Отбор проб биологического материала на наличие возбудителей кожного лейшманиоза
Взятие биологического материала для исследования на кожный лейшманиоз
При подозрении на кожный лейшманиоз исследуют соскоб из инфильтрата вокруг язвы кожи или пунктат инфильтрата, сформировавшегося на месте укуса насекомого (москита). Содержимое из центральной зоны язвы непригодно для диагностического исследования, так как оно состоит из детрита, бактериальных клеток, паразитов и клеток больного.
Взятие материала из инфильтрата кожи проводится с помощью инсулинового (или туберкулинового) шприца. Выбирают более выраженный инфильтрат. Перед взятием материала поверхность кожи вокруг поражения протирают 96°-м этиловым спиртом и дают подсохнуть.
Набирают 0,1 мл физиологического раствора в шприц и вводят его в этот участок инфильтрата, слегка изменяя положение иглы, чтобы легче было оттянуть содержимое инфильтрата в шприц. Затем раскапывают на предметные стекла. На каждого пациента надо брать по 2-3 стекла. На предметных стеклах из содержимого инфильтрата быстро делают мазки шлифовальным стеклом (как при приготовлении мазка крови). Можно наносить капли в середине предметных стекол и быстро размазать их на поверхности. В этом случае получится препарат по типу "толстой капли". Во всех случаях капли должны быть незначительны по объему.
Взятие материала из язвенного поражения кожи проводится с помощью узкого глазного скальпеля. Кожу по краю язвы обрабатывают 96°-м этиловым спиртом и дают подсохнуть. В зоне размягченного участка краевого инфильтрата скальпелем делают прокол глубиной 1,0-1,5 мм и слегка пошевеливают концом скальпеля, чтобы разрушить инфильтрат. Желательно, чтобы на кончике скальпеля была не только кровь, но и мелкие кусочки (1 мм 
) инфильтрата. На чистом стекле быстро размазывают собранное содержимое в виде нескольких штрихов и дают препарату подсохнуть. Подобную процедуру повторяют 2-3 раза, содержимое наносят на то же стекло или свежее.
|
|
|
Подсохшие препараты нумеруют и фиксируют в 96°-м этиловом спирте. Продолжительность фиксации 25-30 мин при комнатной температуре. Далее препараты окрашивают.
Отбор проб биологического материала на наличие возбудителей висцерального лейшманиоза
Отбор проб костного мозга
Пунктат костного мозга берут с помощью иглы Кассирского чаще всего из грудины, особенно у взрослых. У маленьких детей пунктируют пяточную кость, бугорок в верхней части tibia, а также из верхнего края тазовой кости. Обычно берут 5-10 мл костного мозга, чтобы можно было произвести развернутое цитологическое исследование, а также получить сыворотку для серологического и генетического исследования с целью установления этиологии инфекционного заболевания. Все манипуляции при проведении костно-мозговой пункции проводятся гематологом-хирургом при соблюдении режима стерильности.
|
|
|
Мазки готовят сразу же после взятия костного мозга. Важно, чтобы они были тонкими, а также чтобы ширина мазка была уже на 1-2 мм с каждой стороны. Эти требования необходимо выполнять тщательно, так как зараженные клетки крупнее и более тяжелые, они преимущественно располагаются по краям мазка, особенно в "бахромке" - в конце мазка.
Подсохшие препараты нумеруют и фиксируют в 96°-м этиловом спирте. Продолжительность фиксации 25-30 мин при комнатной температуре. Далее препараты окрашивают.
Микроскопические методы исследований на лейшманиозы
Необходимые материалы и оборудование
Материал из инфильтрата кожи
Инсулиновый или туберкулиновый шприц
Физиологический раствор
Глазной узкий скальпель
Этиловый спирт 96°-й
Раствор краски Романовского-Гимза
Дистиллированная вода
Фильтровальная бумага
Мерная лабораторная посуда
Пинцеты
Часы песочные или сигнальные
Специальные контейнеры для окрашивания препаратов крови или стеклянные рельсы и кюветы
|
|
|
Приспособления для высушивания препаратов
Перчатки резиновые
Обезжиренные предметные стекла
Иммерсионное масло
Микроскоп
Окрашивание препаратов можно проводить двумя способами:
препараты с мазками вертикально погрузить в рабочий раствор краски, налитый в специальные ванночки или контейнеры, без соприкосновения друг с другом. Данный способ окраски наиболее приемлем, когда есть необходимость окраски большого количества препаратов. В стандартном контейнере можно окрасить 20 препаратов при вместимости 90 мл краски. Повторное использование краски недопустимо;
препараты расположить горизонтально (мазками вверх) на стеклянных рельсах, лежащих на кюветах. Осторожно нанести краску. Этот способ окраски приемлем при окрашивании небольшого количества препаратов. Расход краски составляет примерно 3 мл на 1 препарат.
Время окрашивания зависит от температуры окружающей среды. При температуре 20-25 °С окрашивать в течение 35-40 мин. При более низкой температуре время окрашивания увеличивается. При очень высокой температуре (30 °С) время окрашивания может быть сокращено до 20 мин.
Результат окрашивания
|
|
|
Правильно окрашенный макроскопический препарат имеет синий цвет с сиреневым оттенком, а при его микроскопии:
ядра лейкоцитов - фиолетово-красного цвета с различимой структурой;
зернистость базофилов - фиолетового цвета;
зернистость эозинофилов - красного цвета;
у моноцитов на фоне серо-голубой цитоплазмы может быть розовая зернистость;
зрелые эритроциты - розового цвета с сероватым оттенком;
ретикулоциты - сиренево-голубые;
тромбоциты - сиренево-розового цвета с различимой сетчатостью.
Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 254; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!