Количественное определение активности сывороточной холинэстеразы.

Изучение ингибирующего действия карбофоса и активирующего действия ионов кальция.

    Различают два типа холинэстераз (ХЭ): ацетилхолинэстераза (АХЭ, истинная ХЭ, К.Ф.3.1.1.7) и бутирилхолинэстераза (сывороточная ХЭ, псевдохолинэстераза, К.Ф.3.1.1.8). Ферменты являются простыми белками, относятся к классу гидролаз и подклассу эстераз.

    Ацетилхолинэстераза - фермент, катализирующий расщепле­ние ацетилхолина на одноатомный азотсодержащий спирт холин и уксусную кислоту, содержится в мозгу, печени, почках, мышцах, эритроцитах и дру­гих тканях. Ацетилхолин участвует в передаче нервных импульсов в ка­честве химического медиатора в синапсах центральной и периферической нервной системы, выделяясь в синаптическую щель в момент проведения импульса. Его ферментативное расщепление необходимо для подготовки постсинаптической мембраны к про­ведению нервного импульса. Ацетилхолинэстераза нервной ткани связана с наружной стороной постсинаптической мембраны, состоит из однородных глюкопротеидных субъединиц, чаще из четырех. Система «ацетилхолин-холинэстераза» участвует в регуляции возбудимости и сократимости гладкой и сердечной мышц, в осуществлении процессов активного и пассивного переноса ионов через мембраны эритроцитов и мышц.

     Холинэстераза в основном содержится в печени, поджелудочной железе, слизистой кишечника, легких и сыворотке. Возмож­но, что постоянное присутствие чрезвычайно активной ХЭ в плазме крови является защитным приспособлением и предотвращает распространение по тканям ацетил­холина при его попадании в кровяное русло.

Показано, что в не­больших количествах ХЭ содержится и в центральной нервной системе. Существует предположение, что роль ХЭ нервной системы сводится к за­щите АХЭ от угнетающего действия таких эфиров холина, которые практически не разрушаются АХЭ, но могут образоваться в организме (пропионилхолин, бутирил­холин, валерилхолин и др.), а ХЭ их разрушает. Возможно также, что в отдельных участках мозга могут создаваться ненормально высокие концентрации ацетилхоли­на, избыток которого, как известно, тормозит АХЭ, но не влияет на активность ХЭ, которая его разрушает.

     На активность фермента могут влиять специфические факторы: ингибиторы и активаторы. К специфическим необратимым ингибиторам ацетилхолинэстеразы относятся эфиры фосфорной кислоты: алкилфосфаты, фосфонаты, которые применяются в качестве инсектицидов, боевые отравляющие вещества – зарин, заман, табун, а также некоторые фармакологические препараты – армин, фосфакол, хлорофтальм. Обратимые ингибиторы – тетраалкиламмониевые соли: физостигмин, прозерин, эдрофоний. Активируют ацетилхолинэстеразу ионы кальция и магния.

По данным А. А. Покровского (1961), существует свыше 100 вариантов ме­тодов химического определения холинэстеразной активности в крови, в большинстве своем основанных на определении скорости образования уксусной кислоты (т. е. одно­го из продуктов реакции) и различающихся по способам этого определения. Методы делятся на манометрические, титриметрические, колориметрические и спектрофотометрические. Существует экспресс-метод определения активности ХЭ в сыворотке крови с использованием хроматографической бумаги, пропитанной ацетилхолином и индикатором, изменяющим окраску в зависимости от рН среды.

 

Цель работы освоить метод определения активности холинэсте­разы. Изучить действие на активность холинэстеразы ингибиторов и активаторов.

Принцип метода: основан на смещении рН буферного раствора уксусной кислотой образующейся в результате гидролитического ферментативного расщепления ацетилхолина, что устанавливают с помощью индикатора.

Схема реакции:                                

                       Cl                                                                           Cl

CH₃COOCH₂CH₂N⁺(CH₃)₃ + H₂O --------> CH₃COOH + НOCH₂CH₂N⁺(CH₃)₃

Ацетилхолинхлорид          АХ Э    уксусная        холинхлорид

                                                                        кислота

Реактивы и оборудование:

 1. Боратный буфер, рН 8,4. 2. Ацетилхолинхлорид 3% раствор. 3 .Индикатор фенолрот. 4. Кальций хлорид – 0,1 н раствор. 5. Карбофос - 1% раствор.

