Глава 23. ПАТОГЕННЫЕ ХЛАМИДИИ

История изучения хламидийных инфекций берет свое начало с конца XIX века, когда была установле­на взаимосвязь между своеобразно протекающей пневмонией человека и болезнями попугаев, завезен­ных из тропических стран. Роль попугаев в заражении и заболевании людей окончательно была установлена в 1892 г. во время вспышки болезни у людей, имевших контакт с попугаями, завезенными из Буэнос-Айреса. Morang (1895) предложил заболевание, возникшее при контакте с попугаями, именовать пситтакозом.

Интерес к изучению пситтакоза возрос после его пандемии в 1929–1930 гг. Пандемия прекратилась после установления жестких правил ввоза попугаев из тропических стран. В период этой пандемии Levintal (1930) удалось выявить мелкие сферические базофильные тельца в тканях больных птиц. Coles (1930) и Lilli (1930) почти одновременно обнаружили такие же тельца в ретикулоэндотелиальных клетках из ма­териала, взятого от инфицированных людей и птиц. Thygezon (1934) показал сходство цикла развития возбудителей псит­такоза, трахомы, конъюнктивита с включениями в конъюнктивальных клетках.

Haagen и Maurer (1938) выявили, что птицы, не принадлежащие к семейству попугаев, являются ре­зервуаром инфекции и источником заражения челове­ка возбудителем пситтакоза. Этот факт вызвал вторую волну повышенного научного интереса к этой группе микроорганизмов.

Первое естественное заражение других млекопита­ющих, кроме человека, возбудителями пситтакоза бы­ло отмечено McNutt (1940). Он показал, что эти воз­будители вызывают энцефалит у крупного рогатого скота.

За последние четыре десятилетия была определена этиологическая роль хламидий при многих спонтанных инфекциях разных видов домашних и диких живот­ных. Выяснилось, что хламидии поражают человека и многие виды животных, вызывая разнообразные по патогенезу и клиническому течению болезни, напри­мер пневмонии, аборты, энтериты, менингоэнцефалиты, конъюнктивиты, полиартриты и др. При этом один и тот же возбудитель может вызывать как острое за­болевание, так и латентную инфекцию с длительным носительством.

В 1936 г. Грейг впервые описал случаи энзоотиче­ского аборта овец в Шотландии. Stamp (1950) из влагалищной слизи абортировавшей овцы удалось выделить возбудителя, используя куриные эмбрионы.

Кроме абортов, хламидии вызывают пневмонии у овец и коз. Хламидиозную этиологию этой патологии впервые установил в 1952 г. Meketchet в США. В по­следующем наличие пневмоний хламидиозной этиоло­гии было выявлено в Японии, Франции, Австралии, Англии, Болгарии и других странах.

Американские исследователи York и Baker в 1951 г. впервые обнаружили хламидий в фекалиях клиничес­ки здоровых телят. Они же установили латентное те­чение бронхопневмонии телят хламидиозной природы. Этиологическую роль хламидий при энтерите молодняка крупного рогатого скота доказали X. 3. Гаффаров (1976) и И.А. Курбанова (1980).

Энзоотический аборт коров в Калифорнии впервые описали Traut и Hart еще в 1923 г. Хламидиозную этиологию абортов коров в ФРГ Schoon и Kauker выяснили в 1956 г., применяя серологические и ци­тологические исследования.

По мере накопления фактов и с учетом вклада отдельных исследователей в выяснение роли хламидий в патологии человека, птиц и животных предлагались разные термины для их обозначения. Первоначально Гальберштедер и Провачек (1907) для возбудителей хламидиозных инфекций предложили номенклатурное название «chlamydozoon». В то время эти исследова­тели считали, что включения при трахоме образуются в результате внедрения в клетку элементарных телец, которые затем обволакиваются, как мантией, вещест­вом, продуцируемым клеткой. На этом основании вну­триклеточные образования и были названы ими «хламидозы» (chlamydia – мантия и zoon – животное).

В группу хламидии включены возбудители разных болезней человека и животных, обладающие общими антигенными свойствами и сходные по морфологии и ряду биологических свойств.

