РПГА – реакция пассивной гемагглютинации (определение напряженности поствакцинального противодифтерийного и противоскарлатинозного антитоксических иммунитетов)
Под РПГА понимают реакцию, в которой АТ-а взаимодействуют с высокодисперсными АГ (гаптенами), предварительно адсорбированными на корпускулярных носителях - эритроцитах, которые при этом склеиваются (рис.29).
Компоненты РПГА, применяемой для определения напряженности поствакцинального противодифтерийного антитоксического иммунитета:
1) испытуемая сыворотка крови в разведениях от 1:10 до 1:20480;
2) диагностикум дифтерийный эритроцитарный – дифтерийный анатоксин, адсорбированный на поверхности эритроцитов;
3) физиологический раствор;
4) противодифтерийная контрольная сыворотка с активностью 10МЕ/мл;
5) полистероловые пластины (при их отсутствии – пробирки).
Испытуемую сыворотку разводят физ. раствором от 1:10 до 1:20480 в 12 лунках.
Вносят по 1 капле диагностикума в каждую лунку.
Ставят контроли специфичности реакции с иммунной противодифтерийной антисывороткой (положительная реакция) и нормальной сывороткой (отрицательная реакция).
Противодифтерийную контрольную сыворотку (с активностью 10МЕ/мл) разводят от 1:10 до 1:20480 и вносят также по 1 капле диагностикума.
Оставляют при комнатной температуре на 3 часа (максимум на 15-20 часов) и читают реакцию.
При положительной реакции, в результате образования комплекса (АГ-АТ) на поверхности эритроцитов, последние склеиваются и равномерно покрывают все дно пробирки или всю лунку пластинки в виде зонтика с неровными краями. При отрицательной реакции эритроциты выпадают в осадок в виде меленького диска с ровными краями («пуговки»).
|
|
|
Титром антитоксина в исследуемом материале считают последнее максимальное разведение, которое еще вызывает агглютинацию эритроцитов.
Расчет активности испытуемой сыворотки производят по формуле:
Х=(10ЧА)/В,
где: Х – активность испытуемой сыворотки в МЕ/мл.;
10 – титр контрольной сыворотки в МЕ/мл.;
А – максимальное разведение испытуемой сыворотки с положительным результатом;
В – максимальное разведение контрольной сыворотки с положительным результатом.
Неиммунными считаются лица с титром антитоксина менее 0,03 МЕ/мл. (1:20).
РПГА с целью определения напряженности противоскарлатинозного антитоксического иммунитетаставятсанатоксином S. pyogenes, адсорбированным на поверхности эритроцитов.
Реакция преципитации (РП): термопреципитации по Асколи и РП в геле по Оухтерлони
Преципитация и агглютинация – это довольно сходные реакции, которые различаются главным образом на основании физических свойств АГ. В первом случае он представлен в растворимой, во втором – в корпускулрной формах. В основе РП лежит образование преципитата в процессе реакции АГ-АТ.
|
|
|
РП высоко специфична и чувствительна.
Ингредиенты реакции:
1) растворимый АГ или гаптен (преципититоген);
2) АТ-преципитины (иммунная преципитирующая сыворотка; получают иммунизацией кроликов соответствующими АГ);
3) изотонический раствор хлорида натрия или агаровый гель.
Методы постановки РП:
1. РП в растворах – реакция кольцепреципитации;
2. РП в геле.
Постановка РП по Асколи с целью обнаружения антигена сибиреязвенных бацилл.
Для постановки реакции преципитации необходимо иметь: преципитиноген - гаптен B.anthracis (экстракт из тканей), преципитин (преципитирующая сибиреязвенная сыворотка) и физиологический раствор.
В качестве сибиреязвенного термопреципитиногена используют прокипяченые и профильтрованные водные экстракты органов и тканей трупного материала.
Реакцию кольцепреципитации ставят в узких преципитационных пробирках, в которые разливают преципитирующие сыворотки. Затем по стенке пробирки осторожно наслаивают преципитиноген. При положительной реакции на границе соприкосновения ингредиентов появляется мутное кольцо преципитации (рис.30).
При постановке реакции преципитации применяют следующие контроли:
а) антиген и физиологический раствор;
|
|
|
б) специфическая сыворотка и физ. раствор;
в) антиген и неспецифическая сыворотка.
РП в геле по Оухтерлони (реакция нейтрализации экзотоксина антитоксином) позволяет определять токсигенность дифтерийной палочки с помощью антитоксической сыворотки. В чашку Петри с питательной средой помещают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической противодифтерийной сывороткой и засевают исследуемыми культурами в виде штрихов (бляшек), перпендикулярных к полоске бумаги. В качестве положительного контроля берут заведомо токсигенную культуру. Инкубируют при 37°С в течение 24-48 часов. При наличии токсигенной культуры в месте взаимодействия токсина с антитоксином образуются линии преципитации (рис.31).
Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 986; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!