Схема синхронизации половых циклов доноров и реципиентов
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
АКАДЕМИЯ АГРАРНЫХ НАУК РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
БЕЛОРУССКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА
БИОТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ И ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
(Методические рекомендации)
ЖОДИНО- 2004
Методические рекомендации подготовили:
В.С. Антонюк, И.И. Будевич, Н.Ф. Жук, А.И. Будевич, Л.Л. Леткевич, А.И. Ганджа, Л.В. Голубец, О.А. Шпаковская, Е.Н. Жук, Д.Н. Воробьев, Ф.Ф. Богуш, А.А. Козел, В.П. Симоненко.
Одобрены научно-методическим советом по разведению и селекции сельскохозяйственных животных (протокол №12 от 9 октября 2000 г.).
Одобрены Ученым советом БелНИИЖ (протокол № 21 от 14 ноября 2000 г.).
В рекомендациях изложена биотехнология получения, пересадки, криоконсервирования, микрохирургического деления эмбрионов, оценки качества ооцитов и получения эмбрионов вне организма.
Методические рекомендации рассчитаны на специалистов центров, пунктов трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, а также в качестве учебного пособия для студентов сельскохозяйственных вузов и техникумов.
Белорусский научно-исследовательский институт животноводства
Жодино 2000
ВВЕДЕНИЕ
Технология трансплантации эмбрионов включена в долгосрочные племенные программы многих развитых стран мира по разведению, улучшению и сохранению существующих пород молочного и мясного скота. Принятый закон о племенном деле в животноводстве Республики Беларусь предусматривает расширение объемов размножения крупного рогатого скота с высокими показателями продуктивности.
|
|
|
Углубленные исследования репродуктивной функции животных, ее возможная регуляция, микрохирургические манипуляции с зародышами показали, что метод трансплантации может являться основой ускоренного воспроизводства высокопродуктивных коров и целых популяций. Практическое применение этого метода в молочном и мясном скотоводстве обеспечивает интенсивное размножение животных с высокой генетической ценностью, ускоренное получение высокоценных племенных быков, матерями которых являются выдающиеся родоначальницы, способствует повышению эффективности племенной работы, оздоровлению стад от ряда заболеваний. Трансплантация эмбрионов позволяет быстро размножить импортируемых животных. Кроме того, ввозить зародыши гораздо дешевле, чем животных. Разработанная технология криоконсервирования эмбрионов обеспечивает длительное их хранение и создание криобанка зародышей выдающихся животных. В товарных стадах трансплантация эмбрионов дает возможность увеличить выход телят за счет получения двоен от пересадки или подсадки эмбрионов, а также производства телят мясных пород, используя молочных коров.
|
|
|
Таким образом, трансплантация эмбрионов играет важную роль в молочном и мясном скотоводстве республики, и ее значение будет постоянно возрастать, т.к. она позволяет лучше использовать биологические резервы самок для увеличения производства продуктов животноводства.
СТРУКТУРА И ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТ ПО БИОТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ И ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Залогом успешной работы по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота являются: выбор правильной структуры управления и формы организации работ по трансплантации, наличие современного оборудования, инструментария, эффективных биопрепаратов, создание условий при проведении работ, обслуживание центровили пунктов трансплантации высококвалифицированными специалистами.
В нашей республике сложилась следующая структура управления работой по биотехнологии получения и трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота:
1. Головным заказчиком, финансирующим и доводящим задания до исполнителя, выступает Минсельхозпрод, Государственная служба по племделу в животноводстве и НАН Беларуси.
|
|
|
2. Головное предприятие – БелНИИЖ осуществляет научно-методическую и практическую помощь в организации работ по трансплантации в республике, обеспечивает создание криобанка эмбрионов, а в перспективе распределение эмбриобанка по областям согласно заявкам, ведет подготовку и обучение кадров для трансплантации, осуществляет и координирует всю научно-методическую работу в республике.
3. Областные центры (пункты) трансплантации (где сосредоточено поголовье высокоценных коров) выступает в роли основного исполнителя. Их функция - получение быков-производителей, эмбриоматериала с последующей пересадкойили замораживанием.