Попытки определения места хламидий в системе микроорганизмов на основе известных таксономичес­ких критериев встречают большие затруднения. На основании фильтруемости через фильтры, задержива­ющие бактерии, облигатного внутриклеточного пара­зитизма и способности образовывать внутриклеточные включения хламидии в течение ряда лет были вклю­чены в группу «атипичных» крупных вирусов пситтакоза-лимфогранулемы-трахомы. Однако по целому ряду свойств они сходны с риккетсиями:

1) имеют оболочку; 2) содержат как ДНК, так и РНК; 3) в клеточной стенке присутствует мурамовая кислота; 4) размножа­ются путем двойного деления, по крайней мере в ка­кой-то стадии; 5) чувствительны к сульфаниламидный препаратам, пенициллину и антибиотикам тетрациклинового ряда, что, возможно, обусловлено присутстви­ем в них фолиевой кислоты; 6) грамотрицательны, хо­рошо окрашиваются по методам Кастанедо и Маккиавелло, имеют характерный цвет и расположение.

Видимо, на основании перечисленных признаков в «Руководстве Берги по определению бактерий» в официальной номенклатуре бактерий, выработанной в соответствии с Международным кодексом номенклатуры бактерий хламидии отнесены к облигатным внутриклеточно развивающимся организмам.

Следует указать на то, что между хламидиями и риккетсиями имеются отличительные признаки. Например, риккетсии развиваются более интенсивно в клетке с пони­женным обменом, в то время как для репродукции хламидий необходима клетка с высоким уровнем ме­таболизма. В отличие от риккетсий и бактерий у хламидий не выявлены соб­ственный энергетический метаболизм и система переноса электронов. Все формы развития риккетсий являются инфекци­онными, тогда как у хламидий инфекционностью об­ладают только элементарные тельца, а промежуточная форма развития (ретикулярные тельца) неинфекционна. Хла­мидии относятся к семейству Chlamydiaceae, роду Chlamydia.

Морфология. При размножении хламидий появля­ются инициальные тельца как промежуточная стадия развития, а затем мелкие элементарные тельца. Эле­ментарные и инициальные тельца различаются по ин­фекционной активности, размерам и плотности.

Диаметр очищенных элементарных телец колеблется между 200 и 400 нм. Элементарные тельца имеют сферическую форму, электронно-непрозрачную центральную массу и менее электронно-плотную плоскую периферическую структуру. Внутренний материал элементарных частиц, образующий нуклеоид, плотный и кажется отошедшим от ограничивающей мембраны. Нуклеоид гомогенен и расположен эксцентрически, иногда он имеет вид плотно упакованного пучка волокон. Остальной участок телец состоит из плотного вещества, содержащего рибосомы.

Крупные промежуточные неинфекционные формы хламидий называются ретикулярными тельцами и достигают размеров 500–1000 нм. Ретикулярные тельца имеют вид частиц диаметром до 1600 нм. В тонких срезах ретикулярные тельца имеют неправильную или круг­лую форму. Внутренняя часть ретикулярных телец умеренно плотная и напоминает сетку.

Химический состав. Оболочка примерно на 35 % состоит из бел­ков, причем присутствуют почти все амино­кислоты, кроме аргинина и гистидина. Фосфолипиды в виде лецитина и нейтральных жиров составляют 35–40 % сухой мас­сы хламидий. Углеводов в составе хламидий немного, богаты эти микроорганизмы гексозамином. Оболочка хла­мидий содержит мурамовую кислоту, что делает ее чув­ствительной к действию пенициллина.

Содержание ДНК в составе хламидий постоянное, а РНК меняется в зависимости от стадии развития хламидий и метода приготовления суспензии очищенных хламидий. В инфекционных частицах хламидий три типа РНК, величина седиментации которых равняется 21, 16 и 4S.

Размножение. При изучении адсорбции и проникновения хламидий в клетки наблюдали, что элементарные тельца хламидий находятся в контакте с оболочкой клетки. На месте прикрепления хламидий в оболочке клетки образуется впячивание, хламидии остаются в таких впячиваниях и сохраняют свою целостность. Клетка-хозяин постепенно поглощает их. Через 2–5 ч. они находятся в цитоплазме клеток на различной глубине. Адсорбция хламидий клетками не зависит от температуры и от колебаний рН в пределах от 6 до 8. Для максимальной адсорбции необходимо наличие в среде Са++ и Mg++. В хорошо адаптированных системах «хламидии – клетка – хозяин» адсорбция и размножение протекают быстро и эффективно.

Инфекционные частицы хламидий сохраняют свою инфекционность в цитоплазменных вакуолях, в них мелкие элементарные тельца хламидий превращаются в крупные ретикулярные (сетчатые) формы до 800 нм в диаметре. Ретикулярные формы не являются инфекционными, растут и размножаются бинарным способом деления. Ретикулярные формы хламидий очень неустойчивы, быстро разрушаются в процессе фиксирования, что затрудняет объяснение морфологических различий при репликации хламидий. Однако использование усовершенствованных методов фиксирования позволило наблюдать процесс деления ретикулярных форм: перетяжка при делении напоминает процесс простого отщепления.

