Контроль готовой культуры плесневых грибов

Отбирают среднюю пробу поверхностной культуры и в ней определяют влажность, содержание сбраживае­мых углеводов и активность ферментов — амилолитических и протеолитических.

 

Определение сбраживаемых углеводов в поверхностной культуре плесневых грибов

В культуре содержится около 15% сбраживаемых углеводов от введенных с отрубями. Поверхностная культура, полученная при выращивании различных штаммов плесневых грибов, содержит от 1,80 до 3,50% углеводов от массы культуры.

Для анализа из средней пробы культуры берут на­веску 4 г, переводят ее в мерную колбу на 200 мл, добавляют 100 мл 0,4%-кого раствора серной кислоты, проводят гидролиз, как это было описано выше, при анализе отрубей. От разбавленного фильтрата отбирают 10—20 мл в мерную колбу на 100 мл, осветляют, дово­дят объем раствора до метки и определяют углеводы колориметрическим антроновым методом. Расчет ведут по уравнению

 

С_сбу.=                                      

где: 18,9 — постоянный коэффициент, полученный экспериментальным путем;

D ₁ — оптическая плотность, полученная с оранжевым светофильтром;

D ₂ — оптическая плотность, полученная с синим светофильтром;

n – коэффициент разведения.

.

Пример. На анализ взята навеска 4 г поверхностной культуры гриба Asp. oryzae влажностью 12%. Из разбавленного раствора отобрано 15 мл и после колориметрической реакции с антроном получены значения оптической плотности D₁ = 0,870 и D₂=0,490.

 

С_сбу.= =2,394%

В готовой глубинной культуре также определяют сбраживаемые углеводы колориметрическим антроно­вым методом.

Пример.Фильтрат глубинной культуры разбавлен в 50 раз. Пос­ле реакции с антроном получены оптические плотности D₁ = 0,720, D₂=0,370.

 

С_сбу.= ,= 0,331 г/100 мл.

 

Определение ферментативной, активности

Ферментативную активность плесневых грибов ха­рактеризуют амилолитическая, декстринолитическая, глюкоамилазная и протеолитическая активность.

Амилолитическую активность культур плесневых грибов определяют колориметрическим, йодометрическим методом, как и в солоде.

Для анализа поверхностной культуры из средней пробы отбирают две навески; для определения влажности и амилолитической активности.

Для определения АС берут 5 г воздушно-сухой или 10 г сырой культуры, тщательно растирают с кварцевым песком или толченым стеклом в фарфоровой ступке и количественно переводят в стакан или коническую кол­бу, добавив 10 мл ацетатного буферного раствора с рН 4,7 и 90 мл дистиллированной воды. Смесь выдер­живают в течение часа в термостате при 30° С, периоди­чески перемешивая. Затем раствор отфильтровывают и фильтрат используют в качестве основного раствора для приготовления рабочего раствора фермента, как описа­но при определении ферментативной активности солода. Ориентировочный расход основного раствора на приготовление рабочего раствора фермента нужной концентрации определяют по табл. 4.

 

Таблица 4 Приготовление рабочих растворов

(основной раствор содержит воздушно-сухой культуры 5 г/100 мл)

 

Предполагаемая активность куль­туры, ед./г	Масса культуры в рабочем растворе п, мг/5 мл	Расход основного раствора на при­готовление рабоче­го раствора, мл	Общий объем разбавленного раствора, мл
5—15 16—50 51—100 101—200	37,5 10 2,5 1,25	15 4 1 1	100 100 100 200

 

При анализе глубинной культуры отделяют мицелий фильтрацией и фильтрат используют для при­готовления рабочего раствора фермента.

Для этого берут от 1 до 5 мл фильтрата (в зависи­мости от предполагаемой активности культуры) и раз­водят дистиллированной водой в мерной колбе на 100 мл. С рабочим раствором проводят ферментативную реакцию гидролиза крахмала в указанных выше усло­виях и проводят определение, как это описано для соло­да.

Активность определяют по числу единиц, содержа­щихся в 1 г поверхностной или в 100 мл глубинной культуры. Расчет ведут по уравнениям:

для поверхностной культуры

 

АС=

 

для глубинной культуры

АС=

 

где n ₂— число миллилитров глубинной культуры, взятое на анализ.

Пример.Для анализа взято 10 г поверхностной культуры Asp. oryzae. Предполагаемая активность (штамм гриба высокоэффек­тивен по амилазе) лежит в пределах 160—200 ед./г. По табл. 15 находим количество раствора, которое необходимо взять. Для вто­ричного разбавления— 1 мл/200 мл. В таком случае n=2,5 мг.

При колориметрйровашш получаем значения оптической плот­ности

D₁=0,750 и D₂=0,423.

Количество прогидролизованного крахмала

 

C= =0,04361 г

Амилолитическая активность культуры составит

АС= =111,6 ед/г.

 

Осахаривающую активность (метод ВНИИПрБ) культур грибов определяют с применением колоримет­рического антронового метода по прописи, приведенной для анализа солодов. Определение можно вести в той же реакционной среде, которую приготовили для определения АС.

Осахаривающую активность ОС культур грибов по полученной оптической плотности определяют по урав­нению

 

ОС=

 

где D — оптическая плотность раствора;

п — масса культуры, взятой на ферментативную реакцию, мг.

 

Пример. На анализ взята поверхностная культура гриба Asp.oryzae n=2,5мг. После реакции получен раствор с оптической плот­ностью D =0,450.

Осахаривающай активность составит

 

ОС= = 25,85 ед./г.

 

---

Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 76; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!