Центрили пункт трансплантации включает следующие помещения: операционную (для извлечения и пересадки эмбрионов), стерильный бокс с предбоксником, криогенную, хранилище для эмбрионов, моечную, загон для животных, комнату для хранения препаратов, раздевалку, комнату для персонала, санузел, душевую.
Многолетний опыт нашей работы показал, что более приемлемы на практике две формы организации работ по трансплантации:
1. Стационарная - все работы (отбор коров-доноров, реципиентов, гормональная обработка доноров, синхронизация охоты у реципиентов, искусственное осеменение доноров, извлечение, оценка, пересадка, криоконсервирование эмбрионов) по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота проводятся в условиях центра или пункта, имеющих свои стада доноров и реципиентов.
|
|
|
2. Смешанная - включает работу, связанную с отбором, подготовкой доноров и реципиентов для трансплантации, которая выполняется специалистами центра или пункта. Извлечение, оценка, пересадка и криоконсервирование эмбрионов проводится учеными и специалистами лаборатории трансплантации эмбрионов с.-х. животных БелНИИЖа.
ЕСТЕСТВЕННЫЙ ПОЛОВОЙ ЦИКЛ И ЕГО ОСОБЕННОСТИ У САМОК КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Функциональная деятельность воспроизводительной системы половозрелой коровы при отсутствии стельности и патологических изменений характеризуется ярко выраженной периодичностью.
Началом полового цикла принято считать день наступления охоты, окончанием - начало следующего цикла. Продолжительность его составляет в среднем 21 сутки с колебаниями от 17 до 24 суток. В течение каждого полового цикла происходит созревание фолликула, разрыв его и выделение яйцеклетки (овуляция), образование желтого тела, а также его рассасывание. Половой цикл можно разделить на 4 периода: проэструс, эструс, метаэструс и диэструс. Проэструс или предтечка длится двое-трое суток и характеризуется повышением в организме уровня ФСГ, под его воздействием усиливается рост фолликулов, которые в свою очередь увеличивают выработку эстрагенов. Под их влиянием усиливается кровоснабжение отдельных половых органов, слизистая влагалища и шейки матки набухают, начинается выделение слизи цервикальным каналом, наступает эструс. Эструс характеризуется проявлением охоты и связан с окончательным созреванием фолликулов, продолжается в среднем 17 часов с колебаниями от 6 до 30 часов. Через 12 часов после окончания охоты наступает овуляция. Метаэструс,или послетечка, продолжается 3 дня и характеризуется прекращением выработки яичниками эстрагенов. В результате чего уменьшается гиперемия, набухание и ослизнение вульвы, влагалища и шейки матки. Овулировавший фолликул начинает превращаться в желтое тело. Эта фаза цикла продолжается около 2 суток. В диэструс или лютеиновую фазу полностью развивается желтое тело. Этот период наиболее продолжительный (15 дней). Желтое тело выделяет гормон прогестерон, под воздействием которого эндометрий матки развивается для поддержания беременности. Если беременность не наступает, желтое тело функционирует 17-19 дней, потом дегенерирует.
При проведении работ по трансплантации эмбрионов необходимо учитывать факторы, связанные с индивидуальными особенностями воспроизводительной функции мясных животных.
У большинства мясных пород наблюдается выраженная сезонность размножения, что связано, прежде всего, с физиологической необходимостью рождения потомства в оптимальные сроки. В условиях Белоруссии при естественном осеменении отел коров происходит в основном в марте-апреле. Естественный половой цикл у коров в среднем составляет 21 день, с колебаниями от 17 до 24 дней. Охота у мясных коров менее выражена и продолжительнее, чем у молочных. Длительность охоты увеличивается в пастбищный период. Продолжительность восстановления полового цикла после отела связана с постоянным присутствием теленка на подсосе. Совместное содержание коровы и теленка тормозит четкое проявление половых рефлексов и функции яичников через нейрогуморальную систему, особенно при недостаточном уровне кормления. При неполноценном кормлении и неудовлетворительных условиях содержания животных изменяется характер синтеза и секреции половых гормонов, что ведет также к нарушению овариальной активности яичников.