На втором этапе реорганизации, включающем промежуточные формы, образуются малые уплотненные центры – тельца хламидий. Мелкие формы из круп­ных образуются несинхронно, поэтому одно и то же включение содержит частицы, находящиеся на разных стадиях созревания. Эти размножающиеся формы хламидий, собираясь в микроколонии, внедряются в матрикс, образуя цитоплазматические включения. Включения имеют круглую сферическую форму, диаметр их составляет несколько микрометров, и, наконец, включения распадаются, высвобождая сотни элементарных телец.

Элементарные тельца хламидий являются инфекционными, высокорезистентными во внеклеточной среде и при выходе из цитоплазматических включений могут заражать другие клетки хозяина.

Инфекционность их сохраняется в течение 2–3 дней в водопроводной воде, в воде плавательных бассейнов при комнатной температуре. Хламидии очень чувствительны к повышенным температурам. При хранении при 43 °С птичьи штаммы хламидий в течение суток теряли инфекционность до 100 %. Изолят хламидий в виде 20 %-ной взвеси тканей индеек инактивировался менее чем за 5 мин. при нагревании до 56 °С. Оптимальная концентрация водородных ионов для хламидий равна 7–7,4. Хламидии легко инактивируются при высоких или очень низких значениях рН, а также при контак­те с 0,1 %-м раствором формалина, 0,5 %-м раст­вором фенола и 2 %-м раствором хло­рамина.

При работе с хламидиями, особенно при их куль­тивировании в культурах клеток, важно знать отно­шение хламидий к антибиотикам. Некоторые антибио­тики не влияют на инфекционность и размножение хламидий. При выделении хламидий из патологичес­кого материала и вообще при работе с хламидиями их можно использовать для подавления развития бакте­рий. Стрептомицин, канамицин и микостатин тормозят развитие большого числа бактерий, не влияя при этом на размножение хлами­дий. Для обработки материала, содержащего хламидий, стрептомицин применяют в дозе 500 мкг и выше на 1 мл растворителя. Доза стрептомицина даже выше 10 000 мкг/мл не влияет на инфекционность хламидий. Микостатин в дозе 500 ЕД/эмбрион не влияет на хламидий, при дозе 2000 ЕД/эмбрион вызывает незначительное снижение инфекционности хламидий.

Хламидии в различной степени чувствительны к пенициллину. Под его воздействием в желточном мешке куриного эмбриона развиваются крупные, неправильной формы элементарные тельца хламидий. При удалении пенициллина эти тельца вновь приобретали обычную форму. Пенициллин нарушает развитие промежуточных и малых форм хламидий. Увеличение инфекционности не наблюдали в культурах, когда пенициллин вводили в течение 15 ч. после заражения. Введение его по истечении 15 ч. после заражения не влияло на инфекционность. Хорошими ингибиторами размножения хламидий являются антибиотики тетрациклинового ряда и хлорамфеникол. Тетрациклин останавливает репликацию хламидий на ранней стадии развития. На основании этого тетра­циклин применяют при лечении хламидиозов.

Антигенная структура. Известны два типа основных антигенов хламидий: группоспецифический и видоспецифический. Первый является общим для всех возбудителей рода хламидий, выделяется посредством реакций связывания комплемента, непрямого связывания комплемента, агглютинации, гемагглютинации, преципитации в геле, иммунофлуоресценции и внутрикожных тестов. Он строго связан с хламидиями, вероятнее всего, расположен внутри клеточной стенки. Выявляется на протяжении всего цикла развития, однако наибольшее количество его обнаружи­вается за несколько часов до наступления пика инфекционности.

Основным свойством группоспецифического антигена является его термостабильность. Он выдерживает кипячение и автоклавирование (135 °С). На этом принципе основано получение диагностического антигена кипячением неочищенных или частично очищенных суспензий хламидий и экстрагированием дезоксихолатом натрия, кислотой, щелочью, эфиром, водой.

Группоспецифический антиген имеет в своем составе углеводную фракцию. Его липидная фракция растворима в эфире и других жирорастворителях. Группоспецифический антиген устойчив к протеолитическим ферментам, что свидетельствует об отсутствии или незначительном ко­личестве белка в его составе.

