Серодиагностика вирусных инфекций, используемые реакции.
Серодиагностика – метод диагностики инфекционных заболеваний, основанный на выявлении АТ к АГ возбудителя заболевания в сыворотке крови больного.
Правила забора крови.
1. Забор крови натощак из локтевой вены (7-10 мл)
2. Пробирку в термостат при температуре 37 ◦ на 30-60 мин.
3. Сгусток крови отделяют от стенки пробирки.
4. Помещают пробирку на холод дл ретракции сгустка.
5. Отделяют сыворотку (прозрачная желтого цвета, без следов гемолиза).
| Достоинства | Недостатки |
| 1. Отсутстве сложного оборудования. 2. Определение латентных и хронических форм инфекций. 3. Выявление смешанной инфекции. 4. Обследование большого количества проб. 5. Прогнозирование иммунного ответа. 6. Оценка эффективности препарата. 7. Раннее определение АГ. | 1. Ретроспективный метод. 2. При назначении препаратов наблюдается падение титра АТ. 3. Не всегда формируются АТ. |
Критерии
1. Диагностический титр АТ- минимальное количество бывает только у больных; титр АТ снижен – не переболел/привит.
2. Повышение титра АТ
3. Определение стадии заболевания:
IgM – первичны;
IgG –вторичны.
Реакции
1. Реакция преципитации:
АГ-АТ
АГ (гаптен) присутствует в растворенной форме, в результате чего комплекс АГ-АТ осаждается (помутнение/появление преципитата)
АГ – мало; АТ-много.
Материалы:
1. Сыворотка
2. Исследуемый материал
Определение активности сыворотки
1. Сыворотку не разводят
|
|
|
2. Разливают в узкие пробирки
3. АГ разводят в 10 раз
4. Взаимодействие АГ-АТ, образование комплексов и их концентрация
5. Определение максимального разведения АГ, который выявляеттитр сыворотки.
2. Реакция Оухтерлони:
Исследуемый материал: ликвор (АГ)
Диагностический препарат: антименингококковая сыворотка(АТ) + контрольная сыворотка
Проведение реакции: в чашке на толстом слое агара
| 1 контроль |
| 3 сыворотка |
| 2 ликвор |
В агаре жидкости диффундируют—встречная диффузия АТ(3) и АГ(2) – образование на месте контакта комплексов АГ-АТ—скопление комплексов—формирование полосы преципитации
Чем больше АГ (2), тем ближе полоса к сыворотке (3)
3. Реакция кольцепреципитации (Асколи):
* выявление возбудителя сибирской язвы (бактерия)
1. Кипячение термоэкстракта + АГ
2. Наслоение термоэкстракта на сыворотку
3. Образование «кольца» преципитации (АГ+)
4. Реакция непрямой гемагглютинации (30 мин):
Диагностический препарат: искуственно укрупненные АГ
1) АТ на латекс+ капля рвоты -- +стафилококковый токсин (2 мин);
2) Вместо латекса – эритроциты или споры грибов (туляремия):
IПодготовка.
1. Эритроциты барана обрабатывают формалином.
2. Сорбируют АГ на поверхность эритроцитов (2 нед) – диагностикум.
|
|
|
II Реакция.
1. Диагностикум + АТ—гемагглютинация (сорбция на ЕС).
2.Осаждение гемагглютината на дно пробирки:
· «зонтик» + ;
· «пуговица» -.
5. Лиофильная сушка (в вакууме в ампулах при температуре 70◦ -- судлимация воды—возможность хранения до 2 лет).
6. Универсальная реакция (дорогостоящий метод):
Исследуемы материал: парные сыворотки
Диагностикум: IgG (гипериммунная сыворотка) адсорбируются на ЕС – формирование комплекса суспензионных АТ
АГ: образование гемагглютината - панели
Реакция с участием комплимента (РСК). ?????
Реакция иммунного гемолиза.
· Сыворотка кролика + ЕС барана—гемолиз
· Сыворотка кролика – комплимент (нагревание) – гемолитическая система (индикаторная)
Необходимы:
1. Равные объемы компонентов.
2. АГ
3. Комплимент – сыворотка морской свинки
4. Нагреть сыворотку больного для инактивации собственного комплимента
Реакция:
IФормирование комплекса АГ-АТ-комплимент
II Добавление индикаторной системы (конкуренция)
III Оседание индикаторной системы
IVОпределение дозы комплимента (титр – последняя лунка)
Комплимент-АГ-АТ – нет гемолиза +результат (нет оседания индикаторного комплекса)
|
|
|
Комплимент – гемолитическая система – гемолиз –результат (оседание индикаторного комплекса)
РИФ
| 2 этапная | 3 этапная |
| IМазок сыворотки II АГ-АТ – обработка меченной к белкам сывороткой | IАГ+сыворотка II АГ-АТ-комплимент III + сыворотка против комплимента |
| Достоинства | Недостатки |
| Удобный Выявление внутриклеточных паразитов Выявление пораженных вирусами клеток | Выцветание красителя |
9. ИФА (для ВИЧ):
Меченные АТ+ ранее выявленные АГ и АТ
Дата добавления: 2018-06-01; просмотров: 907; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!