6. Дистиллированная вода. 7. Термостат 37°С. 8. Пробирки и пипетки для реактивов. 9. Фотоэлектроколориметр

Ход работы: В 4 пробирки отмеривают по 0,1 мл сыворотки крови, добавляют по 1 мл боратного буферного раствора рН=8,4. 3атем в соответствии с таблицей в пробирки добавляют дистиллированную воду, СаС1₂ и карбофос, перемешивают содержимое пробирок встряхиванием и оставляют на 5 мин. при комнатной температуре. Через 5 мин. в про­бирки N 2,3,4 добавляют по 0,5 мл ацетилхолина и помещают все пробы в термостат при 37°С на 1 час.

 

N проби­рок	1	2	3	4
Сыворотка (мл)	0,1	0,1	0,1	0,1
Буфер (мл)	1,0	1,0	1,0	1,0
Вода дист. (мл)	1,0	0,5	―	―
СаС12 (мл)	—	—	0,5	—
Карбофос (мл)	—	—	—	0,5
Ацетилхолин (мл)	―	0,5	0,5	0,5

                                               Результаты эксперимента.

Плотность (Д)
Д1 – Д 2,3,4	―
Активность ХЭ ммоль/л·ч	―

 

        После инкубации в каждую пробирку добавляют по 1,0 мл дистиллированной воды и по 2 каплираствора индикатора. Затем пробы колориметрируют на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром (l=540 нм) в кюветах с толщиной слоя жидкости 10 мм, в качестве контроля используют дистиллированную воду.

Результаты измерений вносят в таблицу. Из показателей абсорбции стандартной (1) пробы вычитают значения оптической плотности опытной (2,3,4). Рассчитывают активность ХЭ по калибровочному графику. Для построения калибровочного графика используют разведения 0,1 н уксусной кислоты с ее содержанием в пробе от 4 до 18 мкмоль в пробе, что соответствует активности ХЭ от 80 до 360 ммоль/(л·ч).

       Активность ХЭ в сыворотке в норме составляет 160-340 ммоль/(л·ч).

Вывод:

 

 

Клиническое значение определения активности сывороточной ХЭ.

     Активность ХЭ в группе здоровых лиц колеблется в широких пределах, но у одного и того же человека она довольно постоянна. Отчётливое снижение активности ХЭ в сыворотке крови отмечается при заболеваниях печени, гипотиреозе, бронхиальной астме, суставном ревматизме, инфаркте миокарда, ожогах, травматическом шоке, раке, в послеоперационном периоде. Поскольку актив­ность сывороточной холинэстеразы (бутирилхолинэстеразы) отражает белковосинтетическую функцию печени, ее определение может проводиться с целью выявления действия гепатотропных ядов.

      Метод может быть использован для контроля состояния здоровья лиц, связанных с получением и использованием алкилфосфатов, фосфонатов, и других фосфорорганических соединений (ФОС); для выявления признаков и оценки тяжести острого и хронического отравления ФОС (например, у лиц, связанных с производством, использованием, транспортом и хранением инсектицидов), для контроля эффек­тивности патогенетической терапии интоксикаций. Угнетение ак­тивности ХЭ в сыворотке крови наступает при низких дозах яда и выявляется зна­чительно раньше других симптомов интоксикации.

 

Количественное определение активности тканевых дегидрогеназ и изучение действия их ингибиторов

 

     Непосредственным источником энергии, необходимой для про­цессов жизнедеятельности, являются химические вещества: глю­коза, аминокислоты, жирные кислоты и другие органические соединения. Внутримолекулярная энергия этих веществ осво­бождается при их окислении, которое в биологических условиях происходит путем дегидрирования и катализируется субстратспецифичными ферментами дегидрогеназами, относящимися к классу оксидоредуктаз. Коферменты дегидрогеназ - никотинамид и флавин, содержащие нуклеотиды (НАД, НАДФ, ФАД), выполняют функции акцепторов водорода, отщепляемого при окислении субстрата. Определение концентрации восстановленных акцеп­торов составляет основу многих методов количественного опре­деления дегидрогеназной активности и проводится путем спектрофотометрических или фотоколориметрических измерений.

