МИКРОХИРУРГИЧЕСКОЕ ДЕЛЕНИЕ ЭМБРИОНОВ
Необходимость быстрого увеличения количества высокоценных в племенном отношении животных дала толчок к поискам новых способов размножения, позволяющих получать относительно однородный в генетическом плане материал.
Используя метод микрохирургического деления эмбрионов представляется возможность получения клонов генетически идентичных животных с заданными хозяйственно-полезными признаками и желаемого пола.
Способ микрохирургического разделения эмбрионов разработан для повышения эффективности трансплантации эмбрионов за счет увеличения эмбриоматериала и состоит из двух этапов.
Первый этап включает в себя гормональную обработку коров-доноров, синхронизацию половых циклов доноров и реципиентов, осеменение доноров, нехирургическое извлечение у них 7-дневных эмбрионов, оценку качества эмбрионов. На втором этапе проводится деление эмбрионов, их кратковременное культивирование и пересадка половинок зародышей реципиентам. Работа на первом этапе ведется согласно методическим рекомендациям Бел НИИЖ (1996г).
Для деления отбираются эмбрионы только хорошего или отличного качества на стадии поздней морулы или бластоцисты, как свежеполученные, так и заморожено оттаянные.
Микроманипуляции на эмбрионах проводятся с помощью микроманипулятора ПМ-2 или манипулятора французской фирмы «JMV» марки REF-4080 в чашке Петри под инвертируемым микроскопом «Labovert» или стереомикроскопом «Nikon».
|
|
|
В качестве рабочего инструмента для деления используется стеклянная микропипетка-игла, изготавливаемая из стандартных капилляров с внутренним диаметром 0,8 мм и внешним 1,2 мм на пуллере отечественного производства по методу Никитина В.А. Оптимальными являются следующие размеры: длина плеча 2,5 мм, конусная часть - 10 мм.
Рабочей поверхностью служит чашка Петри с обрезанным краем. Для фиксации клетки на дно чашки наносятся металлической иголкой штрихи в разных направлениях.
Перед началом работы приготавливаются рабочие среды. Среда на основе фосфатно-солевого раствора Дюльбекко с добавлением 20% эмбриональной сыворотки и антибиотиков (100 ед./мл ампициллина и 12 мкг/мл гентамицина) используется для деления зародышей. Культивирование половинок проводят в среде ТС-199 с добавлением 20% эмбриональной сыворотки плодов коров, антибиотиков ( 100 ед/мл ампициллина или 12 мкг/мл гентамицина), лактата кальция (0,6 мг/мл), пирувата натрия (0,2 мг/мл) и глютамина (0.15 мг/мл).
Деление эмбрионов осуществляют следующим образом. После оценки пригодные для микрохирургии зародыши переносятся в среду Дюльбекко. Затем клетка в капельке среды помещается на подготовленную чашку Петри над штрихами. Над ней размещаю нож таким образом, чтобы плечо ножа не касалось чашки. Угол наклона ножа составляет 5°-25° к рабочей поверхности. Эмбрионы рассекаются опусканием ножа в медиальную плоскость клетки, одновременно разделяя оболочку и внутреннюю клеточную массу. При делении бластоцист необходимо разделять как эмбриобласт, так и трофобласт строго по середине. При проведении микрохирургической операции соблюдаются следующие правила: 1 - микроигла на эмбрион опускается постепенно, с паузами (нажим, пауза, нажим, пауза и т.д.); 2- после начала деления нельзя резко поднимать нож, т.к. клетка находится в напряженном состоянии и резкое поднятие ножа вызывает отрицательное давление, что приводит к гибели клетки. Эмбрионы делят двумя методами. В первом случае эмбрионы рассекаются полностью, полученные половинки в дополнительные зоны пеллюцида не пересаживаются. Во втором случае деление прозрачной оболочки проводится частично, а внутренняя клеточная масса делится полностью. Полученные полуэмбрионы остаются в собственной оболочке. Критерием успешного деления считают минимальное повреждение бластомеров и получение симметричных половин.
|
|
|
Затем полуэмбрионы переносятся в среду для культивирования и помещаются в термостат при температуре +38°С во влажную атмосферу, содержащую 5% СО2 на 0,5-24 часа. Если в результате культивирования эмбрионы округлились, приняв обычную форму, считается, что деление прошло успешно. Их заправляют в пайетты по схеме, изображенной на рисунке 3 (см. приложение), и пересаживают реципиентам.
|
|
|
Пересадка прокультивированных половинок эмбрионов проводится нехирургическим методом по одной половинке в разные рога матки реципиента или обе половинки в один рог матки
ПОЛУЧЕНИЕ ТЕЛЯТ-ДВОЕН У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Увеличение производства продукции животноводства на современном этапе требует привлечения прогрессивных методов ускоренного воспроизводства. В скотоводстве одним из путей увеличения производства продукции, без увеличения маточного поголовья, является получение телят-двоен.
