Контроль эффективности физического способа стерилизации (кипячение) бактериологическим методом



 

Исследуемый материал – спорогенная (B. anthracoides) и аспорогенная культуры(E. coli ).

Ход работы:

1) Проверка культур на чистоту:

-приготовление мазка из культуры E. сoli и окраска по Грамму. E. сoli представляет собой грамотрицательные палочки, расположенные по одиночке;

-приготовление мазка из культуры B. аnthracoides и окраска по Ожешке. Bac. аnthracoides представляет собой синие палочки, расположенные в цепочку; центрально расположенные споры красного цвета (по морфологическим и тинкторальным признакам не отличается от B. anthracis).

2) Кипячение культур в водяной бане в течение 30 минут.

3) С целью проверки гибели микробов делаем контрольные посевы: B. аnthracoidesзасеваем на скошенный МПА,Е. сoli – на МПБ.

4) Инкубация посевов в термостате при 370 в течение 18-24час.

5) Макроскопическое изучение посевов: на МПА отмечаем рост в виде матового налёта, желтоватого цвета; МПБ – прозрачен.

6) При микроскопическом исследовании материала с МПА обнаруживаем стрептобациллы и споры.

7) Оформление заключения об эффективности стерилизации.

 

 

Определение антибиотикочусвтвительности бактерий методами «бумажных дисков» и серийных разведений

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом «бумажных дисков»

Биологическая активность антибиотиков выражается в международных единицах (ME). За единицу активности принимается то минимальное количество антибиотика, которое задерживает рост стандартного штамма, определенного вида микроорганизма в строго определенных условиях. Степень чувствительности к антибиотикам необходимо определять для успешного проведения лечения. Наиболее распространен метод «бумажных дисков».

Методика.

1.В чашку Петри с МПА «газоном» засевают взвесь изучаемой культуры микроба, например, S. aureus.

2. На засеянную поверхность агара пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками. Диски располагают на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии от края чашки 15 мм.

3.Чашки выдерживают в термостате 18-24 часов при температуре 37 °С.

4.Учёт результатов проводят на 2-ой день путем измерения зон задержки роста бактерий вокруг дисков. Так, зоны диаметром до 10мм указывает на отсутствие чувствительности, до 15 – слабую, до 25 – среднюю и более 25 – высокую чувствительность исследуемого микроба к антибиотику (рис.23).

5.Оформление заключения: К каким антибиотикам чувствителен возбудитель? Какой антибиотик можно рекомендовать для лечения и почему?

 

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений

 Данным методом определяют минимальную подавляющую (бактериостатическую) концентрацию антибиотика (МПК) - наименьшую концентрацию антибиотика, при которой не происходит размножение бактерий и содержимое пробирки остается прозрачным, и минимальную бактерицидную концентрацию антибиотика (МБК) - наименьшую концентрацию антибиотика, вызывающую полную гибель бактерий.

Методика.

1.В пробирки разливают жидкую питательную среду (МПБ) по 1 мл.

2.Добавляют исследуемый антибиотик в различных разведениях, например, от 1 до 128 ед/мл.

3.Каждому разведению добавляют по 1 мл исследуемой бульонной культуры бактерий.

4. Посевы инкубируют при 37°C в термостате.

5.Учет результатов:

- определение МПК по угнетению роста бактерий;

- для определения МБК дополнительно производят высевы из пробирок с отсутствием видимого роста бактерий на чашки с плотной питательной средой, не содержащей антибиотика. На чашках обозначают концентрацию антибиотика, из который сделан высев.

6. Посевы инкубируют при 37°C в термостате.

7.Определение МБК по отсутствию роста бактерий на плотной питательной среде.

 

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ДИСБАКТЕРИОЗА КИШЕЧНИКА

 

 Цель. Определение состава фекальной микрофлоры : выделение чистой культуры фекальных микроорганизмов и идентификация.

Исследуемый материал – различные разведения фекалий в физиологическом растворе от 101 до 1011.

1-й этап.Получение изолированных колоний фекальной микрофлоры.

Ход работы.

1.Делают посевы соответствующих разведений испражнения на среды:

-для выявления анаэробных бифидобактерий необходимо делать посевы фекалий в разведениях от 106 до 1011 глубоким уколом в пробирки с полужидкой средой Блаурококка (печеночно-МПА с цистеином и лактозой);

- для выделения E.сoli - на среду Эндо (Левина),

-для выделения патогенных энтеробактерий (сальмонелл, шигелл и др.) – на среду Плоскирева,

-для выделения Proteus vulgaris - посев по Щукеевичу в конденсационную воду скошенного МПА,

-для выделения стафилококков с лецитиназной активностью – на желточно-солевой агар,

-для выделения гемолитических бактерий - на кровяной агар,

-для выделения грибов рода Кандида - на среду Сабуро и др.

2.Все посевы помещают в термостат при 37°С на 18-24 часа, Блаурококка – 48 час., за исключением среды Сабуро ( при 28-30°С на 3-5 дней).

2-й этап.Выделение чистой культуры.

Ход работы.

1. Подсчет колоний и макроскопическое описание их:

Выделение чистой культуры бифидобактерий является весьма трудоемким и практически необязательным, так как определение разведения, в котором обнаруживают бифидобактерий является вполне достаточным для оценки нормального или пониженного содержания их в фекалиях. Из посевов, в которых виден рост в виде помутнения всей среды или отдельных колоний, готовят мазки и окрашивают их по Граму. Обнаружение характерных грамположительных палочек с разветвлениями на концах в виде римской цифры V, с несколько утолщенными концами подтверждает их принадлежность к бифидобактериям (рис.24).

-на среде Эндо: определение общего количества E.сoli, подсчет лактозонегативных (бесцветных) и со слабовыраженными ферментативными свойствами (розывые) колоний (рис.25);

-на среде Плоскирева - бесцветных колоний патогенных энтеробактерий (сальмонелл, шигелл и др.);

-на скошенном МПА - рост Proteus vulgaris по всей поверхности;

-на желточно-солевой агаре - лецитиназная активность стафилококков проявляется в виде радужного помутнения вокруг колоний (рис.26);

-на кровяном агаре – колонии бактерий, обладающих гемолитической активностью;

-на среде Сабуро – колонии грибов рода Кандида округлой формы, выпуклые, с гладкой поверхностью, ровными краями, матового цвета. Из подозрительной колонии готовят неокрашенный препарат. При его микроскопии должны быть почкующиеся овальные клетки - псевдомицелии (почкующиеся клетки распалагаются в цепочку). Окрашиваются по Граму положительно.

2.Микроскопическое исследование колоний.

3.Пересев небольшой части колоний на скошенную среду.

4. Инкубация в термостате при 37°С в течение 18-24 часа.

3-й этап. Идентификация выделенной чистой культуры.

Ход работы.

1. Макроскопическое определение роста микробов.

2. Проверка на чистоту выделенной чистой культуры – микроскопическое исследование.

3. Окончательная идентификация по ферментативной активности путем пересева на диференциально-диагностические среды и по др. признакам.

4-й этап. Учет результатов идентификации и оформление заключения о наличие и степени дисбактериоза.

 


Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 254;