Видоспецифический антиген хламидий выявляется в реакциях нейтрализации инфекционности, токсично­сти, непрямой гемагглютинации, преципитации и свя­зывания комплемента. Отличается термолабильностью и устойчивостью к действию лецитиназы, фенола, кис­лот и папаина. Тесно связан с клеточной стенкой хла­мидий. Видоспецифи­ческий антиген клеточной стенки способен абсорбиро­вать токсин-нейтрализующие и инфекционно-нейтрализующие антитела из гипериммунных сывороток.

Кроме названных двух антигенов, в оболочке час­тиц хламидий обнаружены антигены, специфические для возбудителя инфекции. Показано, что хламидии, выделенные при энзо­отическом аборте овец, отличаются в антигенном от­ношении от хламидий овечьей пневмонии и от возбудителя полиартрита.

Патогенность хламидий для куриных эмбрионов, лабораторных животных и культур клеток. К зараже­нию хламидиями восприимчивы куриные эмбрионы, белые мыши, морские свинки, в меньшей степени кролики, белые крысы и хомяки.

Все известные штаммы хламидий одинаково хоро­шо размножаются в энтодермальных клетках желточ­ной оболочки 6–8-дневного куриного эмбриона. Срок гибели куриных эмбрионов после заражения в желточный мешок име­ет обратную линейную зависимость от концентрации хламидий.

У куриных эмбрионов хламидий вызывают доста­точно типичные патологические изменения: утончение желточных оболочек; глубокое расположение крове­носных сосудов; уменьшение количества трофобластных ворсинок в желточных мешках; желток более жидкий и ярко-желтого цвета. У павших эмбрионов конечности синюшные, могут наблюдаться подкожные кровоизлияния.

Заражение куриных эмбрионов в желточный ме­шок– лучший метод выделения хламидий из проб па­тологического материала от рогатого скота, свиней и морских свинок, поскольку эти хламидии, как прави­ло, малопатогенны для белых мышей.

Куриные эмбрионы можно заражать хламидиями на хорион-аллантоисную оболочку (ХАО). Хламидии различного происхождения отличаются по своей способности размножаться на ХАО куриного эм­бриона. Многие из них размножаются плохо и только после адаптации. Штаммы хламидий от птиц и от мле­копитающих, особенно вызывающие аборты, успешно развиваются на ХАО. Гибель куриных эмбрионов нере­гулярна. Хламидии на ХАО вызывают образование не­больших непрозрачных поражений, похожих на оспен­ные, и отеки ХАО.

Из лабораторных животных наиболее чувствитель­ны к хламидиям белые мыши, которых используют в качестве модели для диагностики инфекции, выделе­ния и изучения хламидий. Чаще всего их заражают в нос. Этот метод инокуляции часто дает отрицательные результаты, однако почти все штаммы хламидий патогенны для мышей при введении материала, размноженного в желточном мешке куриных эмбрионов. Через несколько дней после введения хламидий из желточного мешка у мышей развивается типичное поражение легких. При заражении высоковирулентными штаммами животные гибнут на 3–7-й день, при заражении менее вирулентными штаммами они могут погибнуть на 8–14-й день, но могут выжить и остаться латентно зараженными. Если мышь не погибает пос­ле интраназального заражения, через 7 дней в легких появляются признаки поражения – сероватые, четко очерченные центры уплотнения у корня или на других участках легких.

Используя мышей в экспериментальной работе, не­обходимо помнить, что у них может наблюдаться самостоятельный хламидиоз, протекающий в латентной форме. Для выделения хламидий из проб от крупного рогатого скота, овец и коз используют внутрибрюшинное заражение морских свинок. У последних развивается тяжелый фибринозный перитонит с высокой температурой, слабостью, истощением; гибель наступала через 7–14 дней. При вскрытии отмечается увеличение селезен­ки, печени, очаги уплотнения в легких, сероватый налет на внутренних органах, в фибринозном экссудате – массу элементарных телец хламидий.

Хламидии легко адаптируются и размножаются в культурах клеток. Единственная пригодная для размножения хламидий в суспензии клеток и дающая много хламидий на специфических стадиях развития – это система L-клеток. В большинстве сообщений говорится о том, что клетки культуры содержат включения хламидий, но не приводятся данные о репродуктивности таких инфекций, об инфекционности штаммов и о поведении хламидий при серийном пассировании.

