Характеристика объектов исследования
Объектами данного исследования являются препараты линии Aquashine, предназначенные для подкожного введения. Всего в работе использовались три представителя данной линии: Aquashine, Aquashine Br, Aquashine BTX.
Aquashine – первый из препаратов данной серии, разработанный компанией Caregen (Korea). Предназначен для подкожного введения в возрасте от 35 лет с целью исправления внешних деффектов кожи. В его состав входят следующие компоненты:
· Октапептид-11 (CG-Seperin);
· Нонапептид-18 (CG-Formade);
· Олигопептид-34 (CG-TGP2);
· Олигопептид-24 (CG-EDP3);
· Олигопептид-72 (CG-boostrin);
· Ацетил декапептид-3 (Rejuline);
· Гиалуроновая кислота 1,5% (15 мг/мл);
· 24 аминокислоты;
· 14 витаминов (A, B6, E, B1, B7, B8, B2, K, I, B3, B12, B9, B5, C);
· 8 минералов и коэнзимов;
· нуклеиновые кислоты;
· антиоксиданты.
Aquashine BR – следующее поколение инъекционных препаратов, предназначенных для биоревитализации кожи с целью придать сияния (BR – bright, англ. сиять). Предназначен для использования в возрасте от 45 лет, когда кроме возникновения морщин возникает проблема возрастной пигментации. Комплекс пептидов и ГК, входящие в препарат, обеспечивают не только выраженный мягких тканей, но и заметное депигментирующее действие за счет снижения синтеза меланина.
Состав препарата:
- Октапептид-11 (CG-Seperin);
- Нонапептид-18 (CG-Formade);
- Олигопептид-34 (CG-TGP2);
· Олигопептид-72 (CG-boostrin)
- Олигопептид-51 (CG-Purilux);
- Декапептид-23 (CG-Flatin);
- Гиалуроновая кислота 1,5% (15 мг/мл);
- Аналогичный состав витаминов, минералов, нуклеиновых кислот и антиоксидантов.
Aquashine BTX – новейший из препаратов в данном исследовании. Обновленная формула с антивозрастными пептидными компонентами, снижающими мышечную активность при мимике. По действию схож с ботоксом, поэтому в названии зашифрована аббревиатура BTX. Рекомендован к применению для пациентов от 35 лет. Состав:
|
|
|
- Октапептид-11 (CG-Seperin);
- Нонапептид-18 (CG-Formade);
- Декапептид-29 (CG-Noverin);
- Олигопептид-62 (CG-Liftin);
- Олигопептид-34 (CG-TGP2);
- Олигопептид-24 (CG-EDP3);
- Олигопептид-72 (CG-boostrin);
- Олигопептид-51 (CG-purilux);
- Ацетил декапептид-3 (Rejuline);
- Гиалуроновая кислота 1,5% (15 мг/мл);
- 24 аминокислоты;
- 14 витаминов (A, B6, E, B1, B7, B8, B2, K, I, B3, B12, B9, B5, C);
- 8 минералов и коэнзимов;
- нуклеиновые кислоты;
- антиоксиданты.
Далее, подробнее об ингредиентах, входящих в состав продукции линии Aquashine.
ГК обеспечивает глубокое увлажнение кожи, а также выполняет транспортную функцию для остальных активных веществ.
Гиалуроновая кислота является важным компонентом в организме человека, выполняя защитные и другие биологически активные функции. Ее уникальные физико-химические и биологические свойства, в том числе биосовместимость и высокая гидрофильность, позволяют использовать ГК в различных областях медицины в виде гелей и пленок. Растворы ГК обладают уникальными реологическими свойствами, которые позволяют этому полимеру вести себя подобно вязкоупругому гелю даже при низких концентрациях [35].
|
|
|
ГК относится к группе соединений, называемых гликозаминогликанами или кислыми мукополисахаридами. Это вещество заполняет внеклеточные пространства между волокнами коллагена. Он идентичен по химической и молекулярной форме во всех тканях млекопитающих и поэтому является неспецифичным для вида. ГК имеет простую химическую структуру: линейный полисахарид из повторяющихся дисахаридных звеньев N- ацетилглюкозамина и D-глюкуроновой кислоты.
В несшитом виде это текучий раствор, склонный к быстрому разложению и именно это делает ГК идеальным средством для коррекции дефектов кожи.