     Дегидрогеназы относятся к числу так называемых «тиоловых» ферментов, каталитическое действие которых обусловлено сульфгидрильными (тиоловыми) группами, входящими в состав ак­тивного центра молекул фермента или ответственными за под­держание каталитически активной конформации. Поэтому инги­биторами дегидрогеназ являются вещества, блокирующие SH-группы, к ним относятся окисляющие, меркаптидобразующие, алкилирующие вещества, такие, например, как перекись водорода (окислитель), хлорид кадмия (меркаптидобразующий агент), йодуксусная кислота (алкилирующий агент). Ингибирование протекает по уравнению реакций:

 

 

1. Белок _< ^SH    + Н₂О₂ ----> Белок _{< |}^S + 2 Н₂О  

               ^{SH                                    S}

2. а) Белок - SH + CdCl₂ ----> Белок - S - Cd - Cl + HCl;

б) Белок - S - Cd - Cl + Белок – SH ----> Белок - S - Cd -S – Белок + НС1

3. Белок – SH + IСН₂СООН ----> Белок - S - СН₂СООН + HI

.

Применение метода в санитарно-гигиенических исследованиях

     Метод определения активности дегидрогеназ может быть ис­пользован в гигиенических исследованиях при производственных и пищевых отравлениях окислителями, солями тяжелых металлов, алкилирующими агентами. Активность дегидрогеназ определяется при экспериментальных и клинических исследованиях, направлен­ных соответственно либо на изучение биохимических механиз­мов действия на организм химических и физических факторов среды (ионизирующая и ультрафиолетовая радиация, шум, вибра­ция), либо на выявление признаков интоксикаций и других заболеваний.

 

Количественное определение активности дегидрогеназы янтарной кислоты (сукцинатдегидрогеназы, К. Ф. 1.3.99.1) тетразолиевым методом

 

ЦЕЛЬ РАБОТЫ:освоить метод количественного определения сукцинатдегидрогеназы . Исследовать действие ингибиторов на ее активность (УИРС).

Принцип метода: В результате окисления янтарной кислоты образуется фумаровая кислота и восстановленный ФАД.

          

 

 

       COOH                                                         COOH                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                

       CH₂                         ФАД   « ФАД·2Н     CH

                                                                                                                                                                                   

       _                 <―――――――                   __                                 

       CH₂                 сукцинатдегидрогеназа CH                                             

       COOH                                                          COOH

 янтарная кислота                                           фумаровая кислота

 

Водород, отщепляемый от суб­страта дегидрогеназой, восстанавливает бесцветную соль тетразолия в яркоокрашенное соединение формазан.

 

Активность фермента характеризуется величиной оптической плотности раствора формазана, эквивалентного количеству от­щепленного от субстрата водорода ферментом (ФАД·2Н) за 1 с в расчете на 1 г ткани, т. е. катал на 1 г ткани.

Реактивы и оборудование: 1. Раствор сукцината натрия 1,2% на фосфатном буфере, рН 7,0. 2. Раствор трифенилтетразолий хлорида 0,12%. 3. Растворы CdCl₂, H₂O₂, СН₂IСООН 0,01 М. 4. Ацетон. 5.Фотоэлектроколори-метр.

Ход работы: свежий мозг мыши измельчают ножница­ми на кусочки массой около 20 мг. Навеску мозга 20 мг поме­щают в каждую из 4 пробирок и отмеривают по 1 мл 0,12% раство­ра тетразолия хлорида. В первую пробирку добавляют 2 капли дистиллированной воды, во вторую, третью и четвертую пробир­ки - по 2 капли ингибитора (CdCl₂, H₂O₂, СН₂IСООН). Все про­бирки оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Затем во все пробирки добавляют по 1 мл 1,2% раствора сукцината натрия. Пробы инкубируют в термостате при температуре 38°С в тече­ние 30 мин. Раствор из пробирок сливают, кусочки ткани стеклян­ной палочкой осторожно переносят в сухую пробирку и экстра­гируют формазан 3 мл ацетона в течение 30 мин. Ацетоновый раствор формазана переносят в кювету с рабочим расстоянием 5 мм, и пробы колориметрируют на ФЭКе, используя синий светофильтр, (l=490 нм). Активность фермента выражают в каталах, рассчитывая по формуле .

                             A=C/(B· t) = моль/(с · г ткани) = кат/г· ткани,

где С - концентрация восстановленного ФАД 2Н в молях (по­лучена при использовании калибровочного графика); t - время инкубации в секундах; В - масса ткани в граммах.