Известно, что у 70% мясных коров после отела овуляции происходят без признаков охоты. Подсосные коровы приходят в охоту на 5-6 недель позже, чем дойные. Основными причинами задержки охоты у мясных коров являются субинволюция матки, персистенция желтых тел после отела и гипофункция яичников. Первая стадия гипофункции характеризуется уменьшенным размером яичников, отсутствием фолликулов и наличием еще не полностью атрезированного желтого тела. Клинически период анэструса может длиться 2-2,5 месяца. Вторая стадия характеризуется уменьшенным размером яичников (до 5-7 мм), отсутствием фолликулов и следов желтого тела. Состояние половой депрессии продолжается 3-4 месяца. Длительное бесплодие мясного скота устраняется ранним или временным (на 48 часов) отъемом телят. При временном отъеме телят основная масса коров приходит в охоту в течение трех недель, что повышает оплодотворяемость коров и уменьшает продолжительность сервис-периода.
ОТБОР КОРОВ-ДОНОРОВ И РЕЦИПИЕНТОВ ДЛЯ ЭМБРИОТРАНСПЛАНТАЦИИ
Эффективность применения метода трансплантации эмбрионов во многом зависит от клинического и физиологического состояния коров, их способности реагировать на экзогенные гонадотропины и продуцировать достаточное число качественных зародышей. Следовательно, одним из наиболее существенных моментов в технологии трансплантации эмбрионов, способных повысить эффективность метода, является отбор доноров и реципиентов.
Исходя из того, что донор – животное высокой племенной ценности, первое, на что обращают внимание при его отборе, - это молочная продуктивность, которая за ряд лактаций должна быть на 50-60% выше стандарта данной породы, а содержание жира в молоке - на 20% и более. Число учитываемых признаков может быть расширено в зависимости от поставленных селекционных целей. Например, содержание белка в молоке, пригодность к машинному доению (форма вымени, скорость молокоотдачи), крепость конституции, экстерьер и др. Племенная ценность донора, наряду с оценкой собственного генотипа, должна подтверждаться продуктивностью родителей. Коровы-доноры должны иметь известное происхождение, подтвержденное документально по системам групп крови. В большинстве случаев в качестве доноров используют лактирующих или выбракованных коров (не связанных с гинекологической патологией) в возрасте от 4 до 8 лет, живой массой 500-650 кг, с удоем по наивысшей лактации не ниже 7 тыс. кг молока жирностью 3,7% и более.
Важным фактором при отборе доноров является состояние репродуктивных органов коров. Поэтому для гормональной обработки следует отбирать животных не ранее,чем через 2,5 - 3 месяца после отела. При этом уменьшение размеров матки коров до физиологически необходимых размеров не может служить гарантией готовности донора продуцировать эмбрионы высокого качества. Такой гарантией может быть только проведение клинического обследования предполагаемого донора.
Одним из дополнительных критериев отбора животных для трансплантации эмбрионов является определение гормонального статуса и биохимических показателей крови на 6-7-й дни спонтанногоили синхронизированного полового цикла доноров и реципиентов. Кровь на анализ берут у самок при наличии на одном из яичников хорошо выраженного желтого тела (диаметр 1,0-1,5 см). В качестве доноров используют животных с концентрацией прогестерона в плазме крови от 2,4 до 2,8 нг/мл, общего холестерина - 127,0-155,0 мг%, общего белка - 7,3-6,0 г% и активностью щелочной фосфатазы - 1,03-1,12 мкмоль/л.
Целесообразно проводить разовую индукцию полиовуляции потенциальных доноров с целью выяснения ответной реакции яичников на введение гонадотропина, после чего делается окончательное заключение о пригодности животного к использованию в технологии трансплантации. Коровы и телки с положительной ответной суперовуляторной реакцией (10 и более овуляций), давшие не менее 4-х жизнеспособных эмбрионов за первую обработку, переводятся в группу постоянных доноров.
В качестве реципиентов используют клинически здоровых телок, не представляющих племенной ценности, в возрасте 16-18 месяцев и живой массой 380-400 кг при работе с молочным скотом и 450-500 кг при работе с мясными породами, а также коровы после 2-4 отела, но не ранее, чем через 1,5-2 месяца после отела. В случае малого количества реципиентов мясных пород можно использовать коров черно-пестрой породы после 2-4 лактаций, а так же телок случного возраста живой массой не ниже 400-420 кг. Не рекомендуется использовать в качестве реципиентов телок с низкой живой массой.