Формула гиалуроновой кислоты
Основным отличием препаратов Aquashine от других продуктов, предназначенных для биоревитализации, является наличие в составе синтетических пептидов. Именно они являются ключевыми ингредиентами в составе данной линии препаратов. Каждый отдельно взятый пептид, находящийся в ингредиентном листе препарата, несёт в себя различные свойства, которые позволяют бороться с различными дефектами кожи.
|
|
|
INCI: Oligopeptide-24 (CG-EDP3). Это синтетический пептид, содержащий 13 аминокислот, состоящий из: аргинина, аспарагиновой кислоты, цистеина, изолейцина, глутаминовой кислоты, глицина, метионина и тирозина. Олигопептид-24 — это пептид, полученный из эластина, который усиливает экспрессию эластина и гиалуроновой кислоты и повышает активность фибробластов. Он используется в косметике в качестве средства против морщин и укрепляющего средства. Исследования in vitro показали, что олигопептид-24 увеличивает концентрацию эндогенного фактора роста в коже даже в десять раз по сравнению с контролем [36,37]. Молекулярный вес: 1 271,4 Да
INCI: Acetyl-Decapeptide-3 (Rejuline). Это синтетический пептид, состоящий из тирозина, аргинина, серина, лизина, треонина и триптофана. Ацетил декапептид-3 — это пептид, который стимулирует коллаген и эластин для повышения эластичности кожи, увеличения роста клеток. Ацетил декапептид-3 является продуктом, образованным реакцией уксусной кислоты и декапептида-3 Молекулярный вес: 1450,599 Да
INCI: Oligopeptide-51 (CG-Purilux). Это синтетический пептид, содержащий 11 аминокислот, состоящий из аланина, аргинина, аспарагиновой кислоты, глицина, лейцина, серина, треонина и тирозина. Олигопептид-51 угнетает активность и выработку меланоцитов, стимулирует образование новых клеток кожи, волокон эластина и коллагена, сокращает поры за счет угнетения производства липидов, из которых синтезируется себум (кожное сало). Молекулярный вес: 1210,3 Да
|
|
|
INCI: Decapeptide-29 (CG-Noverin). Это синтетический пептид, состоящий из аргинина, аспарагина, цистеина, гистидина, фенилаланина и валина. Декапептид-29 представляет собой белый раствор. Уменьшает и предотвращает появление морщин, блокируя функцию MMP2, активно генерируя новые клетки кожи. Также обладает противовоспалительным свойством, выравнивает рельеф кожного покрова.
Молекулярный вес: 1 072,2 Да
INCI: Oligopeptide-62 (CG-Liftin). Данный пептид представляет собой синтетический пептид, содержащий 12 аминокислот, состоящий из аргинина, аспарагина, цистеина, глицина, лейцина, лизина, фенилаланина и тирозина. Олигопептид-62 продлевает жизненный цикл кожных клеток, повышает эластичность дермы, улучшает ее цвет, оказывает эффект лифтинга. Молекулярный вес: 1473,7 Да
INCI: Octapeptide-11 (CG- Seperin). Cинтетический пептид, состоящий из цистеина, изолейцина, метионина, пролина, серина и тирозина. Октапептид-11 – омолаживает кожу, благодаря активации процесса деления клеток. Благодаря этому улучшается тонус кожи, обеспечивается глубокий лифтинг-эффект. Молекулярный вес: 1075,16 Да
Сложный комплекс действующих веществ восстанавливает активность ферментных систем организма, повышает антиоксидантную защиту, оказывает регулирующее действие и балансируют состояние кожи. Аминокислоты являются “строительным материалом” для синтеза белков. Нуклеиновые кислоты используются для синтеза новой ДНК при делении клеток.
Антиоксиданты очень полезные активные ингредиенты для изготовления косметики. Как правило, антиоксиданты прерывают реакции окисления и предотвращают воздействие кислородных радикалов (например, пероксидов) на оба процесса. С одной стороны, они предотвращают разложение натуральных ингредиентов (белков, сахаров, липидов) в косметическом продукте. С другой стороны, антиоксиданты защищают клетки кожи от повреждения и замедляют процесс старения. Было показано, что антиоксиданты улучшают сияние кожи, минимизируют возрастные пятна, солнечные пятна и тонкие линии.
Также в рецептуре используются следующие 14 витаминов: аскорбиновая кислота (С), ретинол (А), тиамин (В1), рибофлавин (В2), никотин (В3), пантотен (B5), пиридоксин (В6), биотин (B7), инозитол (B8), фолиевая кислота (B9), цианокобаламин (В12), токоферол (E), филлохинон (K), — питают и лечат.
Витамин Е является важным жирорастворимым антиоксидантом и используется в дерматологии более 50 лет. Это важный ингредиент во многих косметических продуктах. Он защищает кожу от различных вредных воздействий солнечного излучения, выступая в качестве поглотителя свободных радикалов.
Витамин С способен предотвращать дефекты из-за чрезмерного пребывания на солнце, курения или стресса, а также проблем, связанных с окружающей средой. Велика взаимосвязь между уровнем витамина С в организме и общим состоянием кожи [38]. Высокая концентрация витамина С в коже указывает на то, что он обладает рядом важных биологических функций, которые важны для здоровья кожи. Основываясь на том, что мы знаем о функции витамина С, внимание было сосредоточено на образовании коллагена и антиоксидантной защите.
Витамин А, или ретинол, является одним из наиболее широко признанных питательных веществ для здоровой кожи. Синтетические ретиноиды использовались в качестве эффективных средств для лечения угрей и псориаза с 1980-х годов, демонстрируя таким образом, насколько полезен витамин А для лечения проблемной кожи. Недостаток витамина А вызывает кератинизацию и шелушение кожи, а секреция слизи подавляется.