Данные анализа и выводы:

 

 

Определение общей активности лактатдегидрогеназы (К.Ф. 1.1.1.27) и ее изоферментов.

 

Лактатдегидрогеназа (L-лактат; НАД-оксидоредуктаза) - гликолитический (цитозольный цинксодержащий) фермент (молекулярная масса 135 000 Д), обратимо катализирующий окисление L-лактата в пировиноградную кислоту. Окисленный никотинадениндинуклеотид используется в качестве кофермента и является акцептором водорода.

Схема реакции:

CH₃CHOHCOOН HAД⁺ <―――――――――> CH₃COCOOН+ HAД·H+H⁺

лактат                      лактатдегидрогеназа  пируват

 

Фермент широко распространен в организме человека. По степени убывания активности энзима органы и ткани могут быть расположены в следующем порядке: почки, сердце, скелетные мышцы, поджелудочная железа, селезенка, печень, легкие, сыворотка крови. В последней обнаружено несколько различных изоферментов, обладающих одинаковыми каталитическими свойствами. Каждый из изоферментов представляет собой тетрамер, образованный субъединицами Н (heart) и М (muscle). Полипептидная цепь обеих субъединиц содержит330 аминокислотных остатков; различия в их последовательности в субъединицах обнаружены на протяжении более чем 25% длины полипептидной цепи. Свойства ферментов ЛДГ определяются особенностями входящих в них субъединиц. Изменения в строении белковой части изоферментов обусловливают их различные физико-химические свойства (в частности, неодинаковую электрофоретическую подвижность). В плазме (сыворотке) крови выявлено пять изоферментов лактатдегидрогеназыЛДГ₁ (HHHH) - 14-26%, ЛДГ₂ (НННМ) - 29-39%, ЛДГ₃ (ННММ) - 20-26%, ЛДГ₄ (НМММ) - 8-16%, ЛДГ₅ (ММММ) - 6-16%. Они располагаются в геле в порядке убывания электрофоретической подвижности.

Субъединица М обнаруживается главным образом в тканях с анаэробным метаболизмом, в то время как субъединица Н присутствует в тканях с преобладанием аэробных процессов. Изофермент ЛДГ₁ осуществляет окисление лактата в пируват в тканях с аэробным типом метаболизма (миокард, мозг, почки, эритроциты, тромбоциты), а ЛДГ₅, напротив, пирувата в лактат в тканях с высоким уровнем гликолиза (скелетные мышцы, печень).

Шестой изофермент лактатдегидрогеназы (ЛДГ-Х) встречается в яичках взрослых особей наряду с пятью изоферментами, которые обнаруживаются в других тканях. ЛДГ-Х является тетрамером, состоящим из 4 идентичных Х-субъединиц, которые отличаются по аминокислотному составу от Н- и М-субъединиц. Этот изофермент, видимо, связан со сперматогенезом, так как 80% активности лактатдегидрогеназы сперматозоидов обусловлено этим изоферментом.

Методы определения общей активности ЛДГ подразделяются на две основные группы: 1) кинетические, базирующиеся на оптическом тесте Bap6ypга (оптическом эффекте, связанном с превращением НАД⁺ в НАД • Н, и наоборот); 2) методы, в которых определяется количество образовавшегося продукта или потребляемого субстрата после фиксированного инкубационного периода (методы конечной точки).

Для изучения изоферментного спектра лактатдегидрогеназы используются способы, базирующиеся на:                                                                       

-фракционировании методом зонального электрофореза или хроматографии (изоферменты ЛДГ нумеруются соответственно электрофоретической подвижности по отношению к аноду) с последующим тетразольным окрашиванием фракций и денситометрическим учетом картины разделения;

- дифференцированном неселективном и селективном ингибировании изоферментов ЛДГ: пируватом (ЛДГ₁ более чувствительна к его влиянию, чем ЛДГ₅), лактатом, оксалатом (более ингибирует ЛДГ₁, чем ЛДГ₅), мочевиной (инактивирует ЛДГ₅);                                                            

- различии в тепловой стабильности изоферментов (ЛДГ₁ ) различии в тепловой стабильности изоферментов

- применении антител (к ЛДГ₁ и ЛДГ₅): иммунохимические тесты и некоторые другие.

