ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО МИКРОБНОГО ЧИСЛА (МЕТОД КОХА) И САНИТАРНО - ПОКАЗАТЕЛЬНЫХ МИКРОБОВ ВОЗДУХА
Для оценки санитарно-бактериологического состояния воздуха определяют следующих показателей: микробного числа воздуха (количество микробов в в 1м3 воздуха) методами осаждения по Коху и аспирации по Кротову, наличие зеленящего стрептококка путем посева воздуха на кровяной агар с добавлением генцианового фиолетового (среда Гарро), для обнаружения S. aureus – на желточно-солевой агар, для обнаружения других патогенных бактерий – соответствующие элективные питательные среды.
Определение микробного числа воздуха методом Коха проводится в 2 этапа:
1 этап. Отбор пробы воздуха. Стерильные чашки Петри с МПА открывают в месте отбора проб воздуха и выдерживают в течение 10 мин, после чего закрывают и инкубируют при 370С в течение 48 часов.
2 этап. Учет результатов. По количеству выросших колоний подсчитывают микробное число воздуха, пользуясь формулой Омелянского, в соответствии с которым считают, что на поверхность питательной среды площадью 100см2 в течение 5 мин оседает столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 л воздуха:
Х – количество микробов в 1м3 воздуха
X = 
а – число колоний, выросших на чашке
в – площадь чашки Петри, равная ПR 2
Метод Кротова является более точным методом определения микробного числа воздуха с помощью специального прибора.
БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД И МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ПО ВИРУЛЕНТНОСТИ
|
|
|
Заражение экспериментальных животных
Биологический метод)
Заражение экспериментальных животных может производиться в целях:
1) идентификации микроорганизмов по вирулентности;
2) выделения чистой культуры возбудителя из различных материалов и ее идентификации;
3) воспроизведения и изучения инфекционного процесса;
4) испытания лечебного эффекта химиотерапевтических и иммунологических препаратов.
5) получения иммунобиологических лечебно-профилактических и диагностических препаратов и др.
В зависимости от цели исследования заражают различных животных (кроликов, морских свинок, белых мышей, белых крыс и др.) различными способами: накожно, внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутривенно, перорально, интраназально, внутритрахеально, интрацеребрально и внутрибрюшинно.
Внутрибрюшинное заражение белых мышейс целью:
1) идентификации выделенной чистой культуры S.aureus по вирулентности;
2) установления формы инфекции по происхождению, локализации, длительности течениия, количеству возбудителя и др.
План работы первого этапа:
1. Суточную агаровую культуру S.aureus проверяют на чистоту
(готовят мазок и окрашивают по Граму).
|
|
|
2. Стерильным физ. раствором смывают культуру и готовят микробную взвесь соответствующей оптическому стандарту мутности (1мл – 1 мрд.мкр.тел)
3. Взвесь микробов (0,5 мл) набирают в шприц.
4. Заражают внутрибрюшинно белую мышь. Берут мышь левой рукой за хвост, фиксируют её в растянутом состоянии брюшком верх, головой вниз, чтобы кишечник переместился к диафрагме. В левой нижней трети живота делают прокол кожи под острым углом, затем устанавливают шприц под прямым углом, толчкообразным движением прокалывают брюшину и вводят содержимое шприца.
5. Зараженных животных маркируют и отправляют в лабораторию. Инструменты до и после заражения стерилизуют кипячением.
Второй этап. Вскрытие трупа с целью обнаружения возбудителя и идентификации путем микроскопического исследования и выделения чистой культуры.
План исследования:
Мышь фиксируют брюшком вверх в специальной подставке. Шерсть и кожу обрабатывают спиртом.
1.Макроскопическое исследование. Тщательно осматривают наружные покровы. Затем делают разрез кожи по прямой линии от нижней челюсти до лобка и боковые разрезы к лапкам. Отсепаровывают кожу в обе стороны от разреза. Отметить состояние подкожной клетчатки и лимфатических узлов. Обращают внимание на внешний вид лёгких, сердца. Осмотреть органы брюшной полости, характер экссудата, величину, цвет и консистенцию печени и селезенки.
|
|
|
2. Микроскопическое исследование. Приготовить следующие мазки и окрасить их методом Грама::
а) мазок из крови сердца;
б) мазок-отпечаток легкого;
в) мазок из асцитической жидкости (экссудата);
г) мазок- отпечаток печени;
д) мазок- отпечаток селезенки.
При микроскопии отмечают присутствие микроба-возбудителя в различных органах и тканях и по результатам исследования мазков оформить предварительное заключение.
3.Бактериалогические исследование. Параллельно с приготовлением мазков сделать посевы из тех же органов на 5 пробирок с МПБ:
а) для посева крови из сердца участок его поверхности прижигают раскалённым скальпелем и через прижжённый участок вводят капилляр стерильной пастеровской пипетки в полость сердца. Затем каплю крови из пипетки выдувают в пробирку с МПБ и на предметное стекло для приготовления мазка (мазок фиксируют спиртом в течение 3-5 минут);
б) из ткани лёгкого делают посев кусочка ткани в МПБ и приготовляют мазок – отпечаток;
в) разрезают брюшную стенку ножницами от диафрагмы до лобка. Обращают внимание на наличие экссудата, который собирают пастеровской пипеткой и засевают в МПБ. Каплю экссудата наносят на предметное стекло для окрашивания. Для приготовления мазков-отпечатков вырезают из печени, селезенки небольшие кусочки ткани, берут их пинцетом и прикасаются к предметному стеклу поверхностью разреза. Мазки-отпечатки фиксируют термическим способом;
|
|
|
г) результат посевов учитывают на следующий день после инкубации в термостате. Труп животного после вскрытия подлежит уничтожению;
д) учесть результаты посевов на питательных средах и оформить окончательное заключение (ответить на вопросы: 1.Вирулентна ли культура S.aureus? 2.Какие факторы вирулентности S.aureus Вы обнаружили? 3.От какой формы инфекции погибла мышь?).
Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 3322; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!