Использование культур клеток позволяет выяснить многие вопросы взаимосвязи хламидий, хозяина и клетки: цикл развития хламидий, свойства хламидий на разных стадиях развития, биологию паразитизма, механизм действия антибиотиков, антиметаболитов, латентные хламидийные инфекции. Некоторые штаммы хламидий вызывают цитопатический эффект (ЦПЭ) или бляшкообразование. Если хламидийная инфекция не приводит к ЦПЭ, то можно подсчитать количество клеток с включениями хламидий при окрашивании монослоя клеток по Романовскому – Гимзе, Стэмпу, акридином оранжевым или флуоресцирующими антителами.

Культуры клеток до настоящего времени не нашли широкого применения для выделения хламидий из диагностического материала.

Интерфероногенность и интерфероночувствительность хламидий. Поскольку хламидии облигатные внутриклеточные паразиты, представляют интерес способность хламидий вызывать образование интерферона, а также чувствительность их к нему. Установлено образование интерферона в инфицированных клетках при внутривенном заражении мышей. Интерферон, полученный в клетках мышей к хламидиям, активен против вируса везикулярного стоматита, полученный в клетках HeLa – против полиовируса. Интерферон специфичен для клеток хозяина. Индуцированный хламидиями, он чувствителен к трипсину, стабилен при рН2–9, лабилен при рН 11. Молекулярная масса его при хроматографии на сефадексе G-200 составляет 50–10³ дальтон.

23.

Возбудитель орнитоза

Орнитоз, хламидиоз (Ornithosis), – инфекционная бо­лезнь птиц, опасная для человека и протекающая с признака­ми поражения органов дыхания.

Возбудитель – Chlamydia psittaci из семейства хламидий.

Патогенность. Болеют чаще попугаи и голуби, являющиеся спонтанными носителями этого микроба. Воспри­имчивы также многие виды диких птиц (более 100), а из сель­скохозяйственных– утки, куры, индейки, фазаны, гуси, причем наиболее восприимчив молодняк. Основной источник возбуди­теля – больные и переболевшие птицы, выделяющие хламидий с носовым истечением и пометом (носительство возбудителя – до 4 мес). Заражение происходит респираторным путем, реже алиментарным – при склевывании инфицированного корма и приеме воды. Орнитоз иногда протекает в ассоциации с микоплазмозом у кур и сальмонеллезом у уток.

Устойчивость. Возбудитель погибает при нагревании до 70 °С за 10 мин, сохраняется в воде не более 17 дней, в помете – 4 мес. Низкие температуры консервируют хламидий, и они сохраняются годами. К химическим веществам возбудитель неустойчив. Лучшие дезинфицирующие средства – 3 %-ный раствор хлорами­на, 5 %-ный осветленный раствор хлорной извести.

Иммунитет. После переболевания орнитозом возникает непродолжительный иммунитет. Однако средства специфической профилактики пока не разработаны.

Патогенез. Возбудитель, попав в органы дыхания птицы, размножается в них, затем проникает в кровь и разносится по всему организму, вызывая септицемию. При алиментарном за­ражении обычно развивается бессимптомная инфекция.

Клинические признаки. Инкубационный период при естест­венном заражении 1–4 мес. Симптомокомплекс орнитоза у разных видов птиц неодинаков. Наиболее отчетлива клиниче­ская картина болезни у голубей. Отмечают ринит, серозный конъюнктивит, нередко бронхит. У многих птиц возникает по­нос, а иногда и параличи ног и крыльев. У голубей орнитоз может протекать остро и хронически. У кур и уток чаще бы­вает бессимптомное течение инфекции, но у молодняка, особен­но у утят, нередко выявляют те же клинические признаки бо­лезни, что и у голубей.

Патологоанатомические изменения. Наиболее характерны увеличение печени и селезенки с очагами некроза в них, отло­жение серозно-фибринозного экссудата на стенках воздухоносных мешков и перикарде, катаральное воспаление слизистых оболочек верхних дыхательных путей, иногда – пневмония. У голубей, кроме того, можно обнаружить энтерит.

Диагноз. В большинстве случаев вопрос об установлении орнитоза у птиц возникает в связи с заболеванием людей. Кроме эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных, при подозрении на орнитоз учитывают результа­ты биопробы, постановки РДСК. Для быстрой диагностики обычно прибегают к просмотру мазков-отпечатков из органов или экссудата со слизистых оболочек верхних дыхательных пу­тей, воздухоносных мешков и конъюнктивы (обнаружение эле­ментарных телец).

Для прижизненной диагностики орнитоза у птиц используют также аллерген, предложенный для аллергической диагностики орнитоза у людей.

---

Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 335; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!