ИММУНОЛОГИЧЕКИЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ И СЕРОДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Реакция агглютинации (РА) на стекле.
РА на стекле - ориентировочная РА, наступающая в течении нескольких минут, применяется только с целью идентификации выделенной из организма больного чистой культуры бактерий по антигенной структуре.
В РА на предметном стекле, поставленной с целью идентификации возбудителя брюшного тифа по антигенной структуре участвуют 3 ингредиента:
1)выделенная чистая культура S.typhi на скошенном МПА? (корпускулярный АГ- агглютиноген);
2)диагностические видоспецифические антисыворотки с АТ-ми против S.typhi, S. paratyphi A и S. paratyphi B., полученные путем гипериммунизации кроликов соотвествующими бактериальными антигенами;
3)изотопический раствор хлорида натрия (электролит).
Паралелльно вставится три реакции на стекле:
а)1 капля физ. раствора + 1 капля диагностической сыворотки против S.typhi + бактерии со скошенного агара;
б)1 капля физ. раствора + 1 капля диагностической сыворотки против S. paratyphi A + бактерии со скошенного агара;
в)1 капля физ. раствора + 1 капля диагностической сыворотки против S. paratyphi В + бактерии со скошенного агара;
Хорошо перемешать. Наличие агглютинации (выпадение хлопьев белого цвета) указывает на присутствие соответствующего возбудителя, при отрицательной - наблюдается равномерное помутнение (рис.27). Агглютинация – это склеивание бактериальных клеток под влиянием специфических антител.
Развернутые реакции агглютинации Видаля, Вейгля и Райта
|
|
|
Агглютинация – это склеивание и выпадение в осадок микроорганизмов или других клеток(корпускулярных антигенов) под действием специфических антител в присутствии электролитов.
Развернутая РА в пробирках (объемный способ) применяется для серологической диагностики инфекционных заболеваний, то есть для определения динамики нарастания титра противомикробных антител в сыворотке крови (реакция Видаля - при брюшном тифе и паратифах, р. Вейгеля- при эпидемическом сыпном тифе, р. Райта- при бруцеллезе и др.) и для серологической идентификации микробов.
РА Видаля применяется с целью серодиагностики брюшного тифа и паратифов А и В, то есть для определения антител, и изучения динамики нарастания и сохранения антител против S.typhi, S. paratyphi A и S. paratyphi B, которые обнаруживаются в крови больного со 2-ой недели заболевания.
Компоненты реакции:
1)исследуемая сыворотка крови в разведениях от 1:100 до 1:800;
2) три диагностикума - взвеси убитых сальмонелл: S.typhi, S. paratyphi A и S. paratyphi В;
3) изотопический раствор хлорида натрия (электролит).
Реакция ставится в три ряда пробирок по 5 пробирок в каждом ряду, из которых 4 опытных и одна контрольная (физ.раствор+диагностикум).
|
|
|
Реакцию инкубируют:
1) в термостате в течение 2 часов при 37°С, при этом образуются крупнохлопчатый осадок за счет жгутикового Н-антигена;
2) при комнатной температуре в течение 18-24 часов, выпадает мелкозернистый осадок за счет соматического О-АГ.
Механизм реакции. Реакция протекает в две фазы:
1) соединение АГ с АТ (специфическая фаза);
2) выпадение образовавшегося комплекса АГ-АТ (агглютината) в растворе солей (электролите) в осадок (неспецифическая фаза).
Антигены поливалентны, а антитела двух – (IgG) или более валентны (IgМ). Соединение их приводит к образованию макроконгломератов, выпадающих в осадок.
При учёте реакции сначала просматривают контрольную пробирку. В ней при лёгком встряхивании наблюдается равномерное помутнение, хлопьев не должно быть. Опытные пробирки просматривают одновременно с контрольной, держа в одной руке и встряхивая. При положительной реакции обнаруживаются хлопья из склеенных бактерий. Учитывают максимальное разведение сыворотки, при котором произошла отчетливая агглютинация (титр сыворотки). Диагностический титр равен 1:200, то есть реакция считается положительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки 1:200 и более (рис.28).
|
|
|
Недостатки реакции:
1) реакция положительна начиная со 2-ой недели заболевания;
2) реакция положительна в 3-х случаях: у больных («инфекционная» реакция), у переболевших («анамнестическая») и у вакцинированных («прививочная»).
Для дифференциации реакций прибегают к повторной постановке ее через 5-6 дней. У больных отмечается нарастание титра антител в 4 и более раза. При «прививочной» и «анамнестической» реакциях титр антител не изменится;
3) реакция может быть группоспецифической - положительной с двумя или тремя антигенами. При групповой агглютинации учет реакции проводится по максимальному титру антител.
Реакцию Видаля можно поставить одновременно с Н- и О-антигенами бактерий брюшного тифа, что помогает дифференцировать «инфекционную» от «прививочной», так как у привитых и переболевших обнаруживаются только Н-антитела, О- агглютинин в высоком титре отмечается только в разгар болезни.
РА Вейгеляставится с диангостикумомRicketsia prowazekii (взвесь убитых риккетсий), РА Райта – с бруцеллезным диагностикумом (взвесь убитых бруцелл: B. melitensis, B. abortus и B. suis).
Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 542; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!