Объективным критерием готовности реципиента к восприятию зародыша является уровень гормональных и биохимических показателей крови. Пересадку эмбрионов проводят реципиентам с содержанием прогестерона в крови от 2 до 3,9 нг/мл, холестерина – 110 мг%, железа - 29,19 мг%.Как доноров, так и реципиентов желательно отбирать с генотипами по трансферриновому локусу АА и АД.
Кормление доноров и реципиентов должно быть биологически полноценным. Недостаточный уровень кормления, несбалансированность рациона по общей питательности и другим жизненно важным элементам, использование кормов низкого качества ведут к нарушению обмена веществ, что оказывает отрицательное влияние на эффективность гормонального вызывания суперовуляции, качество получаемых эмбрионов и их приживляемость.
ГОРМОНАЛЬНАЯ ИНДУКЦИЯ ПОЛИОВУЛЯЦИИ У КОРОВ-ДОНОРОВ
Процесс воспроизводства основывается на комплексе биологических и физиологических закономерностей. В результате сложного взаимодействия между нервной и гуморальной системами создается сложный регулирующий механизм (нейроэндокринная система) управления функцией размножения. В настоящее время разработаны и внедрены в практику биологические методы воздействия на процесс воспроизводства и его управление. Одним из таких методов является гормональная стимуляция множественной овуляции яичников.
Для вызывания суперовуляции у крупного рогатого скота используются гонадотропные препараты (гонадотропин сыворотки жеребых кобыл - ГСЖК и фолликулостимулирующий гормон - ФСГ - гипофиза животных), для синхронизации половых циклов - аналоги простагландина Ф2-альфа (эстрофан, магэстрофан, клопростенол, суперфан, ремофан, клатрапростин, эстуфалан и др.). Применяется также французский метод синхронизации охоты, который включает использование специальных пролонгирующих имплантантов, пропитанных прогестероном или его аналогом «синхроматом-В» и аналогом простагландина Ф2-альфа - прозольвином.
Препараты ГСЖК обладают комплексной фолликулостимулирующей и лютеинизирующей активностью. Период полураспада экзогенного ГСЖК у коров составляет около 6 дней. Соотношение ФСГ и ЛГ в различных партиях неодинаковое, что отрицательно влияет на результативность суперовуляции. Стимуляция роста фолликулов препаратами ГСЖК сопровождается, как правило, увеличением массы яичников, образованием после овуляции разного числа и величины желтых тел. Из-за длительного распада ГСЖК в крови животных накапливаются повышенные концентрации гормонов. Изменение эндокринного статуса при индукции суперовуляции может оказывать неблагоприятное действие на оплодотворяемость яйцеклеток, развитие зародышей, а также на физиологическое состояние половых органов (в частности, наблюдается кистозное перерождение яичников).
Для исключения длительной стимуляции роста фолликулов применяется анти-СЖК. Обработка антисывороткой в день проявления охоты нейтрализует циркулирующую в крови животных ГСЖК и тем самым прекращает дальнейшую стимуляцию роста фолликулов в яичниках. Это создает более благоприятный фон для овуляции, оплодотворяемости яйцеклеток и последующего развития зародышей. В практике используются стандартные гонадотропные препараты высокой степени очистки: сергон (Чехия), фоллигон (Голландия), прегмагон (Германия). Для вызывания суперовуляции используется ГСЖК по схемам (таблицы 1, 2)
Применение этих схем обработки обеспечивает вызывание множественной овуляции у 75-78% животных и получение в среднем 3,5-4,0 жизнеспособных эмбриона на донора.
Для вызывания суперовуляции у коров используются также гипофизарные препараты. Основное физиологическое действие фолликулостимулирующих гормонов заключается в стимуляции роста и созревания фолликулов яичника, образования фолликулярных гормонов (эстрагенов), регулирующих процесс течки. Лютеинизирующий гормон совместно с фолликулостимулирующим вызывает овуляцию и стимулирует образование желтого тела.