                                                                                     

Клиническое значение определения активности лактатдегидрогеназы.

 

       В связи с тем что фермент ЛДГ содержится практически во всех тканях, констатация повышения общей активности лактатдегидрогеназы не имеет большого значения для дифференциальной диагностики заболеваний внутренних органов.

Активность ЛДГ в сыворотке крови возрастает у больных, страдающих анемией, обширным карциноматозом, опухолями, лейкозами, лимфомой, вирусным и невирусным гепатитом, обтурационной желтухой, циррозом печени, различными заболеваниями почек, опорно-двигательного аппарата, инфарктом миокарда и легкого, а также при любом другом повреждении клеток, приводящем к цитолизу и утрате цитоплазмы (этот фермент, широко представленный в тканях организма, легко переходит в плазму крови при некробиотических процессах в клетках).

   Относительная активность изоферментов ЛДГ₄ и ЛДГ₅ повышена у всех больных инфекционным гепатитом в первые 10 суток. Характерно, что степень повышения не зависит от тяжести заболевания. После наступления клинического выздоровления у трети пациентов увеличение относительной активности ЛДГ₄ и ДДГ₅ является единственным показателем, свидетельствующим о незаконченном восстановительном процессе в печени.

У больных инфарктом миокарда активность фермента в сыворотке крови повышается через 8—10 ч после начала приступа, достигает максимума через 24-28 ч, остается увеличенной на протяжении первой недели заболевания, нормализуясь к 8-9-м суткам.. Ценность данного теста особенно велика в неясных случаях заболевания, при нетипичной клинической и электрокардиографической картине инфаркта миокарда

    К увеличению обшей активности ЛДГ приводит прием алкоголя, кофеина, введение анаболических стероидов, тестостерона, обезболивающих препаратов, дикумарина, хинидина, сульфаниламидов, кодеина, клофибрата, мисклерона.

     Существует две группы причин, обусловливающих снижение активности фермента в крови и тканях. Одна из них связана с наличием ингибитора в сыворотке (плазме) крови, вторая - с генетическими нарушениями.

Литература: В.С.Камышников Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. Москва, «МЕДпресс-информ», 2004

Методы определения активности ферментов

 

По способу измерения скорости ферментативной реакции различают:

1 .Измерение по конечной точке. При этом определяют содержание продуктов реакции в инкубационной среде после фиксированного времени инкубации и остановки ферментативной реакции.

2. Кинетическое измерение с непрерывным (многоточечным) измерением

абсорбции в ходе ферментативной реакции.

3 .Двухточечное измерение - при этом способе выбирают линейный участок

кривой, определяют абсорбцию дважды - в начале измерения и в конце.

 4. Измерение по начальной скорости, когда скорость реакции нелинейна и

снижается во времени, т.к. возможна инактивация фермента во времени или продукты реакции влияют на ее скорость.

 

По технике исполнения методы определения активности ферментов зависят от химической природы субстрата или продукта:

1. Спектрофотометрический метод.

Многие субстраты или продукты ферментативных реакций поглощают свет либо в видимой, либо в ультрафиолетовой области спектра. Принцип метода заключается в измерении концентрации субстрата или продукта по величине оптической плотности раствора.

В большом количестве аналитических наборов исполъзуется оптический тест Варбурга, который основан на том, что один из продуктов дегидрогеназной реакции НАД·Н или НАДФ·Н имеет максимум поглощения при длине волны 340 нм, а их окисленные формы при этой длине волны практически не поглощают. Активность фермента эквивалентна приросту

( или уменьшению) оптической плотности при этой длине волны.

2. Фотоколориметрический метод.

Позволяет измерить оптическую плотность окрашенного раствора, который поглощает свет в видимой области. Если субстрат или продукт ферментативной реакции сами не имеют окраски, то используется их химическая модификация с получением окрашенных производных.

3. Флуоресцентный метод.

Флавиновые соединения (а также НАД⁺) сильно флуоресцируют при воздействии на них светом определенной длины волны в окисленной форме и теряют эту способность при восстановлении. В методе часто используются специальные флуоресцентные метки и красители. Флуоресцентный метод позволяет существенно повысить чувствительность и расширить диапазон измерения по сравнению с оптическими методами измерения абсорбции.

4. Газометрический метод.

