Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию



Ориентировочная основа деятельности студентов для проведения лабораторной работы:

Работа №1.  Определение общего холестерина крови ферментативным методом

Принцип метода. Определение холестерина основано на использовании сопряженных ферментативных реакций, катализируемых  холестеролэстеразой, осуществляющей гидролиз эфиров холестерина до свободного холестерина; холестеролоксидазой, осуществляющей превращение холестерина в холестенон с образованием Н2О2;  пероксидазой, осуществляющей окисление  перекисью 4-аминоантипирина и фенола с образованием окрашенного продукта розово-малинового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации холестерина.

Реактивы:

А) Рабочий реагент - смесь лиофильно высушенных ферментов, буферного раствора, фенола, аминоантипирина

Б) Калибратор – калибровочный раствор холестерина 4,65 ммоль/л

Порядок выполнения работы: 

1. 1 мл рабочего реагента наливают в пробирку №1 (опыт)  и пробирку №2 (калибровочная проба), затем прогревают 5 минут при 370 С

2. В пробирку №1 (опыт) добавляют 0,01 мл сыворотки крови, в пробирку №2 (калибровочная проба) - 0,01 мл калибратора  

3. Пробирки выдерживают 20 минут в термостате при 370 С

4. Измеряют оптическую плотность растворов на ФЭКе против Н2О при длине волны 490 нм в кювете 0,3 см  

5. Расчет проводят по формуле: х = (Аопыт : Акалибр.) × 4,65 ммоль/л,

Где  А – оптическая плотность растворов (показания ФЭКа)

Уровень холестерина в норме (сыворотка) – 3,63 - 8,03 ммоль/л

рекомендуемые пределы (желательные) для взрослых - < 5 ммоль/л

Клинико-диагностическое значение. Гиперхолестеринемия – увеличение холестерина в крови, сопровождает гиперлипопротеинемии IIA, IIB, III типов; заболевания печени, холестаз, нефротический синдром, злокачественные опухоли поджелудочной железы и простаты, сахарный диабет и другие заболевания. Гиперхолестеринемия является фактором риска развития атеросклероза и одним их биохимических тестов патологии. Гипохолестеринемия наблюдается при болезнях печени (цирроз в поздней стадии заболевания, острая дистрофия печени), голодании, сепсисе, гиперфункции щитовидной железы и др.

Работа №2. Количественное определение ЛПНП в  сыворотке крови

Принцип метода: метод основан на способности ЛПНП осаждаться в присутствии хлорида кальция и гепарина; при этом изменяется мутность раствора (гепарин способен образовывать с ЛПНП комплекс, который в присутствии хлорида кальция выпадает в осадок). По степени помутнения раствора и судят о концентрации ЛПНП в сыворотке крови.

Порядок выполнения работ: 

  1. В пробирку вносят 2 мл 0,27% раствора Cacl2 и 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают.
  2. Определяют оптическую плотность раствора (А1) против Н2О при длине волны 630 нм в кювете 0,5 см.
  3. Раствор из кюветы переливают в пробирку, добавляют 0,04 мл (2 капли) 1% раствора гепарина, перемешивают.
  4. Ровно через 4 минуты снова определяют оптическую плотность раствора (А2) в тех же условиях.
  5. Расчет проводят по формуле: х = (А2 – А1)×100

В норме содержание ЛПН в сыворотке крови составляет 3 – 4,5 г/л .                 

Клинико-диагностическое значение. Дислипопротеинемия – нарушение физиологического соотношения классов липопротеинов с повышением содержания определенного класса. Гиперлипопротеинемия – повышение концентрации в крови определенных классов липопротеинов, чаще всего - атерогенных (ЛПНП, ЛПОНП). Увеличение концентрации ЛПНП наблюдается при атеросклерозе, холестазе, острых гепатитах, диабете, ожирении и др.

 

Учебно-материальное обеспечение

1. Кровь (имитация)

2. Химическая посуда, дозаторы, реактивы

3. ФЭК

4. Термостат

Наглядные пособия:

 1. Таблицы

 2. Технические средства обучения: (компьютер, видеопроектор)

Литература:

а) обязательная

1. Биологическая химия: Учебник/Е.С, Северин, Т.Л. Алейникова и др.- М.: ООО

« Медицинское информационное агентство», 2008. - 368 с.

2. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С. Северина. - М.: «ГЭОТАР-МЕД», 2003 – 784 с.

3. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева, 3 изд. - М.: «ГЭОТАР», 2005 – 441 с.

4. Биохимия с упражнениями и задачами: Учебник/Под ред. Е.С.Северина.- М.: «ГЭОТАР», 2008 – 384 с.

5. Биохимия с упражнениями и задачами: Учебник/Под ред. Е.С.Северина.- М.: «ГЭОТАР», 2011 – 624 с.

6. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.:«Медицинское информационное агентство». – 2004. -566 с.

7. Щербак И.Г. Биологическая химия: Учебник. – СПб.: «Издательство СПбГМУ», 2005. – 480 с.

 

б) дополнительная

1.  Хасина М.А. Словарь-справочник по клинической биохимии – Владивосток: «Медицина ДВ», 2008.

2. Интернет-ресурсы(http://www.biblioclub.ru/. http://www.studmedlib.ru/ и др.). 

 

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего образования «Тихоокеанский государственный медицинский университет»

Министерства здравоохранения Российской Федерации

 

Кафедра Общей и биологической химии

 

    УТВЕРЖДЕНО на заседании кафедры протокол № 14 от «27 » июня 2016 г. Заведующий кафедрой доц. Н.С. Иванова

 

 


Дата добавления: 2018-04-05; просмотров: 357; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:






Мы поможем в написании ваших работ!