Таблица 1
Схема обработки коров-доноров сергоном
| День полового цикла | Препарат | Время введения | Доза |
| 0-й | Охота донора | ||
| 11-12-й | Сергон | 800ч. | 2500-3000МЕ |
| 13-14-й | Эстрофан | 800ч. | 750 мкг |
| 15-16-й (охота) | Диригестран | 800ч. | 200 мкг |
| 0-й день цикла | Осеменение | 2000ч. | - |
| I-й день цикла | Осеменение | 800ч. | - |
| 7-й день цикла | Извлечение эмбрионов | ||
Таблица 2
Схема обработки коров-доноров прегмагоном
| День полового цикла | Препарат | Время введения | Доза |
| 0-й | Охота донора | ||
| 11-12-й | Прегмагон | 800ч. | 2500-3000 МЕ |
| 13-14-й | Эстрофан | 800ч. | 750 мкг |
| 15-16-й (охота) | Анти-СЖК | 1600ч. | 600 МЕ |
| 0-й день цикла | Осеменение | 1900ч. | - |
| I-й день цикла | Осеменение | 700ч. | - |
| 7-й день цикла | Извлечение эмбрионов | ||
Желтое тело само выполняет функцию гормональной железы и вырабатывает гормон прогестерон, который обеспечивает сохранение беременности. В практике используются гипофизарные препараты производства США (ФСГ-п), России (ФСГ-супер), Чехии (фолликотропин) и др. (таблицы 3,4,5).
В отличие от ГСЖК, препараты ФСГ вводятся многократно, так как период полураспада ФСГ очень короткий (5-6 ч). Применение ФСГ в сочетании с простагландинами обеспечивает получение 5-6,0 жизнеспособных эмбрионов и 10-12 овуляций на донора. Общая доза ФСГ-п - 40-50 мг, интервал между инъекциями – 12 часов.
Таблица 3
Схема обработки коров-доноров ФСГ-п
| День полового цикла | ФСГ-п (40 мг) | ФСГ-п (50 мг) | ||
| 800ч. | 2000ч. | 800ч. | 2000ч. | |
| 0-й | Охота донора | Охота донора | ||
| 10-11-й | 7 | 7 | 8 | 8 |
| 11-12-й | 6 | 6 | 7 | 7 |
| 12-13-й | 4 | 4 | 6 | 6 |
| эстрофан 500 мкг | эстрофан 250 мкг | эстрофан 500 мкг | эстрофан 250 мкг | |
| 13-14-й | 3 | 3 | 4 | 4 |
| 14-15-й (охота) 0-й день цикла | - | Осеменение | - | Осеменение |
| 1-й день цикла | Осеменение | - | Осеменение | - |
| 7-й день цикла | Извлечение эмбрионов | |||
Таблица 4
Схема обработки коров-доноров ФСГ-супер
| День полового цикла | ФСГ-супер (50 ЕД по Арм. станд.) 8 инъекций | ФСГ-супер (50 ЕД по Арм. станд.) 7 инъекций | ||
| 800ч. | 2000ч. | 800ч. | 2000ч. | |
| 0-й | Охота донора | Охота донора | ||
| 10-11-й | 9 | 9 | 9 | 9 |
| 11-12-й | 8 | 8 | 8 | 8 |
| 12-13-й | 5 | 5 | 5 | 5 |
| эстрофан 500 мкг | эстрофан 250 мкг | эстрофан 500 мкг | эстрофан 250 мкг | |
| 13-14-й | 3 | 3 | 6 | - |
| 14-15-й (охота) 0-й день цикла | - | Осеменение | - | Осеменение |
| 1-й день цикла | Осеменение | - | Осеменение | - |
| 7-й день цикла | Извлечение эмбрионов | |||
Таблица 5
Схема обработки коров-доноров фолликотропином
| День полового цикла | Препарат | Фолликотропин 480 МЕ | |
| 800ч. | 2000ч. | ||
| 0-й | Охота донора | ||
| 10-11-й | Фолликотропин | 80 | 80 |
| 11-12-й | Фолликотропин | 70 | 70 |
| 13-14-й | Фолликотропин | 50 | 50 |
| Эстрофан | 500 мкг | 250 мкг | |
| 14-15-й (охота) | Фолликотропин | 40 | 40 |
| 0-й день цикла | Осеменение | ||
| 1-й день | - | Осеменение | - |
| 7-й день цикла | Извлечение эмбрионов | ||
Совершенствование схем индукции полиовуляции у коров-доноров требует изыскания новых подходов к решению этой проблемы, разработки эффективных препаратов, позволяющих получать хорошие результаты по выходу эмбриопродукции.