Используется для наблюдения за ходом реакций, в которых один из компонентов находится в газообразном состоянии. Наиболее современным является газометрический метод О.Варбурга, основанный на применении предложенного им аппарата с встроенным манометром для измерения давления газа. Метод используется для изучения оксидаз (поглощение О₂), декарбоксилаз (выделение СО₂) и др.

5. Титрометрический метод.

Титрометрический метод существует в алкалиметрическом или ацидометрическом варианте, т.е. определении титра кислоты или щелочи, образовавшейся в ходе реакции.

Например, один из методов определения активности ацетилхолинэстеразы основан на титровании количества уксусной кислоты, образовавшейся при ферментативном расщеплении ацетилхолина.

6. Поляриметрический метод.

Принцип метода основан на определении изменения удельного вращения раствора по мере протекания ферментативной реакции. Реакция проводится в трубке поляриметра

 

Тестовый контроль по теме «Активация и ингибирование ферментов».

Тест 1

Выберите правильный ответ:

Необратимое ингибирование фермента возникает, если:

а) фермент и ингибитор связаны ковалентно

б) фермент и ингибитор связаны ионными связями

в) фермент и ингибитор связаны водородными связями

г) между ферментом и ингибитором гидрофобное взаимодействие

 

Тест 2

Выберите правильный ответ

Активатором ацетилхолинэстеразы является:

а) тетраалкиламмоний хлористый

б) ацетон

в) хлористый кальций

г) хлористая ртуть

д)карбофос

 

Тест 3

Выберите все правильные ответы

Видами быстрой регуляции активности ферментов являются:

а) индукция синтеза фермента

б) ковалентная модификация фермента

в) репрессия синтеза фермента

г) аллостерическая регуляция

д)образование множественных форм

 

Тест 4

Выберите правильный ответ:

Предшественником кофермента сукцинатдегидрогеназы является:

а) Витамин РР

б) Витамин В₁

в) Витамин В₂

г) Витамин В₆

д)Витамин С

 

Тест 5

Выберите номер правильного ответа:

Предшественником кофермента аланинаминотрансферазы является:

а) Витамин РР                  в) Витамин В₂

б) Витамин В₁                   г) Витамин В₆

д)Витамин С

 

Тест 6

Выберите все правильные ответы:

Обратимое ингибирование фермента возникает, если:

а) фермент и ингибитор связаны ковалентно

б) фермент и ингибитор связаны ионной связью

в) фермент и ингибитор связаны водородной связью

г) между ферментом и ингибитором гидрофобное взаимодействие

 

Тест 7

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ:

Видами медленной регуляции активности ферментов являются:

а) индукция синтеза фермента

б) ковалентная модификация

в) репрессия синтеза фермента

г) аллостерическая регуляция

д)образование множественных форм

 

Тест 8

Выберите все правильные ответы:

Неконкурентное ингибирование происходит, если:

а)субстрат и ингибитор схожи по структуре

б)субстрат и ингибитор не схожи по структуре

в) ингибитор связывается в активном центре фермента

г) ингибитор связывается не в активном центре фермента

 

Тест 9

Выберите все правильные ответы:

Активность ферментов можно определить следующими методами:

а) спектрофотометрическими

б) полярографическими

в) титрометрическими

г) потенциометрическими

д)нефелометрическими

 

Тест 10

УСТАНОВИТЕ ПРАВИЛЬНУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ

    Этапы быстрой регуляции ферментов:

а)присоединение эффектора в аллостерический центр фермента

б)изменение конформации активного центра

в)повышение активности фермента

г)образование молекулы эффектора

д)изменение конформации фермента

 

Тест 11

Установите соответствие

(для каждого вопроса-несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз.)

Вид ингибирования       Ингибитор    сукцинатдегидрогеназы

1) обратимое                    а) хлористый кадмий                                                

2) необратимое                 б) йодацетат

                               в) перекись водорода или другой окислитель

                                      г) малонат

                                             д) оксалоацетат

 

Тест 12

УСТАНОВИТЕ ПРАВИЛЬНУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ:

Этапы активации ферментов ионами металлов :

а) повышение активности фермента

б) присоединение металла к молекуле фермента

в) выгодное изменение конформации активного центра

г) повышение внутриклеточной концентрации ионов металлов

д)изменение конформации молекулы фермента

 

 

Тест 13

Выберите все правильные ответы

---

Дата добавления: 2019-02-13; просмотров: 133; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!