Влияние препаратов Aquashine, Aquashine BR, Aquashine BTX на экспрессию маркера TRF1 и кальретикулина в культуре фибробластов.

⇐ ПредыдущаяСтр 4 из 7Следующая ⇒

Изучив и проанализировав научную литературу, был сделан вывод, что дефицит TRF1 вызывает распечатывание теломеры, что сигнализирует о повреждении участка ДНК, старению или апоптозу.

В исследовании [34] (Derevyanko A, Whittemore K) было доказано, что благодаря активации экспрессии TERF1 можно отсрочить возрастные паталогии. Уровень содержания TERF1 снижается при пассировании клеток in vitro. Стоит отметить, что сверхэкспрессия TERF1 в этих клетках снижает урон ДНК и замедляет старение. [31]

Ниже, приведено краткое описание всех трёх объектов данного исследования. Для дальнейшего удобства, было принято решение обозначать их по принципу объект – номер.

Объект исследования №1: препарат Aquashine характеризуется своим базовым составом, по отношению к остальным представителям данной линии. Именно разработка данного биоревитализанта стала колоссальным прорывом в области инъекционной косметологии, так как подкожное введение синтетических пептидов, «запрограммированных» на выполнение определённых задач вызвало значительный прогресс в регенерации тканей.

Далее, продемонстрированы результаты лабораторного эксперимента, который доказывает положительное влияние препарата Aquashine на экспрессию TERF1.

Объект исследования №2: препарат Aquashine BR. Данный продукт, также предназначенный для подкожного введения, главная цель которого устранение пигментации кожи, выравнивание тона и придание здоровго внешнего вида.

Состав схож с составом с образцом №1, но его пептидный комплекс был усовершенствован, добавлением двух новых ингредиентов:

• олигопептид-51 (CG-purilux);

• декапептид-23 (CG-flatin).

Использование в составе продукта CG-purilux придаёт препарату отличительное свойство: этот пептид блокирует связь с рецептором меланина, благодаря чему оказывается мощное депигментирующее действие.

Следующая пара фотографий с конфокального микроскопа демонстрирует значительное увеличение экспрессии TERF1, что свидетельствует о эффективности данного препарата.

Объект исследования №3: препарат Aquashine BТХ. Этот препарат является самым модифицированным из всех трёх образцов, присутствующих в данной работе. Его отличительная особенность – два новых пептида:

декапептид-29;
олигопептид-62;

Именно эти два компонента отвечают за выравнивание кожного рельефа и повышают элестичность дермы, таким образом оказывая лифтинг эффект. Так как все условия во время проведения эксперимента с образцами №1, 2, 3 были сохранены для сравнительного анализа.

Выбрав методику и приступив к выполнению экспериментальной части, было принято решение, что каждый из представленных образцов препарата будет вводиться, начиная с 1 пассажа (доза – 2,0 мл препарата развести физиологическим раствором до 10,0мл) до 7-ого пассажа, так как именно седьмой пассаж соответствует увядающей коже человека.

Работа проводилась в несколько этапов:

1.Выделение фибробластов из доставленного в лабораторию образца кожи человека;

2. Пассирование полученной культуры клеток;

3. Окрашивание иммунофлуоресцентным методом;

4. Морфометрический анализ.

5. Статистическая обработка

Морфометрический анализ был проведён на конфокальном микроскопе Olympus FluoView 1000 (Япония) с использованием программного обеспечения «Vidеotest Morphology 5.2.
Результаты первого опыта:

Рисунок 7. Экспрессия TERF-1 в культуре клеток фибробластов,

А – контроль, Б – при введении препарата Aquashine plus; В – при введении препарата Aquashine BR plus, Г – введении препарата Aquashine BTX plus.

При статистической обработке полученных результатов было установлено, что значения относительной площади экспрессии маркера в контрольной группе достоверно ниже, чем в группе с введением пептидных препаратов. На следующей странице приведена сравнительная гистограмма.

Рисунок 8. Сравнение показателей относительной площади экспрессии TERF-1 в культуре клеток фибробластов в контрольной группе и при воздействии препаратов Aqushine.

Результаты второго опыта:

Рисунок 9. Экспрессия кальретикулина в культуре клеток фибробластов,

На гистограмме приведено сравнение показателей относительной площади экспрессии маркера Calreticulin в контроле и при воздействии препарата.

Рисунок 10. Сравнение показателей относительной площади экспрессии Calreticulin в культуре клеток фибробластов в контрольной группе и при воздействии пептидных препаратов.

Площадь экспрессии рассчитывали, как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в процентах. Этот параметр характеризует количество клеток, в которых экспрессируется исследуемый маркер.

Статистическая обработка проводилась в программе «Excel 2007. Microsoft Office» и в аналитической программе "Statistica 7.0".

Статистическая обработка всех экспериментальных данных включала подсчет среднего арифметического, стандартного отклонения и доверительного интервала для каждой выборки. Для анализа вида распределения использовали критерий Шапиро–Уилка (W-test).

Для проверки статистической однородности нескольких выборок были использованы непараметрические процедуры однофакторного дисперсионного анализа (критерий Крускалла–Уоллиса).

Для выборок, где разброс был значительным, применяли процедуры множественных сравнений с помощью критерия Манна–Уитни. Для групп с незначительным разбросом применяли t-критерий Стьюдента. Критический уровень достоверности нулевой гипотезы (об отсутствии различий) принимали равным 0,01.

В первую очередь работа была направлена на расширение доказательной базы эффективности применения пептидных препаратов. Это было сделано из необходимости продемонстрировать обоснованность использования данных препаратов при возникновении кожных дефектов.

Под воздействием препаратов Aquashine, Aquashine BR, Aquashine BTX в культуре клеток фибробластов наблюдалась активация экспрессии TЕRF-1, что способствует стабильности теломеров и замедляет апоптозную фрагментацию. Апоптоз представляет собой генетически запрограммированную смерть клеток. Несмотря на то, что этот процесс неизбежный, пролонгация жизни клетки несёт в себе положительный эффект.

Также было показано увеличение площади экспрессии кальретикулина в фибробластах, что свидетельствует об усилении внутриклеточного синтеза белков. Это способствует повышению количества жизнеспособных клеток.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о наличии у всех трёх препаратов выраженных геропротекторных и регуляторных свойств по отношению к фибробластам кожи. Модуляция активности генетического аппарата переводит клетку в режим оптимальной работы, что означает поддержание здорового гомеостаза и метаболизма.

Основываясь на результатах проведённого нами эксперимента, можно заключить что при воздействии препаратов Aquashine, Aquashine BR, Aquashine BTX происходит положительная физиологическая активность на клеточном уровне, что даёт нам возможность оценить эффективность действия препарата и подтвердить заявленные характеристики

Экспериментальная часть

Дата добавления: 2019-07-15; просмотров: 185; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 1 2 345 6 7 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!