В естественных условиях рождение двоен у крупного рогатого скота имеет весьма ограниченные пределы (0,1-4,5%) и зависит от породы, возраста животных и других факторов.
Повышение числа двойневых отелов возможно путем селекции на многоплодие, гормонального воздействия на организм и трансплантации эмбрионов. Осуществление на практике селекционных программ – дело сложное и требует времени в основном из-за низкого коэффициента наследуемости двойневости (0,012-0,025). Основной проблемой при гормональной стимуляции многоплодия является индивидуальная изменчивость и непредсказуемость овуляторной реакции яичников. Наряду с двойневой стельностью, отмечается трех - , четырех – и более плодные стельности, которые часто оканчиваются абортами.
|
|
|
Наиболее эффективным биотехнологическим методом получения телят-двоен у крупного рогатого скота является трансплантация эмбрионов. Этот метод, прежде всего, позволяет обеспечить билатеральное (т.е. в обоих рогах) размещение эмбрионов в матке реципиента, способствующее благоприятному течению стельности и отелов.
Метод получения двоен включает те же этапы: отбор коров-доноров и реципиентов; гормональная обработка доноров; извлечение эмбрионов, поиск и оценка эмбрионов; подготовка реципиентов к пересадке; пересадка эмбрионов реципиентам.
Отличительными особенностями является то, что в качестве реципиентов необходимо использовать полновозрастных коров живой массой 550-600кг. При проявлении признаков половой охоты параллельно проводится искусственное осеменение и коров-доноров, и реципиентов. На 7-8 день после осеменения в случае наличия в яичнике хорошо выраженного желтого тела реципиентам пересаживают один эмбрион в контрлатеральный рог матки (т.е. в противоположный рогу, смежному с яичником, имеющим желтое тело).
В целом, данный биотехнологический прием позволяет получить до 63,1% стельных коров, из которых 66,6% - стельных двойнями.
Результативность повышается, если осеменение коров-доноров проводить семенем быков не родственных быкам, семенем которых осеменяют реципиентов. В этом случае, трансплантация реципиентам гетерозиготных (неодинаковых по генетическим задаткам) эмбрионов относительно собственных обеспечивает стельность в 72,2% случаев, при этом двойневые стельности составляют 70,8%.
Диагностирование стельности ректальным методом необходимо проводить спустя 2-3 месяца после осеменения и эмбриопересадок. При наличии у коров флюктуации околоплодной жидкости в обоих рогах матки и относительно равных их размерах велика вероятность стельности двумя плодами. У коров с двойневой стельностью, особенно в заключительный период, повышаются обменные процессы и усиливается перенос питательных и биологически активных веществ к развивающимся плодам. Поэтому таким животным необходимо обеспечить полноценное кормление в сухостойный период, который, независимо от продуктивности, должен составлять не менее 60 дней.
Следует учитывать тот факт, что отелы двойней в 2-3 раза чаще, чем одинцом, сопровождаются оперативным родовспоможением, главным образом, из-за одновременного вступления плодов в родовые пути коровы. Отёлы у коров должны проходить в родильном отделении под наблюдением ветспециалистов.
В связи с тем, что телята-двойни из-за более низкой живой массы при рождении (на 20-30% ниже живой массы одинцового теленка) характеризуются невысокой жизнеспособностью, то рекомендуется в зимне-стойловый период проводить внутримышечные инъекции эмульсии тетравит+АСДф-2 коровам, вынашивающим два плода, на 170, 200, 230, 260 дни стельности в дозе 15 мл+4 мл и, дополнительно, внутримышечные инъекции эмульсии данных препаратов их двойневому потомству на 15, 30, 45, 60 и 75 дни после рождения в дозе 2,5мл+0,5мл. Это позволяет на протяжении первых 90 дней выращивания телят-двоен довести их сохранность до 95%.
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 341; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!