Изучена эффективность гонадотропина ФСГ-Б, полученного в лаборатории генетики БелНИИЖ, и рекомендуется для практики следующая схема его применения (таблица 6).
Таблица 6
Схема обработки коров-доноров ФСГ-Б
| День полового цикла | ФСГ-Б - 1500 ЕД | ФСГ-Б - 1650 ЕД | ||
| 800ч. | 2000ч. | 800ч. | 2000ч. | |
| 0-й | Охота донора | Охота донора | ||
| 10-11-й | 240 | 240 | 260 | 260 |
| 11-12-й | 210 | 210 | 240 | 240 |
| 12-13-й | 180 | 180 | 200 | 200 |
| эстрофан 500 мкг | эстрофан 250 мкг | эстрофан 500 мкг | эстрофан 250 мкг | |
| 13-14-й | 120 | 120 | 125 | 125 |
| 14-15-й Охота 0-й день цикла | - | осеменение | - | осеменение |
| 1-й день цикла | осеменение | - | осеменение | - |
| 7-й день цикла | Извлечение эмбрионов | |||
Инъекция гонадотропина ФСГ-Б по предложенной схеме позволяет получать в среднем на донора 9-10 овуляций, 7,2-8,1 эмбриона, втом числе 5,2-5,5 полноценных.
В то же время использование вышеперечисленных гонадотропинов при индукции полиовуляции не исключают образования на яичниках неовулировавших фолликулов, наличие которых может привести к нарушениям гормонального статуса доноров. С целью исключения длительной стимуляции роста фолликулов и наступления равномерной овуляции рекомендуются синтетические аналоги гонадотропин рилизинг-гормона (Гн-РГ). Инъекция донору Гн-РГ в день охоты способствует выделению лютеинизирующего гормона и овуляции фолликулов в фиксированное время (таблица 7).
Таблица 7
Схема индукции полиовуляции с использованием Гн-РГ сурфагона
| День полового цикла | Время введения препарата, ч. | Препараты, доза | ||
| ФСГ-п, 40мг | ФСГ-Б, 1500 ЕД | ФСГ-супер (50 ЕД по Арм. танд.) | ||
| 10-11-й | 800 2000 | 7 7 | 240 240 | 9 9 |
| 11-12-й | 800 2000 | 6 6 | 210 210 | 8 8 |
| 12-13-й | 800 | 4+500мкг эстрофан | 180+500мкг эстрофан | 5+500 мкг эстрофан |
| 2000 | 4+250мкг эстрофан | 180+250мкг эстрофан | 5+250 мкг эстрофан | |
| 13-14-й | 800 2000 | 3 3 | 120 120 | 3 3 |
| 14-15-й (охота) 0-й день цикла | 800 сурфагон | 20мкг | 20мкг | 20мкг |
| 2000 сурфагон | 20мкг | 20мкг | 20мкг | |
| 2000 Осеменение | ||||
| 1-й день цикла | 800 Осеменение | |||
| 7-й день цикла | Извлечение эмбрионов | |||
Многолетний опыт нашей работы показал, что инъекция Гн-РГ в 2-3 раза снижает число неовулировавших фолликулов, повышает на 6-9% количество овуляций и на 11-19% число эмбрионов, пригодных к пересадке, в расчете на одного донора.
СИНХРОНИЗАЦИЯ ПОЛОВЫХ ЦИКЛОВ ДОНОРОВ И РЕЦИПИЕНТОВ
Синхронность проявления эструса между донором и реципиентом - важнейшее условие высокой приживляемости эмбрионов. Для синхронизации охоты используют простагландин ПГФ2-альфа или его синтетические аналоги (эстрофан, магэстрофан, ремофан, клопростенол, клатрапростин, суперфан, эстуфалан и др.).
По технологии трансплантации на каждого донора следует подготавливать не менее 5 реципиентов, причем день охоты реципиента должен совпадать с днем первого осеменения суперовулирующего донора. В случае использования в технологии трансплантации постоянных доноров (проверенных на гормональную обработку и имевших стабильный выход качественных эмбрионов) число реципиентов можно увеличить до 10.
