Экспериментальная работа.
Опыт 1. Количественное определение общего белка в сыворотке крови.
В плазме крови содержится до 200 различных белковых компонентов. Большая часть выполняемой функции крови, так или иначе, связана с белками плазмы: поддержание онкотического давления, участие в процессах свертывания крови, регуляции рН крови, выполнение транспортной и защитной функции, функции «белкового резерва» и др. Качественное и количественное постоянство белкового состава крови четко поддерживается организмом, и любые изменения в этой системе, как правило, являются отражением нарушенного функционирования тех или органов и тканей.
Приборы. 1. Штатив с пробирками.
2. Набор пипеток.
3. Центрифуга.
4.Центрифужные пробирки.
5. Водяная баня.
6. ФЭК.
7. Кюветы, 10 мм.
Реактивы. 1. Сыворотка крови.
2. Трихлоруксусная кислота, 3%-ный раствор в этаноле.
3. Биуретовый реактив.
4. Хлорид натрия, 0,85%-ный раствор.
а) Определение концентрации альбуминов.
1. В центрифужную пробирку поместите 1,5 мл 3%-ной трихлоруксусной кислоты в этаноле.
2. Добавьте 0,5 мл сыворотки крови, тщательно перемешайте и через 10 мин центрифугируйте.
3. 0,2 мл центрифугата перенесите в пробирку, содержащую 2,3 мл 0,85%-ного раствора хлорида натрия и добавьте 2,5 мл биуретового реактива.
4. Тщательно перемешайте и выдержите 20 мин в термостате при 37°С.
5. Измерьте оптическую плотность при зеленом светофильтре (540-560 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм.
|
|
б) Определение концентрации общего белка.
1. 0,1 мл сыворотки крови внесите в пробирку, содержащую 2,4 мл 0,85% раствора хлористого натрия.
2. Прибавьте 2,5 мл биуретового реактива.
3. Перемешайте, термостатируйте 30 мин при 37оС, измерьте оптическую плотность так же, как и при определении альбуминов.
Концентрацию альбуминов и общего белка определите по калибровочному графику.
Для определения концентрации альбуминов полученные по стандартному графику значения следует умножить на 2, т.к. в ходе подготовки реакции сыворотка крови была разбавлена в два раза больше, чем при определении общего белка.
Сравните полученные значения с нормальными величинами. О чем свидетельствует снижение (повышение) уровня белка в сыворотке крови у животных? К каким последствия может привести недостаточность альбумина в крови?
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 29; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!