (контрольный опыт)
|
|
|
Подготовить отрезки подвздошной кишки сенсибилизированной яичным альбумином морской свинки по методике, описанной в работе 1 (опыт 1) предыдущего занятия.
Последовательно записать на ленте кимографа реакции гладкомышечного органа на действие гистамина в концентрации 0,1 мкг/мл, ацетилхолина (0,1мкг/мл) и специфического антигена (10 мкг/мл).
Определить в мм амплитуды сокращений отрезка кишки в ответ на действие гистамина, ацетилхолина и яичного альбумина в испытанных концентрациях. Рассчитать относительную величину амплитуды анафилактической контрактуры в процентах от амплитуды сокращения отрезка кишки в ответ на действие гистамина в стандартной концентрации 0,1 мкг/мл. Результаты опыта внести в таблиц 11.3 и 11.4.
Опыт 2. Влияние стимуляции –β адренорецепторов на реакцию изолированного отрезка кишки сенсибилизированной морской свинки, вызванную специфическим антигеном и гистамином
Подготовить к опыту изолированный отрезок кишки морской свинки по вышеописанному методу. Ввести в ванночку 0,2 мл 0,001% раствора гистамина и зарегистрировать реакцию отрезка кишки. Когда сокращение кишки достигнет максимума, выключить двигатель кимографа и заменить раствор в ванночке.
|
|
|
Ввести в ванночку 0,2 мл 0,1% раствора изопротеренола (агонист -β адренорецепторов) и наблюдать изменение тонуса гладкомышечного органа. Не меняя раствора Кребса, через 2 мин после добавления изопротеренола ввести в ванночку 0,2 мл 0,1% раствора яичного альбумина и записать реакцию отрезка кишки.
После спонтанного расслабления отрезка кишки ввести в ванночку 0,2 мл 0,001% раствора гистамина и записать реакцию гладких мышц.
Сравнить относительную величину анафилактической контрактуры изолированного кишечника, возникшей без добавления изопротеренола и на фоне действия изопротеренола, и вычислить в процентах изменение этого показателя. Сравнить амплитуду сократительной реакции кишки на действие гистамина до и после инкубации с изопротеренолом; изменение величины амплитуды выразить в процентах. Результаты опыта внести в таблицу 11.3 и таблицу 11.4.
Опыт 3. Влияние пропранолола на сократительную реакцию изолированного отрезка кишки сенсибилизированной морской свинки, вызванную специфическим антигеном и гистамином
Подготовить к опыту отрезок кишки по вышеописанному методу. Ввести в ванночку 0,2 мл 0,001% раствора гистамина и записать сокращение отрезка кишки. Когда амплитуда сокращения достигнет максимума, выключить двигатель кимографа и заменить раствор Кребса в ванночке.
|
|
|
Ввести в ванночку 0,2 мл 0,25% раствора пропранолола (блокатор -β адренорецепторов) и записать реакцию отрезка кишки на пропранолол. Через 2 минуты, не меняя раствора Кребса, ввести в ванночку 0,2 мл 0,001% раствора гистамина и записать реакцию отрезка кишки на гистамин.
Сменить раствор Кребса в ванночке и ввести в нее 0,2 мл 0,25% раствора пропранолола. Через 2 минуты, не меняя раствора Кребса, ввести в ванночку 0,2 мл 0,001% раствора гистамина и записать реакцию отрезка кишки на гистамин.
Сравнить относительные величины амплитуд анафилактической контрактуры отрезков кишки в контрольном опыте и на фоне преинкубации с пропранололом, изменение этого показателя вычислить в процентах. Сравнить амплитуды сократительной реакции изолированной кишки на гистамин до и после инкубации с пропранололом. Результаты опыта внести в таблиц 11.3 и 11.4.
Опыт 4. Влияние теофиллина на сократительную реакцию изолированного отрезка кишки сенсибилизированной морской свинки, вызванную специфическим антигеном и гистамином
|
|
|
Подготовить к опыту отрезок кишки по вышеописанному методу. Ввести в ванночку 0,2 мл 0,001% раствора гистамина и записать сокращение отрезка кишки. Когда амплитуда сокращения достигнет максимума, выключить двигатель кимографа и заменить раствор Кребса в ванночке.
Ввести в ванночку 0,2 мл 0,25% раствора теофиллина (конечная концентрация 25 мкг/мл), записать реакцию отрезка кишки на теофиллин. Не меняя раствор Кребса, через 2 мин после добавления теофиллина ввести в ванночку 0,2 мл 0,1% раствора яичного альбумина и записать реакцию изолированного кишечника на антиген.
После спонтанного расслабления отрезка кишки, не меняя раствора Кребса в ванночке, ввести в нее 0,2 мл 0,001% раствора гистамина и записать сократительную реакцию отрезка кишки.
Сравнить относительные величины амплитуд анафилактической контрактуры кишки в контрольном опыте и на фоне преинкубации с теофиллином, изменение анафилактической контрактуры вычислить в процентах. Сравнить амплитуду сократительной реакции изолированной кишки на гистамин до и после инкубации с теофиллином и вычислить в процентах изменение сократительной реакции на гистамин.
Результаты опыта внести в таблицы 11.3 и 11.4.
Таблица 11.3
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 264; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!