Контроль эффективности физического способа стерилизации (кипячение) бактериологическим методом
Исследуемый материал – спорогенная (B. anthracoides) и аспорогенная культуры(E. coli ).
Ход работы:
1) Проверка культур на чистоту:
-приготовление мазка из культуры E. сoli и окраска по Грамму. E. сoli представляет собой грамотрицательные палочки, расположенные по одиночке;
-приготовление мазка из культуры B. аnthracoides и окраска по Ожешке. Bac. аnthracoides представляет собой синие палочки, расположенные в цепочку; центрально расположенные споры красного цвета (по морфологическим и тинкторальным признакам не отличается от B. anthracis).
2) Кипячение культур в водяной бане в течение 30 минут.
3) С целью проверки гибели микробов делаем контрольные посевы: B. аnthracoidesзасеваем на скошенный МПА,Е. сoli – на МПБ.
4) Инкубация посевов в термостате при 370 в течение 18-24час.
5) Макроскопическое изучение посевов: на МПА отмечаем рост в виде матового налёта, желтоватого цвета; МПБ – прозрачен.
6) При микроскопическом исследовании материала с МПА обнаруживаем стрептобациллы и споры.
7) Оформление заключения об эффективности стерилизации.
Определение антибиотикочусвтвительности бактерий методами «бумажных дисков» и серийных разведений
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом «бумажных дисков»
Биологическая активность антибиотиков выражается в международных единицах (ME). За единицу активности принимается то минимальное количество антибиотика, которое задерживает рост стандартного штамма, определенного вида микроорганизма в строго определенных условиях. Степень чувствительности к антибиотикам необходимо определять для успешного проведения лечения. Наиболее распространен метод «бумажных дисков».
|
|
|
Методика.
1.В чашку Петри с МПА «газоном» засевают взвесь изучаемой культуры микроба, например, S. aureus.
2. На засеянную поверхность агара пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками. Диски располагают на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии от края чашки 15 мм.
3.Чашки выдерживают в термостате 18-24 часов при температуре 37 °С.
4.Учёт результатов проводят на 2-ой день путем измерения зон задержки роста бактерий вокруг дисков. Так, зоны диаметром до 10мм указывает на отсутствие чувствительности, до 15 – слабую, до 25 – среднюю и более 25 – высокую чувствительность исследуемого микроба к антибиотику (рис.23).
5.Оформление заключения: К каким антибиотикам чувствителен возбудитель? Какой антибиотик можно рекомендовать для лечения и почему?
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений
Данным методом определяют минимальную подавляющую (бактериостатическую) концентрацию антибиотика (МПК) - наименьшую концентрацию антибиотика, при которой не происходит размножение бактерий и содержимое пробирки остается прозрачным, и минимальную бактерицидную концентрацию антибиотика (МБК) - наименьшую концентрацию антибиотика, вызывающую полную гибель бактерий.
|
|
|
Методика.
1.В пробирки разливают жидкую питательную среду (МПБ) по 1 мл.
2.Добавляют исследуемый антибиотик в различных разведениях, например, от 1 до 128 ед/мл.
3.Каждому разведению добавляют по 1 мл исследуемой бульонной культуры бактерий.
4. Посевы инкубируют при 37°C в термостате.
5.Учет результатов:
- определение МПК по угнетению роста бактерий;
- для определения МБК дополнительно производят высевы из пробирок с отсутствием видимого роста бактерий на чашки с плотной питательной средой, не содержащей антибиотика. На чашках обозначают концентрацию антибиотика, из который сделан высев.
6. Посевы инкубируют при 37°C в термостате.
7.Определение МБК по отсутствию роста бактерий на плотной питательной среде.
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ДИСБАКТЕРИОЗА КИШЕЧНИКА
Цель. Определение состава фекальной микрофлоры : выделение чистой культуры фекальных микроорганизмов и идентификация.
|
|
|
Исследуемый материал – различные разведения фекалий в физиологическом растворе от 101 до 1011.
1-й этап.Получение изолированных колоний фекальной микрофлоры.
Ход работы.
1.Делают посевы соответствующих разведений испражнения на среды:
-для выявления анаэробных бифидобактерий необходимо делать посевы фекалий в разведениях от 106 до 1011 глубоким уколом в пробирки с полужидкой средой Блаурококка (печеночно-МПА с цистеином и лактозой);
- для выделения E.сoli - на среду Эндо (Левина),
-для выделения патогенных энтеробактерий (сальмонелл, шигелл и др.) – на среду Плоскирева,
-для выделения Proteus vulgaris - посев по Щукеевичу в конденсационную воду скошенного МПА,
-для выделения стафилококков с лецитиназной активностью – на желточно-солевой агар,
-для выделения гемолитических бактерий - на кровяной агар,
-для выделения грибов рода Кандида - на среду Сабуро и др.
2.Все посевы помещают в термостат при 37°С на 18-24 часа, Блаурококка – 48 час., за исключением среды Сабуро ( при 28-30°С на 3-5 дней).
2-й этап.Выделение чистой культуры.
Ход работы.
1. Подсчет колоний и макроскопическое описание их:
Выделение чистой культуры бифидобактерий является весьма трудоемким и практически необязательным, так как определение разведения, в котором обнаруживают бифидобактерий является вполне достаточным для оценки нормального или пониженного содержания их в фекалиях. Из посевов, в которых виден рост в виде помутнения всей среды или отдельных колоний, готовят мазки и окрашивают их по Граму. Обнаружение характерных грамположительных палочек с разветвлениями на концах в виде римской цифры V, с несколько утолщенными концами подтверждает их принадлежность к бифидобактериям (рис.24).
|
|
|
-на среде Эндо: определение общего количества E.сoli, подсчет лактозонегативных (бесцветных) и со слабовыраженными ферментативными свойствами (розывые) колоний (рис.25);
-на среде Плоскирева - бесцветных колоний патогенных энтеробактерий (сальмонелл, шигелл и др.);
-на скошенном МПА - рост Proteus vulgaris по всей поверхности;
-на желточно-солевой агаре - лецитиназная активность стафилококков проявляется в виде радужного помутнения вокруг колоний (рис.26);
-на кровяном агаре – колонии бактерий, обладающих гемолитической активностью;
-на среде Сабуро – колонии грибов рода Кандида округлой формы, выпуклые, с гладкой поверхностью, ровными краями, матового цвета. Из подозрительной колонии готовят неокрашенный препарат. При его микроскопии должны быть почкующиеся овальные клетки - псевдомицелии (почкующиеся клетки распалагаются в цепочку). Окрашиваются по Граму положительно.
2.Микроскопическое исследование колоний.
3.Пересев небольшой части колоний на скошенную среду.
4. Инкубация в термостате при 37°С в течение 18-24 часа.
3-й этап. Идентификация выделенной чистой культуры.
Ход работы.
1. Макроскопическое определение роста микробов.
2. Проверка на чистоту выделенной чистой культуры – микроскопическое исследование.
3. Окончательная идентификация по ферментативной активности путем пересева на диференциально-диагностические среды и по др. признакам.
4-й этап. Учет результатов идентификации и оформление заключения о наличие и степени дисбактериоза.
Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 471; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!