Перед гормональной обработкой животных исследуют ректально (определяют размеры и форму яичников, наличие и выраженность желтого тела). Лютеиновая фаза цикла соответствует оптимальному времени для инъекции препаратов. Простагландины вводят внутримышечно в дозах, указанных в наставлениях по их применению. Как правило, животные приходят в охоту через 48-72 часа после инъекции препарата. Не пришедших в охоту животных обрабатывают повторно через 10-11 дней с момента первого введения ПГФ2-альфа. Двукратное введение препарата (в любую фазу полового цикла) с 10-ти дневным интервалом эффективно использовать на большом поголовье доноров и реципиентов, так как это способствует увеличению числа животных, проявивших признаки половой охоты, и снижает трудоемкость операций обслуживающего персонала.
Эффективен способ синхронизации эструса у доноров и реципиентов путем комплексного использования в лютеиновой фазе полового цикла инъекций гонадотропина с простагландином Ф2a и гонадотропин рилизинг-гормоном. Животных, имеющих хорошо выраженное желтое тело, обрабатывают ФСГ-супер в общей дозе 10 Арм.ед. для телок и 15 Арм.ед. для коров двукратно по 5-7,5 Арм.ед. через 12 часов, на следующий день однократно инъецируют эстрофан по 500 мкг, а через 60 часов от момента введения эстрофана дополнительно сурфагон по 25 мкг. Следует учитывать, что данные обработки осуществляются не параллельно: доноров обрабатывают за 15 дней до начала стимулирования суперовуляции, а реципиентов – на второй день после начала стимулирования суперовуляции у доноров. Последовательность действий изложена в схеме подготовки животных (табл. 8).
Ввиду слабой выраженности охоты и течки у мясных животных, а также частой встречаемости коров с гипофункцией яичников рекомендуется комплексное применение аналогов простагландина Ф2-альфа с фолликулостимулирующими гормонами: ФСГ (США) в дозе 10 мг для коров и 7 мг для телок, или с сывороточным гонадотропином (сергон, Чехия) в дозе 1000 ИЕ для коров и 700 ИЕ для телок. Внутримышечное введение гонадотропинов осуществляется за 24-48 часов до инъецирования простагландина Ф2-альфа соответственно. В отдельных случаях для точного установления охоты у мясных коров необходимо ректальное обследование.
Таблица 8.
Схема синхронизации половых циклов доноров и реципиентов
| Фаза полового цикла, день обработки | Препарат | Время и доза | |
| Телки-реципиенты | Коровы-доноры | ||
| Лютеиновая фаза 1 день | ФСГ-супер | 800 – 7,5 Арм.ед. 2000 -7,5 Арм.ед. | |
| 2 день | ПГФ2a | 800 – 500 мкг | |
| Фолликулярная фаза 4 день | Гн-РГ (сурфагон) | 800 - 2000, контроль охоты 1500 – 25 мкг | |
| 5 день | 800 - 2000, контроль охоты | ||
| Лютеиновая фаза 15 день | ФСГ-супер | 800 – 9 Арм.ед. 2000 -9 Арм.ед. | |
| 16 день | ФСГ-супер | 800 – 5 Арм.ед. 2000 -5 Арм.ед | 800 – 8 Арм.ед. 2000 -8 Арм.ед |
| 17 день | ФСГ-супер, эстрофан | 800 – 500 мкг | 800 – 5 Арм.ед., 500 мкг 2000 -8 Арм.ед., 250 мкг |
| 18 день | ФСГ-супер | 800 – 3 Арм.ед. 2000 -3 Арм.ед | |
| Фолликулярная фаза 19 день | Гн-РГ (сурфагон) | 800 - 2000, контроль охоты 1500 – 25 мкг | 800 – осеменение, 20 мкг 2000 - осеменение, 20 мкг |
| 20 день | 800 - 2000, контроль охоты | 800 – осеменение | |
| Лютеиновая фаза 26 день | Пересадка эмбрионов | Извлечение эмбрионов | |
ОСЕМЕНЕНИЕ КОРОВ-ДОНОРОВ
Эффективность искусственного осеменения коров-доноров в суперовулирующую охоту во многом зависит от правильности выбора оптимального времени для осеменения коров с учетом таких особенностей эструса, как проявление течки, ее интенсивность и длительность, общая реакция возбуждения, охоты и овуляции, качество используемой спермы быков-производителей, а также строгого соблюдения ветеринарно-санитарных требований при выполнении работ.