Витамин B3 может помочь при некоторых признаках старения кожи. В особенности это касается уменьшения появления пигментных пятен и других форм изменения цвета кожи.
Витамин В5 предотвращает потерю воды и помогает удерживать влагу. Это, в свою очередь, предотвращает сухость кожи, шелушение и зуд, а также поддерживает её мягкость и эластичность.
Витамин В6, также известный как пиридоксин, требуется организму для развития красных кровяных клеток, которые помогают восстановлению клеток кожи. Витамин B6 также помогает регулировать нарушения гормонов, которые могут вызывать обострение угревой сыпи.
Коэнзимы является питательным - витаминоподобным веществом, которое играет решающую роль в выработке клеточной энергии и в очистке организма от свободных радикалов.
3.2 Материалы и методы исследования
Для проведения экспериментальной части нам было необходимо выделить культуру клеток фибробластов из предоставленного образца кожи человека.Фибробласты легко культивируются и поддерживаются в лабораторных условиях.
Исторически, линии фибробластов человека, были получены из биопсий пациентов и использовались в ряде исследований для выяснения патогенеза некоторых заболеваний [39]. Фибробласты получают из биоптатов кожи посредством ферментативной обработки или механической дезагрегации образцов. В настоящее время наиболее часто используют ферментативный способ получения первичной культуры. На скорость роста и свойства фибробластов в культуре оказывают влияние следующие факторы: количество пассажей, способ культивирования, тип используемых сред и сывороток [40].
При проведении исследований тех или иных косметических или медицинских препаратов достаточно распространён метод Кунса или подругому он называется иммунофлуоресцентный анализ. Сущность метода заключается в визуализации антигена специфическими антителами с флуоресцентными маркерами. Метод конъюгации глобулинов с органическими флюорохромами разработан в 1942 году.
В базовой МФА методике различают прямой метод, разработанный А. Кунсом и Мелвином Капланом, и непрямой, разработанный А. Кунсом и Уиллером в первоначальном варианте непрямого МФА с комплементом.
При прямом методе (пМФА) на исследуемый препарат или в суспензию клеток наносят раствор прямо меченых флюоресцентным красителем антител. Образование комплекса антиген-антитело обнаруживается флюоресцентным сигналом в виде свечения разной степени интенсивности и четкости.
При непрямом методе (нМФА) на препарат наносят антитела против искомых антигенов (т. н. «первые» антитела), а затем видоспецифичные «вторые» антитела против «первых» антител, что позволяет избежать неспецифических реакций. При этом только вторые антитела коньюгированны с флюоресцентным красителем. К примеру, если при исследовании в качестве «первых» антител используются мышиные антитела — mouse IgG, то в качестве «вторых» используются антивидовые anti-mouse IgG коньюгированные с флюоресцентным красителем.
Комплекс антиген-антитело дает флюоресцентное окрашивание только после связывания со «вторым» антителом. Работа была подразделена на 4 этапа:
1. Выделение фибробластов из доставленного в лабораторию образца кожи человека;
2. Пассирование полученной культуры клеток;
3. Окрашивание иммунофлуоресцентным методом;
4. Морфометрический анализ.
3.3 Выделение культуры фибробластов и пассирование
Для получения суспензии клеток пуповину измельчали ножницами до кусочков размером 3-4 мм и помещали в раствор коллагеназы I типа в среде МЕМ. Полученную суспензию клеток осаждали при 1G в течение 5 мин, после чего был удален супернатант, а затем осадок клеток ресуспендировали в смеси
среды M199. Полученный материал перенесли во флакон и поместили в термостат. Через 5-7 дней первичная культура достигала монослоя.
Пассирование культуры фибробластов человека до 7 пассажа. Пассирование производилось через 3 дня на четвертый, когда культура достигала состояние монослоя. Методика пересеивания культуры фибробластов:
1. Культуральная среда удалялась из флаконов (флакона) с помощью стерильной пипетки.
2. Для удаления остатков среды и мертвых клеток проводилась промывка в двух сменах DPBS без Ca2+ и Mg2+ по 5 мл на флакон.
3. Для снятия клеток с подложки использовался раствор трипсин-версена (Gibco), который добавляли по 500 мкл на флакон, время действия 3-5 мин при температуре 37°С.
4. Открепление клеток контролировалось под микроскопом.
5. Для блокирования ферментативной реакции добавляли питательную среду по 5 мл на флакон.
6. Затем суспензию клеток центрифугировали 5 мин при 1G. Этот пассаж считали нулевым. Посевная концентрация составляла примерно 50 тыс. клеток на мл. Исследуемый препарат Aquashine вводится, начиная с 1 пассажа (доза – 2,0 мл препарата развести физиологическим раствором до 10,0мл). Препарат вводится при каждом пассаже (до 7 пассажа).
Дата добавления: 2019-07-15; просмотров: 155; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!