Течка у коров характеризуется набуханием и покраснением слизистых преддверия влагалища и шейки матки, выделением слизи из половых органов. Длительность течки составляет от 2 до 6 суток. Через 24-36 часов после начала течки наступает общее возбуждение, животное теряет аппетит, снижает удой, становится беспокойным, прыгает на других животных. Через 6-12 часов, после того как у коровы появились признаки возбуждения, наступает охота, которая продолжается 12-18 часов.
У мясного скота продолжительность течки колеблется в пределах от 21 до 44 часов, охота длится от 7 до 12 часов, овуляция наступает через 20-25 часов от начала и 10-15 часов после окончания охоты.
Выявление животных в охоте проводят не реже трех раз в день при активных прогулках или пастьбе. В суперовулирующий цикл 60-70% коров приходит в охоту утром, 10% - в полдень и 20-30% вечером. Продолжительность каждого наблюдения составляет 1-2 часа. Охоту считают установленной, если корова не менее двух раз подряд проявила рефлекс неподвижности.
При осеменении необходимо учитывать тот факт, что овуляция наступает через 10-15 часов после окончания охоты, а яйцеклетки при выходе из фолликулов в рог матки способны сохранять жизнеспособность только в течение 5-6 часов, поэтому осеменять коров следует перед овуляцией, как можно ближе к ее началу.
Сроки осеменения коров можно определить и ректально. За 6-12 часов до овуляции в яичнике присутствует зрелый фолликул, представляющий собой пузырек размером 1,5-1,8 см, при осторожном надавливании на который ощущается зыбление.
Осеменение доноров осуществляют ректоцервикальным способом, позволяющим контролировать состояние половых органов самки, дважды в день двойной дозой спермы в тело матки с применением стерильных инструментов одноразового пользования. В каждой дозе должно быть не менее 30 млн. подвижных спермиев. Первое осеменение проводят после установления охоты, второе - через 10-12 часов. При необходимости (длительная охота) осеменение повторяют 3-4 раза. Используется только сперма с высокой оплодотворяющей способностью и хорошего качества. Иногда для повышения результативности осеменения используется семя двух быков. Достоверно не известны причины этого. Однако существует мнение, что происходит отбор наиболее жизнеспособных мужских гамет, обладающих высокой оплодотворяющей способностью.
При введении инструмента в цервикальный канал сперму следует впрыскивать медленным нажатием на поршень катетера, распределяя ее равномерно на протяжении всего канала шейки матки. Допускается легкий массаж шейки и рогов матки. Для большинства животных мясного скота характерен легковозбудимый тип нервной деятельности. Поэтому, при искусственном осеменении следует создавать спокойную обстановку с целью снятия стрессового воздействия на животное. В случае если донор ведет себя неспокойно, проводят внутримышечную инъекцию 2%-го аминазина из расчета 0,05 г на 100 кг живой массы. После осеменения коров-доноров необходимо выдержать в стойле до прекращения признаков охоты.
КОНТРОЛЬ РЕАКЦИИ ЯИЧНИКОВ
Контроль реакции яичников проводится с целью определения готовности донора к извлечению эмбрионов, а также для ориентировочного определения возможного количества эмбрионов, что дает возможность вести контроль за качеством извлечения и планировать дальнейшую работу. Подсчет желтых тел и фолликулов у доноров проводят непосредственно перед извлечением эмбрионов путем ректальной пальпации яичников. При этом следует учитывать, что полноценное желтое тело представляет собой бугорок грибовидной формы с углублением в центре и твердый на ощупь. Фолликулы не так резко выступают над яичником, округлые по форме. При пальпации чувствуется флуктуация фолликулярной жидкости. У доноров, у которых желтые тела отсутствуют или их насчитывается не более двух, извлечение эмбрионов не проводят.
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 1117; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!